梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠抑郁樣行為的誘導(dǎo)作用

程 濤，張青杰，鄭天歌，李云峰，梁建輝

（1.北京大學(xué)藥學(xué)院分子與細(xì)胞藥理學(xué)系，北京 100083；2.軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學(xué)國家重點實驗室，北京 100850）

抑郁癥是最常見的情緒障礙之一，嚴(yán)重影響患者的日常生活。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，目前全球抑郁癥患病率4.35%，且呈升高趨勢。1991-2001年，美國成年人抑郁癥患病率從3.33%上升至7.06%，中國抑郁癥的終生患病率也高達(dá)6.8%[1-2]。抑郁癥確切的病因迄今尚不明確，臨床治療效果不理想，是值得關(guān)注和解決的醫(yī)療問題。

眾所周知，一個新藥從化合物發(fā)現(xiàn)到臨床Ⅲ期試驗結(jié)束往往需要10余年[3]，且研發(fā)成本逐年增高，已由2003年約8億美元上升至2013年約13億美元[4-5]。新藥研發(fā)過程中，臨床試驗成本最高，風(fēng)險也最大，可靠的臨床前藥效學(xué)評價可降低藥物臨床試驗失敗的風(fēng)險。動物模型對藥效的評價是臨床前研究非常重要的一個環(huán)節(jié)，簡單易用、便于觀察、穩(wěn)定可靠的動物模型在抑郁障礙治療藥物的研發(fā)中不可或缺。

長期以來，缺乏更好的抑郁模型一直是限制抑郁癥相關(guān)研究的難題之一。早在21世紀(jì)初，建立和開發(fā)更好的抑郁動物模型就被推薦為美國精神衛(wèi)生研究所（National Institute of Mental Health，NIMH）在抑郁癥研究領(lǐng)域最優(yōu)先的發(fā)展方向[6]。根據(jù)相關(guān)理論和原理，目前已開發(fā)和建立多種抑郁障礙動物模型，用來研究抑郁的病理生理過程，篩選和評價抗抑郁藥物的藥理活性，探討其藥理學(xué)作用機制。這些動物模型具有各自的優(yōu)勢，同時也存在明顯的缺陷。強迫游泳實驗和懸尾實驗屬于經(jīng)典的行為絕望類抑郁動物模型。此類實驗?zāi)Ｐ痛嬖诘膯栴}是刺激過于劇烈，對于較輕度的抑郁敏感性差，且單次給藥即可產(chǎn)生抗抑郁樣活性，這與臨床起效時間并不一致。另外，動物不動狀態(tài)產(chǎn)生的原因仍存在爭議，疲勞、適應(yīng)或抑郁均有可能導(dǎo)致動物不動狀態(tài)的出現(xiàn)，甚至有研究人員認(rèn)為不動時間不能反映動物抑郁樣情緒[7]。動物對糖水的飲用存在明顯的嗜好，抑郁狀態(tài)時，動物對糖水甜味的快感缺乏，其嗜好程度明顯降低。因此，飲糖偏愛實驗主要用來評價動物的抑郁情緒。實驗前，動物的飲糖行為需要訓(xùn)練，其飲糖偏愛率并不是非常穩(wěn)定，經(jīng)常出現(xiàn)忽高忽低的情況，對后續(xù)實驗產(chǎn)生不利影響。禁食禁水是飲糖偏愛實驗不可缺少的環(huán)節(jié)，而禁食禁水本身就是一種應(yīng)激刺激和應(yīng)激過程，對實驗結(jié)果可能存在一定的影響。由此可見，已有的、甚至經(jīng)典的抑郁動物模型存在許多不足和缺陷。近年來，相關(guān)抑郁動物模型雖得到了改進(jìn)和優(yōu)化，新模型的開發(fā)和研究也取得了不少的進(jìn)展，但仍不能完全滿足實際研究工作的需求。因此，建立一種實用的、能克服現(xiàn)有動物模型缺陷的新模型具有非常重要的理論意義和實際應(yīng)用價值。

WILLNER于1984年首次提出動物模型評價標(biāo)準(zhǔn)的3個方面：表觀效度（face validity），結(jié)構(gòu)效度（construct validity）和預(yù)測效度（predictive validity）。表觀效度是指模型與被模擬的疾病之間現(xiàn)象學(xué)的相似性；預(yù)測效度是指模型能否正確反映出不同類型治療藥物的臨床效應(yīng)；結(jié)構(gòu)效度是指模型與模擬疾病之間應(yīng)具有相同的理論基礎(chǔ)和發(fā)病機制[8]。一個好的動物模型應(yīng)在具備上述3個效度的同時，盡可能簡單易用、便于觀察、穩(wěn)定可靠和信度良好。

本研究根據(jù)情境應(yīng)激的相關(guān)理論設(shè)計一種新型情境應(yīng)激箱，即梁氏情境應(yīng)激箱（Liang's contextual-stress box，Liang's box），2019年7月19日已獲得中國發(fā)明專利授權(quán)（專利號：ZL2016 1 0274546.5，授權(quán)公告號：CN107334768 B）。本課題組前期研究結(jié)果表明，梁氏情境應(yīng)激箱具有良好的預(yù)測效度[9]。在此基礎(chǔ)上，擬采用公認(rèn)的經(jīng)典抑郁評價指標(biāo)研究梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠抑郁情緒的誘導(dǎo)作用，分析和探討其表觀效度。

1 材料與方法

1.1 動物

雄性ICR，KM和C57BL/6J小鼠（北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司），生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2016-0006，體質(zhì)量20～28 g。飼養(yǎng)溫度21～23℃，濕度30%～50%，光照保持12 h晝夜節(jié)律（8∶00-20∶00）。小鼠分籠飼養(yǎng)，每籠4只，自由攝食進(jìn)水。實驗前，在動物房適應(yīng)環(huán)境3～7 d，期間實驗者定時與小鼠接觸以消除應(yīng)激反應(yīng)。

1.2 行為分析儀器和情境應(yīng)激箱

SMART 3.0行為分析儀由Panlab公司研發(fā)，用于動物行為學(xué)實驗的數(shù)據(jù)檢測和分析，能捕捉動物的活動軌跡、各區(qū)域之間的停留時間、穿梭次數(shù)和活動度等數(shù)據(jù)。

本研究設(shè)置4種情境應(yīng)激環(huán)境，包括梁氏情境應(yīng)激箱、三角形箱、正方形箱和飼養(yǎng)鼠籠。梁氏情境應(yīng)激箱的底面由1個圓形中央?yún)^(qū)（直徑30 cm）和3個矩形外周臂（25 cm×15 cm）組成，外周臂成相等的夾角與中央?yún)^(qū)相連，箱體側(cè)壁高25 cm。三角形箱底面為邊長64 cm的等邊三角形，箱體側(cè)壁高25 cm。正方形箱底面為邊長43 cm的正方形，箱體側(cè)壁高25 cm。飼養(yǎng)鼠籠長27 cm，寬20 cm，高15 cm，內(nèi)放墊料，模擬小鼠日常生活環(huán)境。梁氏情境應(yīng)激箱、三角形箱、正方形箱和飼養(yǎng)鼠籠的底面積分別是 1771 cm2，1774 cm2，1764 cm2和540 cm2（圖1）。

實驗室保持恒溫（21～23℃）恒濕（30%～50%），光照度與飼養(yǎng)環(huán)境保持一致（70 lux），各評價實驗的光照度按具體實驗要求設(shè)定，如無特別要求則保持與飼養(yǎng)環(huán)境的光照度一致，以減少光照度帶來的應(yīng)激對動物的影響。本研究中實驗均在13∶00～次日8∶00之間進(jìn)行，實驗開始前1 h將動物移至實驗室適應(yīng)環(huán)境。

1.3 飲糖偏愛實驗（sucrose preference test，SPT）

SPT是經(jīng)典的抑郁評價實驗，模擬抑郁癥患者的快感缺失，抑郁小鼠表現(xiàn)為飲糖偏愛率降低。實驗開始前3～5 d，小鼠單籠飼養(yǎng)，給予純水和0.8%糖水各1瓶培養(yǎng)飲糖習(xí)慣，若飲糖不穩(wěn)定則適當(dāng)延長訓(xùn)練時間。正式實驗開始前24 h禁食水，食物和雙瓶事先稱重待用。將小鼠隨機分為4組，分別放入飼養(yǎng)鼠籠、梁氏情境應(yīng)激箱、正方形箱和三角形箱，自由探索15 min后，快速取出小鼠放回原飼養(yǎng)籠中給予食物和雙瓶，令其自由攝食進(jìn)水1 h，期間30 min時交換雙瓶位置以排除干擾[10-11]。飲糖結(jié)束后，雙瓶稱重，計算飲糖偏愛率。飲糖偏愛率（%）=飲糖量/（飲糖量+飲水量）×100%。上述情境應(yīng)激和飲糖步驟重復(fù)3次，每次間隔時間為3 d。

Fig.1 Photos of Liang's box（A），triangle box（B），square box（C），and homecage（D）.

1.4 社交行為實驗（social interaction test，SlT）

小鼠天性喜好群居和探索新事物，抑郁小鼠表現(xiàn)出低社會交往率，因此，SIT可用來評價小鼠的抑郁情緒。該實驗在邊長為45 cm×45 cm的曠場中進(jìn)行。本研究根據(jù)文獻(xiàn)[12]報道的實驗方法稍作改進(jìn)，具體方法如下：將2個圓柱形筆筒倒扣在社交接觸曠場的兩對角，其中一個筆筒中放入一只與實驗鼠同品系的陌生鼠，實驗裝置放在攝像機下方，采用Smart 3.0行為分析儀進(jìn)行圖像采集與分析。將小鼠隨機分為4組，分別放入飼養(yǎng)鼠籠、梁氏情境應(yīng)激箱、正方形箱和三角形箱，自由探索15 min后，立即將小鼠從與2個筆筒等距離的對角處放入社交接觸曠場，同時開始記錄小鼠5 min內(nèi)與2個筆筒接觸的情況，小鼠與筆筒距離＜2 cm判定為接觸。每2只小鼠之間需清理實驗箱體中的糞便和尿液，并用75%乙醇擦拭箱體內(nèi)部去除殘留氣味。實驗結(jié)束后，統(tǒng)計小鼠在接觸區(qū)停留時間、空籠區(qū)停留時間和在區(qū)域間的穿梭次數(shù)。社會交往率（%）=接觸區(qū)停留時間（/接觸區(qū)停留時間+空籠區(qū)停留時間）×100%。

1.5 新奇抑制攝食實驗（novelty-suppressed feeding test，NSFT）

NSFT用來評價小鼠的抑郁情緒，抑郁小鼠表現(xiàn)為進(jìn)食潛伏期延長。本實驗根據(jù)文獻(xiàn)[13]報道的方法和程序在正方形曠場箱（60 cm×60 cm×30 cm）中進(jìn)行。為適應(yīng)Smart 3.0行為分析儀采集和記錄小鼠進(jìn)食潛伏期，將一粒鼠糧放在衛(wèi)生紙（約10.5 cm×13.5 cm）上并放入曠場中央，按衛(wèi)生紙大小設(shè)定鼠糧接觸區(qū)。

實驗前，小鼠禁食12 h。實驗當(dāng)日準(zhǔn)備鼠籠和水瓶，稱重鼠糧。將小鼠隨機分為4組，分別放入飼養(yǎng)鼠籠、梁氏情境應(yīng)激箱、正方形箱和三角形箱，自由探索15 min后，立即取出小鼠，從曠場底邊中間位置放入曠場箱，采用Smart 3.0行為分析儀記錄小鼠第一次進(jìn)入鼠糧接觸區(qū)所需的時間，即攝食潛伏期。然后，將小鼠拿出，放入事先準(zhǔn)備好的鼠籠中自由進(jìn)食，稱量和記錄5 min進(jìn)食量。每2只小鼠之間需清理實驗箱體中的糞便和尿液，并用75%乙醇擦拭箱體內(nèi)部去除殘留氣味。

1.6 強迫游泳實驗（forced swim test，F(xiàn)ST）

FST用于評價小鼠的抑郁情緒，是經(jīng)典的行為絕望模型，抑郁小鼠在強迫游泳時表現(xiàn)出更長的不動時間。實驗時將4個2000 mL燒杯置于攝像頭前，以黑色幕布為背景，每個燒杯之間用黑色擋板隔開，避免小鼠彼此干擾，燒杯中水深10 cm，水溫（25±1）℃[14-15]。將小鼠隨機分為4組，分別放入飼養(yǎng)鼠籠、梁氏情境應(yīng)激箱、正方形箱和三角形箱，自由探索15 min后，而后放入燒杯中進(jìn)行強迫游泳6 min，并用Smart 3.0行為分析儀記錄后4 min內(nèi)小鼠的不動時間。在Smart 3.0軟件中，小鼠不動行為判定的標(biāo)準(zhǔn)和參數(shù)設(shè)定為：小鼠活動度＜10 cm2·s-1，即小鼠停止游泳（在水中四處游動）和攀爬（前爪劃動水面，碰觸缸壁），四肢偶爾劃動以保持身體不至于下沉，頭露水面，處于漂浮狀態(tài)。每2只小鼠之間需清理燒杯中的糞便，并換水。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析

實驗結(jié)果數(shù)據(jù)均以±s表示，使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。組間比較采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05為具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 飼養(yǎng)鼠籠與梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠抑郁樣行為誘導(dǎo)作用比較

實驗結(jié)果（圖2A）顯示，與飼養(yǎng)鼠籠組相比，無論是給予1次還是2次梁氏情境應(yīng)激，ICR小鼠飲糖偏愛率均明顯下降（1次梁氏情境應(yīng)激：df=26，t=-2.352，P=0.027；2次梁氏情境應(yīng)激：df=26，t=-2.535，P=0.019）。施加3次梁氏情境應(yīng)激后，ICR小鼠飲糖偏愛率的降低雖并未達(dá)到顯著性差異，但存在下降的趨勢。與飼養(yǎng)鼠籠組相比，梁氏情境應(yīng)激箱組的ICR小鼠飲糖偏愛率下降達(dá)到17.61%。與飼養(yǎng)鼠籠組相比，梁氏情境應(yīng)激箱的應(yīng)激刺激明顯降低ICR小鼠（圖2B：df=22，t=2.986，P=0.008）、KM小鼠（圖2C：df=14，t=-2.408，P=0.030）和C57BL/6J小鼠（圖2D：df=14，t=-3.561，P=0.003）的社會交往率。飼養(yǎng)鼠籠組與梁氏情境應(yīng)激箱組ICR小鼠新環(huán)境攝食潛伏期分別為34±35和（33±26）s，2組間無顯著差異（df=26，t=-0.043，P=0.966）。FST實驗中，2組的不動時間分別為163±37和（173±45）s，亦無顯著差異（df=28，t=0.703，P=0.488）。

2.2 正方形箱與梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠抑郁樣行為誘導(dǎo)作用比較

Fig.2 Effect of homecage and Liang's box treatment on depression-like behaviors in mice.A：sucrose preference rate；BD was the social interaction rate in ICR，KM and C57BL/6J mice，respectively；E：latency to feeding；F：duration of immobility.Mice were placed individually into homecage or Liang's box and allowed to explore freely for 15 min.Then,parameters relative to depression-like behaviors were measured.±s，n=8-14.＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，compared with homecage.

實驗結(jié)果如（圖3）所示，在SPT中（圖3A），與正方形箱相比，第1次應(yīng)激后，梁氏情境應(yīng)激箱組小鼠的飲糖偏愛率明顯下降（df=26，t=-2.074，P=0.048）；第2次應(yīng)激后，梁氏情境應(yīng)激箱組小鼠的飲糖偏愛率下降16.01%，下降趨勢明顯；第3次應(yīng)激后，梁氏情境應(yīng)激箱組小鼠的飲糖偏愛率顯著下降（df=26，t=-2.267，P=0.037）。在SIT中，同時觀察了梁氏情境應(yīng)激箱應(yīng)激作用對ICR，KM和C57BL/6J小鼠社交行為的影響，以判斷梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠的刺激作用是否存在種屬差異。與正方形箱相比，梁氏情境應(yīng)激箱組的ICR小鼠（圖3B，df=22，t=-2.013，P=0.030）和C57BL/6J小鼠社會交往率（圖3D，df=14，t=-3.751，P=0.002）均明顯下降，KM小鼠社會交往率下降雖未達(dá)到顯著差異，但梁氏情境應(yīng)激箱組小鼠社會交往率僅為48.37%，較正方形箱組（67.36%）有下降趨勢（圖3C，df=14，t=-1.993，P=0.066）。如圖3E和4F所示，正方形箱組和梁氏情境應(yīng)激箱組ICR小鼠攝食潛伏期（df=25，t=-1.155，P=0.259）和不動時間（df=28，t=1.702，P=0.100）均未出現(xiàn)顯著性差異。

2.3 三角形箱與梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠抑郁樣行為誘導(dǎo)作用比較

三角形箱與梁氏情境應(yīng)激箱作為情境應(yīng)激刺激對小鼠飲糖偏愛率的影響如圖4A所示，第1次應(yīng)激后，梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠飲糖偏愛率的抑制作用雖未能達(dá)到顯著性差異（df=26，t=-1.736，P=0.094），但與三角形箱組相比，飲糖偏愛率降低了21.02%；后2次應(yīng)激后，梁氏情境應(yīng)激箱組小鼠飲糖偏愛率顯著下降（df=26，t=-2.415，P=0.025和df=26，t=-2.554，P=0.021）。圖4B-D所示，在社交實驗中,與三角形箱相比，梁氏情境應(yīng)激箱組ICR小鼠社會交往率（df=22，t=-2.348，P=0.028）和C57BL/6J小鼠社會交往率（df=14，t=-3.770，P=0.002）均明顯下降。KM小鼠社會交往率的變化雖無顯著性差異（df=14，t=-1.570，P=0.139），但下降幅度達(dá)到24.26%，下降趨勢明顯。與三角形箱組相比，梁氏情境應(yīng)激箱組ICR小鼠攝食潛伏期（圖4E，df=26，t=0.823，P=0.418）和不動時間（圖4F，df=28，t=-0.788，P=0.437）雖未見顯著性差異，但存在一定的增加趨勢。

Fig.3 Effect of square box and Liang′s box treatment on depression-like behaviors in mice.A：sucrose preference rate；B-D was the social interaction rate in ICR，KM and C57BL/6J mice，respectively；E：latency to feeding；F：duration of immobility.Mice were placed individually into square box or Liang's box and allowed to explore freely for 15 min.Then,parameters relative to depression-like behaviors were measured.±s，n=8-14.＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，compared with square box group.

Fig.4 Effect of triangle box and Liang's box treatment on depression-like behaviors in mice.A：sucrose preference rate；B-D was the social interaction rate in ICR，KM and C57BL/6J mice，respectively；E：latency to feeding；F：duration of immobility.Mice were placed individually into triangle box or Liang's box and allowed to explore freely for 15 min.Then,parameters relative to depression-like behaviors were measured.±s，n=8-14.＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，compared with triangle box.

3 討論

應(yīng)激的概念首先由加拿大生理學(xué)家塞里（SELYE G）提出，是指機體在各種軀體、心理和社會文化等內(nèi)外因素刺激下所出現(xiàn)的全身性非特異性適應(yīng)性反應(yīng)，包括生理和精神兩方面。嚴(yán)重的應(yīng)激刺激可誘發(fā)心理問題或精神疾病，尤其是抑郁、焦慮等情緒障礙。人或動物對某些高危的環(huán)境、新異的場景、奇特的氛圍以及陌生的情景等均可產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。這種由特定的場景、環(huán)境、情景或事件所誘發(fā)的生理和心理反應(yīng)稱之為情境應(yīng)激（contextual-stress）。本課題組設(shè)計和構(gòu)建了一個特定的實驗情景和環(huán)境，即梁氏情境應(yīng)激箱，觀察和評價此種情境應(yīng)激刺激對小鼠特征性行為的影響，并對相關(guān)行為指標(biāo)的表征和意義進(jìn)行分析和解讀。前期初步研究結(jié)果顯示，抗抑郁劑米安色林（mianserine）對相關(guān)行為觀察指標(biāo)具有明確的干預(yù)作用，表明梁氏情境應(yīng)激箱預(yù)測效度良好[9]。為進(jìn)一步研究梁氏情境應(yīng)激箱誘導(dǎo)小鼠抑郁樣行為的表觀效度，選用SPT，SIT，NSFT和FST 4種經(jīng)典的抑郁行為評價方法，觀察和研究梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠抑郁樣行為的誘導(dǎo)作用。

本研究設(shè)定飼養(yǎng)鼠籠、三角形箱和正方形箱3種情境應(yīng)激環(huán)境作為對照組，以確定梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠抑郁樣行為誘導(dǎo)作用的特異性。值得強調(diào)的是，正方形箱、三角形箱和梁氏情境應(yīng)激箱的面積相等，材料相同，且相關(guān)實驗程序，實驗時間以及實驗環(huán)境（室溫、光照、噪聲）均受到嚴(yán)格控制。因此，相應(yīng)的實驗數(shù)據(jù)具有較好的可比性。飼養(yǎng)鼠籠的面積（540 cm2）雖比梁氏情境應(yīng)激箱小3.28倍，但作為小鼠的常規(guī)飼養(yǎng)環(huán)境，有必要將其設(shè)定為對照組之一。

小鼠SPT可模擬臨床抑郁癥患者的快感缺失，對相關(guān)事物缺乏必要的興趣。小鼠飲糖偏愛率降低屬于典型的抑郁樣行為表現(xiàn)，是評價情境應(yīng)激誘導(dǎo)抑郁情緒的一個重要指標(biāo)[16]。本研究結(jié)果顯示，作為一個特定的應(yīng)激環(huán)境，梁氏情境應(yīng)激箱處理明顯抑制小鼠的飲糖行為，與飼養(yǎng)鼠籠、正方形箱和三角形箱3個應(yīng)激環(huán)境相比較，小鼠飲糖偏愛率分別下降25.90%，24.46%和21.02%。經(jīng)過3次反復(fù)應(yīng)激實驗，與飼養(yǎng)鼠籠、正方形箱和三角形箱相比較，梁氏情境應(yīng)激箱仍然可明顯降低小鼠飲糖偏愛率，分別下降17.61%，18.11%和20.24%，提示梁氏情境應(yīng)激箱對抑郁樣行為的誘導(dǎo)作用比較穩(wěn)定，重復(fù)性較好。雖只進(jìn)行3次重復(fù)應(yīng)激實驗，但初步研究結(jié)果顯示，小鼠對梁氏情境應(yīng)激箱所產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)未見明顯的耐受性。

臨床上，抑郁癥患者常常表現(xiàn)情緒低落、無價值感、社交活動減少，甚至離群索居，逃避與人接觸，完全拒絕與社會的聯(lián)系[17]。小鼠喜好群居和探索新事物，而情境應(yīng)激可能抑制小鼠探索行為能力，增加社會逃避行為。SIT結(jié)果表明，與飼養(yǎng)鼠籠、正方形箱和三角形箱相比較，梁氏情境應(yīng)激箱明顯減少ICR，KM和C57BL/6J小鼠的社會交往率，其中ICR小鼠分別減少36.68%，34.49%和38.10%；KM小鼠分別減少30.65%，28.19%和24.26%；C57BL/6J小鼠分別減少37.98%，39.72%和41.01%。進(jìn)一步數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在SIT中，梁氏情境應(yīng)激箱對ICR，KM和C57BL/6J小鼠區(qū)域間穿梭次數(shù)并無明顯影響（數(shù)據(jù)未顯示）。上述研究結(jié)果表明，①某些實驗結(jié)果的差異雖并無顯著性，但其社會交往率存在明顯減少的趨勢。因此，從整個研究結(jié)果來看，SIT的數(shù)據(jù)支持小鼠SPT的結(jié)果，梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠抑郁樣行為具有明顯和穩(wěn)定的誘導(dǎo)作用；②ICR和KM小鼠為遠(yuǎn)交系，C57BL/6J小鼠屬于近交系[18]，盡管三者品系不一樣，某些行為反應(yīng)和特點存在區(qū)別，但在SIT中，3種不同品系小鼠的數(shù)據(jù)得到比較一致的印證。說明梁氏情境應(yīng)激箱處理對動物抑郁樣行為的誘導(dǎo)作用存在一定的品系普適性。

NSFT主要模擬抑郁癥患者進(jìn)食動機和欲望減退的臨床表現(xiàn)，通過測定禁食禁水12 h小鼠在新環(huán)境中進(jìn)食的潛伏期，觀察和分析動物對食物的渴求以及進(jìn)食欲望與動機[19]。文獻(xiàn)資料表明，攝食潛伏期與動物的抑郁情緒關(guān)系密切，抑郁情緒嚴(yán)重者，其進(jìn)食潛伏期明顯延長[19]。在NSFT中，食物放置在明亮空曠的曠場中央，這樣的設(shè)計可造成進(jìn)食欲望與中央曠場恐懼的沖突。因此，小鼠NSFT屬于一種復(fù)合型應(yīng)激模型[20]。本實驗結(jié)果顯示，與飼養(yǎng)鼠籠、正方形箱和三角形箱相比，梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠攝食潛伏期的影響并無明顯差異。其可能的原因是，NSFT通常用于評價慢性應(yīng)激及抗抑郁藥物的治療作用[19]，而本研究的實驗設(shè)計屬于急性應(yīng)激程序，作為情境應(yīng)激刺激，小鼠在梁氏情境應(yīng)激箱僅停留15 min。因此，梁氏情境應(yīng)激箱能否作為長期情境應(yīng)激刺激誘導(dǎo)小鼠的抑郁樣行為需要進(jìn)一步研究。從表觀推測，急性禁食禁水所產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)的強度可能高于梁氏情境應(yīng)激箱，因此并不能完全排除在NSFT過程中急性禁食禁水所產(chǎn)生的強烈的應(yīng)激反應(yīng)對實驗結(jié)果的干擾。

悲觀、絕望、遇到問題和困難時缺乏進(jìn)取精神和積極解決問題的能力是抑郁癥患者典型的臨床癥狀[21]。在小鼠FST中，不動時間用來衡量動物的行為絕望，評價抑郁情緒[22]。在FST中，與飼養(yǎng)鼠籠、正方形箱和三角形箱相比，梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠強迫游泳不動時間的影響雖均未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)上的顯著性，但存在一定的延長趨勢，其延長百分比分別為6.56%，22.79%和10.54%。而且，與飼養(yǎng)鼠籠、正方形箱和三角形箱相比較，梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠不動時間的延長趨勢呈現(xiàn)較好的一致性。與NSFT相似，強迫游泳誘導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)的程度高于梁氏情境應(yīng)激箱。因此，在高強度的應(yīng)激刺激背景下，相對溫和的應(yīng)激刺激能否顯現(xiàn)明確的應(yīng)激誘導(dǎo)作用值得商榷和研究。

綜合分析實驗結(jié)果可得出如下結(jié)論：①無論是與飼養(yǎng)鼠籠相比較，還是與正方形箱和三角形箱相比較，梁氏情境應(yīng)激箱均可顯著降低小鼠的飲糖偏愛率與社會交往行為，提示梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠的抑郁樣行為存在明確的誘導(dǎo)作用，表現(xiàn)為小鼠的快感缺失和社交回避行為；②梁氏情境應(yīng)激箱重復(fù)應(yīng)激刺激3次均能降低小鼠飲糖偏愛率，提示小鼠對梁氏情境應(yīng)激箱誘導(dǎo)的應(yīng)激反應(yīng)可能不產(chǎn)生明顯的耐受性；③梁氏情境應(yīng)激箱對不同品系小鼠（ICR、KM和C57BL6J小鼠）的社會交往率均具有明顯的抑制作用，說明梁氏情境應(yīng)激箱對小鼠抑郁樣行為的誘導(dǎo)作用可能不存在品系差異性，具有較好的普適性和重復(fù)性。由此可見，梁氏情境應(yīng)激箱誘導(dǎo)小鼠抑郁樣行為表征與經(jīng)典的抑郁動物模型一致性高，表觀效度良好。因此，作為情境應(yīng)激刺激，梁氏情境應(yīng)激箱誘導(dǎo)小鼠抑郁樣行為不僅是一個值得關(guān)注的、與臨床抑郁癥相關(guān)的全新動物模型，也可能成為一種篩選和評價藥物抗抑郁作用的新的實驗方法。