黔產(chǎn)紅土茯苓藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究

周 和 楊 蘭 譚翔勻 馮 華

遵義市食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 遵義 563002

紅土茯苓為百合科植物菝葜SmilaxchinaL.的干燥根莖。夏、秋二季采挖，除去須根，洗凈，個(gè)小、均勻的，曬干；個(gè)大、均勻的，趁鮮切成薄片，干燥。根據(jù)《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》、《貴州中草藥資源研究》和《貴州植物志》記載[1-3]，確定名稱為“紅土茯苓”。目前，紅土茯苓在貴州省作為少數(shù)民族藥材品種，民間中醫(yī)、民族地區(qū)使用廣泛。具有祛風(fēng)利濕、解毒消腫、通利關(guān)節(jié)的作用，主要用于風(fēng)濕痹痛、筋骨疼痛、淋濁、帶下、泄瀉、痢疾、瘡毒、疥癬、燒燙傷。文獻(xiàn)報(bào)道該植物中含有菝葜素(smilaxin)，齊墩果酸(oleanolic acid)，山柰素(kaempferide)，薯蕷皂甙(dioscin)，纖細(xì)薯蕷皂甙(gracillin)等[4-5]。由于原有紅土茯苓質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不完善，已不能滿足中醫(yī)中藥現(xiàn)代化發(fā)展的要求，因此該藥材被列為《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》提升品種進(jìn)行研究。基于此，本研究組對(duì)紅土茯苓藥材的性狀、顯微、薄層進(jìn)行鑒定[6-9]，對(duì)水分、總灰分、水溶性浸出物進(jìn)行含量測(cè)定，并確定了檢查限度[10]。建立的紅土茯苓藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可為該藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供一定的參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 光學(xué)生物顯微鏡(德國(guó)徠卡儀器公司，型號(hào)：DM2500)；圖像分析系統(tǒng)(德國(guó)徠卡儀器公司，型號(hào)：DFC500)，高速萬能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司，型號(hào)：FW80)，梅特勒電子天平(梅特勒-托利多有限公司，型號(hào)：MS204-TS)。以及常規(guī)顯微制片的刀片、載玻片、蓋玻片、鑷子、水合氯醛、間苯三酚、濃鹽酸、稀甘油等。

1.2 藥物與試劑 紅土茯苓原植物及樣品均由遵義市食品藥品檢驗(yàn)所提供，分別采集于貴州各地，詳見表1。經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥實(shí)驗(yàn)室的孫慶文教授鑒定為百合科植物菝葜SmilaxchinaL.的干燥根莖，憑證標(biāo)本存放于遵義市食品藥品檢驗(yàn)所。薯蕷皂苷元(購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111539-200001)，環(huán)己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷、無水乙醇、甲醇均為分析純(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)分別為：20160715、20170509、20170302、20180312、20180617)，硅膠G板(青島海洋化工廠有限公司，批號(hào)20170818)。

表1 供試樣品來源表

2 方法與結(jié)果

2.1 原植物鑒別 紅土茯苓為攀援灌木植物；耐旱、喜光，稍耐陰，耐瘠薄，生長(zhǎng)力極強(qiáng)。生于海拔2000 m以下的林下灌木叢中、路旁、河谷或山坡上。根狀莖粗厚，堅(jiān)硬，為不規(guī)則的塊狀，粗2～3 cm。莖長(zhǎng)1～3 m，少數(shù)可達(dá)5 m，疏生刺。葉薄革質(zhì)或堅(jiān)紙質(zhì)，干燥后通常紅褐色或近古銅色，圓形、卵形或其他形狀，長(zhǎng)3～10 cm，寬1.5～10 cm，下面通常淡綠色，較少蒼白色；葉柄長(zhǎng)5～15 mm，約占全長(zhǎng)的1/2～2/3，一側(cè)具寬0.5～1 mm的鞘，幾乎都有卷須，少有例外，脫落點(diǎn)位于靠近卷須處。傘形花序生于葉尚幼嫩的小枝上，具十幾朵或更多的花，常呈球形；總花梗長(zhǎng)1～2 cm；花序托稍膨大，近球形，較少稍延長(zhǎng)，具小苞片；花綠黃色，外花被片長(zhǎng)3.5～4.5 mm，寬1.5～2 mm，內(nèi)花被片稍狹；雄花中花藥比花絲稍寬，常彎曲；雌花與雄花大小相似，有6枚退化雄蕊。漿果直徑6～15 mm，熟時(shí)紅色，有粉霜。該種果實(shí)有兩種類型，一為直徑12～15 mm，干后果皮較易破裂，一為直徑7～8 mm，干后果皮不易破裂?；ㄆ?～5月，果期9～11月。

2.2 藥材性狀鑒別 藥材呈不規(guī)則彎曲扁圓柱形，有結(jié)節(jié)狀隆起，長(zhǎng)2～8 cm，直徑1～3 cm。表面黃棕色或紫棕色，凹凸不平，具有圓錐狀突起的莖基痕，并殘留堅(jiān)硬的刺狀須根殘基或細(xì)根，有的外表皮可見不規(guī)則裂紋。質(zhì)堅(jiān)硬，難折斷，切面呈棕黃色或紅棕色，纖維性。切片厚4～6 mm，直徑3～6 cm，外表面黃棕色或紫棕色，可見殘留刺狀須根殘基或細(xì)根。切面棕黃色或紅棕色，纖維性，可見點(diǎn)狀維管束。質(zhì)硬，折斷時(shí)有粉末飛揚(yáng)。氣微，味微苦、澀。

2.3 顯微鑒別 粉末呈紅棕色，淀粉粒多為單粒，類圓形，直徑5～30 μm，臍點(diǎn)不明顯，少數(shù)可見裂縫狀或人字狀，復(fù)粉粒較少，由2～4分粒組成。石細(xì)胞成群或單個(gè)散落，淡黃色或紅棕色，呈類圓形、長(zhǎng)橢圓形、類方形或不規(guī)則形狀，具明顯分枝狀孔溝，胞腔中含紅棕色物。孔紋或梯紋導(dǎo)管，偶見螺紋。如圖1所示。

1.淀粉粒 2.石細(xì)胞 3.導(dǎo)管圖1 紅土茯苓粉末顯微特征圖

2.4 薄層鑒別 根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研紅土茯苓所含成分，現(xiàn)以薯蕷皂苷元作為對(duì)照品對(duì)其進(jìn)行薄層鑒別。分別取各不同產(chǎn)地的紅土茯苓藥材粉末約5.0 g，依次加乙醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液加鹽酸5 mL，加熱回流2 h，放冷，用40% 氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，蒸至無醇味，殘?jiān)訜崴?0 mL使溶解，用二氯甲烷振搖提取2次(40 mL、30 mL)，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取薯蕷皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每l mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則 0502)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(2∶1)為展開劑 ，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。如圖2所示。

注：1-5、不同產(chǎn)地紅土茯苓藥材；S、薯蕷皂苷元對(duì)照品圖2 紅土茯苓薄層色譜圖

2.5 檢查

2.5.1 水分測(cè)定 按水分測(cè)定法《中國(guó)藥典》2015年版通則0832第二法測(cè)定，10批紅土茯苓藥材水分測(cè)定結(jié)果在10.08 %～12.54 %之間，平均值11.30 %，測(cè)定結(jié)果詳見表2，暫定水分不得過15.0 %。

2.5.2 總灰測(cè)定分 按灰分測(cè)定法《中國(guó)藥典》2015年版(通則2302)測(cè)定，10批紅土茯苓藥材測(cè)定結(jié)果在1.63 %～2.82 %之間，平均值2.13%，測(cè)定結(jié)果詳見表2，暫定總灰分不得過5.0 %。

2.6 水溶性浸出物含量測(cè)定 按浸出物測(cè)定法《中國(guó)藥典》2015版(通則2201)冷浸法，依次測(cè)定了10批樣品，樣品測(cè)定結(jié)果在9.06 %～10.34 %之間，平均值9.54 %，測(cè)定結(jié)果見表2。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，暫定水溶性浸出物標(biāo)準(zhǔn)不得少于8.0 %。

表2 水分、總灰分、水浸出物測(cè)定結(jié)果 (n=2，%)

3 討論

紅土茯苓為貴州省常用民族藥材，本研究對(duì)不同產(chǎn)地的黔產(chǎn)紅土茯苓藥材性狀特征、顯微特征進(jìn)行了歸納總結(jié)。探索了TLC條件，分別以環(huán)己烷-乙酸乙酯(4∶1)、環(huán)己烷-乙酸乙酯(3∶1)、環(huán)己烷-乙酸乙酯(2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。其中環(huán)己烷-乙酸乙酯(2∶1)為展開劑的薄層色譜圖斑點(diǎn)清晰明顯、無干擾、專屬性強(qiáng)，并按照國(guó)家藥典委員會(huì)《中藥分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則實(shí)施細(xì)則》的相關(guān)要求進(jìn)行方法學(xué)耐用性考察，重現(xiàn)性好。分別用乙醇、稀乙醇、水作溶劑，采用冷浸法和熱浸法依次測(cè)定紅土茯苓浸出物含量。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，以水為溶劑，冷法效果最佳，初步確定浸出物限量。按《中國(guó)藥典》2015年版通則方法對(duì)水分、總灰分進(jìn)行測(cè)定，初步確定各限量標(biāo)準(zhǔn)。綜上所述，本研究采集的樣本分布廣，具有一定的代表性，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳實(shí)，準(zhǔn)確，能夠?yàn)榍a(chǎn)紅土茯苓藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)提供一定的參考。筆者將繼續(xù)對(duì)該藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行深入研究，后期可收錄在新版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中，以規(guī)范黔產(chǎn)紅土茯苓藥材的生產(chǎn)。