胃癌組織中Beclin1和LC3的表達(dá)水平分析

王穎

【摘要】 目的? ?分析胃癌組織中Beclin1和微管相關(guān)蛋白輕鏈3（LC3）的表達(dá)水平， 以期為臨床相關(guān)工作或研究提供參考。方法 選取75例胃癌組織芯片HStmA150CS02標(biāo)本為研究對(duì)象， 對(duì)所有標(biāo)本實(shí)施染色處理。比較胃癌組織與癌旁組織中Beclin1、LC3表達(dá)水平， 分析胃癌患者的基本信息和病理特征以及患者病理特征與Beclin1、LC3表達(dá)水平之間的關(guān)系。結(jié)果 胃癌組織中Beclin1、LC3的表達(dá)陽(yáng)性率分別為30.67%、34.67%， 均明顯低于癌旁組織的89.33%、76.00%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性患者與Beclin1、LC3陰性表達(dá)患者的年齡、性別及腫瘤位置比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Ⅰ～Ⅱ期患者Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性率分別為82.61%、80.77%， 均明顯高于Ⅲ～Ⅳ期的17.39%、19.23%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;漿膜層內(nèi)患者Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性率分別為86.96%、84.62%， 均明顯高于漿膜層外患者的13.04%、15.38%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移患者Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性率分別為86.96%、84.62%， 均明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的13.04%、15.38%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;Ⅲ級(jí)分化患者Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性率分別為8.70%、11.54%， 均明顯低于Ⅰ～Ⅱ級(jí)分化患者的91.30%、88.46%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 Beclin1、LC3在胃癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率相對(duì)較低， 且隨著患者病情的發(fā)展， 該兩項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)陽(yáng)性率會(huì)隨之降低。

【關(guān)鍵詞】 Beclin1;胃癌;微管相關(guān)蛋白輕鏈3;自噬;凋亡

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.087

胃癌是指起源于胃黏膜上皮的一種惡性腫瘤， 在國(guó)內(nèi)各地惡性腫瘤發(fā)病率中穩(wěn)居首位， 該病的發(fā)生有顯著地域差異性， 多見于東部沿海與西北地區(qū)， 高發(fā)于>50歲人群， 男性多于女性， 兩者發(fā)病率的比例約為2∶1[1]。近年來， 由于飲食結(jié)構(gòu)與生活方式的變化， 該病發(fā)生率有所上升， 且呈年輕化發(fā)展趨勢(shì)， 當(dāng)前， 臨床上尚未找到特效治療方法。Beclin1、LC3皆是形成自噬體的重要基因， Beclin1屬于自噬相關(guān)基因， 其與Bcl-2基因共同調(diào)控自噬， 在自噬溶酶體降解期間可發(fā)揮抗腫瘤效果;LC3為一種自噬標(biāo)志基因， 也是診斷自噬特異的主要指標(biāo)之一。為分析Beclin1、LC3于胃癌組織中的表達(dá)水平， 現(xiàn)對(duì)75例胃癌患者展開研討， 詳細(xì)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取上海芯超生物科技有限公司提供的75例胃癌組織芯片HStmA150CS02標(biāo)本， 均為手術(shù)過程中獲取， 且經(jīng)病理檢查明確判斷。

1. 2 方法 對(duì)胃癌芯片進(jìn)行常規(guī)脫蠟， 之后， 利用檸檬酸緩沖液實(shí)施抗原修復(fù)， 添加3%雙氧水去離子水， 于37℃下孵育18 min。第1抗體（兔抗人Beclin1與LC3多克隆抗體）稀釋至1∶200， 在4℃下過夜， 之后添加相應(yīng)的試劑于37℃下進(jìn)行孵育， 時(shí)間為20 min。在第2抗（羊抗兔抗體）中添加過氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記， 然后， 實(shí)施顯色， 利用蘇木精實(shí)施重新染色;脫水后， 應(yīng)用中性樹膠進(jìn)行封片。

1. 3 觀察指標(biāo) ①觀察比較胃癌組織與癌旁組織中Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性情況。②觀察患者基本信息（年齡、性別及腫瘤位置）分布與Beclin1、LC3表達(dá)水平。③對(duì)芯片實(shí)施免疫組化分析， 所用產(chǎn)品編號(hào)為HStmA150CS02（上海芯超生物科技有限公司）， 點(diǎn)陣直徑為1.5 mm， 胃腺癌75例——癌75點(diǎn)/癌旁75點(diǎn)， 并分析75例患者病理特征（病理分級(jí)、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、分化程度）與Beclin1、LC3表達(dá)水平之間的關(guān)系。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 胃癌組織與癌旁組織中Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性情況對(duì)比 胃癌組織中Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性率均低于癌旁組織， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 75例患者基本信息分布與Beclin1、LC3表達(dá)水平分析 Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性患者與Beclin1、LC3表達(dá)陰性患者的年齡、性別及腫瘤位置比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2. 3 75例患者病理特征與Beclin1、LC3表達(dá)水平之間的關(guān)系分析 Ⅰ～Ⅱ期患者Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性率均顯著高于Ⅲ～Ⅳ期， 漿膜層內(nèi)患者Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性率均明顯高于漿膜層外患者， 淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移患者Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性率均高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者， Ⅲ級(jí)分化患者Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性率均低于Ⅰ～Ⅱ級(jí)分化患者， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

自噬在機(jī)體的病理與生理過程中均可見到， 其主要是借助溶酶體來降解自身受損的大分子物質(zhì)與細(xì)胞器， 為真核細(xì)胞獨(dú)有的生命特征[2]。自噬除了參與細(xì)胞死亡、分化成熟、生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控外， 還與腫瘤的出現(xiàn)、演變存在密切的關(guān)系。

Beclin1基因又稱為BECNI基因， 為自噬調(diào)控因子， 也被臨床上作為腫瘤相關(guān)因子。從腫瘤方面， Beclin1參與的自噬反應(yīng)有以下幾種機(jī)理：①清除具有較高遺傳毒性、促使細(xì)胞非凋亡方式死亡、合成活性氧的細(xì)胞器;②降解必要的、特定的長(zhǎng)壽蛋白與細(xì)胞器， 調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)。由此可推斷出， Beclin1可能具有清除腫瘤細(xì)胞、阻止腫瘤發(fā)展與出現(xiàn)的可能性。現(xiàn)有研究證實(shí)[3]， Beclin1于同一或不同腫瘤的不同時(shí)期發(fā)揮的作用也不盡相同。于前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌細(xì)胞內(nèi)， Beclin1可出現(xiàn)缺失現(xiàn)象。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明， 敲掉Beclin1基因的小鼠， 其體內(nèi)不同癌癥的發(fā)生率顯著大于正常小鼠， 可見Beclin1與癌癥的發(fā)生存在明顯的關(guān)聯(lián)性， 可能為癌癥發(fā)生的早期事件[4]。在本研究中， 胃癌組織內(nèi)的Beclin1表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于胃癌旁組織（P<0.05）， 這說明癌癥的發(fā)生與Beclin1表達(dá)情況存在密切關(guān)系。

LC3為哺乳動(dòng)物的一個(gè)ATG同源蛋白， 在細(xì)胞中主要分為L(zhǎng)C3-Ⅰ與LC3-Ⅱ2種剪切方式。當(dāng)出現(xiàn)自噬時(shí)， LC3-Ⅰ會(huì)在泛素樣作用下產(chǎn)生水解衍生物， 即LC3-Ⅱ[5]。LC3-Ⅰ主要分布于細(xì)胞質(zhì)中， LC3-Ⅱ主要是分布于自噬體膜上。當(dāng)營(yíng)養(yǎng)不足時(shí)， LC3基因會(huì)隨之激活， 轉(zhuǎn)錄出充足的LC3前體。于自噬體膜產(chǎn)生期間， LC3前體在ATG4B剪切成LC3-Ⅰ[6]。LC3-Ⅰ在末端的甘氨酸作用下， 與ATG3與ATG7活性位點(diǎn)部位的半胱氨酸相結(jié)合產(chǎn)生硫脂鍵， 促使LC3-Ⅰ和硫脂鍵相結(jié)合， 從而生成LC3-Ⅱ[7]。整個(gè)反應(yīng)期間， ATG3與ATG7主要起介導(dǎo)作用， 跟隨自噬體的出現(xiàn)， LC3-Ⅱ開始聚集在自噬體膜上;當(dāng)此期間， LC3-Ⅱ量不斷增加。然后， 溶酶體與自噬體相融合， 后者隨之降解， 其表面的LC3-Ⅱ于ATG4B作用下， 重新轉(zhuǎn)變?yōu)長(zhǎng)C3-Ⅰ，?以實(shí)現(xiàn)LC3-Ⅰ于自噬體反應(yīng)過程中的循環(huán)利用[8]。LC3-Ⅱ?qū)ψ允审w的產(chǎn)生具有重要作用， 有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道表示[9]， 當(dāng)把LC3-Ⅱ去除， 將會(huì)出現(xiàn)許多非閉合的自噬體結(jié)構(gòu)。由于LC3-Ⅱ數(shù)量與自噬體數(shù)量呈現(xiàn)為相對(duì)應(yīng)的關(guān)系， 故而臨床上將其作為自噬體標(biāo)志物之一。在本研究中， 胃癌組織內(nèi)的LC3表達(dá)陽(yáng)性率低于癌旁組織（P<0.05）， 這說明LC3與胃癌的發(fā)生有一定關(guān)系。

關(guān)于Beclin1、LC3水平的表達(dá)是否與胃癌患者的性別、年齡及腫瘤位置有一定的相關(guān)性， 臨床上有關(guān)研究較少， 還需進(jìn)行求證與研究。本研究中， Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性患者與Beclin1、LC3表達(dá)陰性患者的年齡、性別及腫瘤位置比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。可見Beclin1、LC3在胃癌組織內(nèi)的表達(dá)水平與患者的年齡、性別、腫瘤位置無關(guān)系。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[10]， Beclin1、LC3表達(dá)水平與癌癥患者病理分級(jí)、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及漿膜程度、分化程度有密切關(guān)系。在本研究中， Ⅲ～Ⅳ期、漿膜層外、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅲ級(jí)分化患者的Beclin1、LC3表達(dá)陽(yáng)性率均顯著低于Ⅰ～Ⅱ期、漿膜層內(nèi)、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移、Ⅰ～Ⅱ級(jí)分化患者， 由此可見患者病理分期越高、侵及漿膜程度越深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度越高， Beclin1、LC3的表達(dá)陽(yáng)性率越低。

總之， Beclin1、LC3在胃癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率相對(duì)較低， 且隨著患者病情的發(fā)展， 該兩項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)陽(yáng)性率會(huì)隨之降低。

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[收稿日期：2020-01-09]