高效液相色譜法在腦心清膠囊添加硝苯地平檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值探討

閆培培 張?jiān)Ｃ?/p>

【摘要】 目的 探究高效液相色譜法（HPLC）在腦心清膠囊添加硝苯地平檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。方法 色譜柱為Agilent C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm）， 以甲醇-水（60∶40）為流動(dòng)相， 檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm，?流量為1.0 ml/min， 進(jìn)樣量為20 μl， 柱溫為30℃。結(jié)果 處于27.98～139.9 μg/ml范圍內(nèi)， 硝苯地平濃度線性關(guān)系良好， 得出Y=130.2+13.92X回歸方程， 相關(guān)系數(shù)：r=0.9941。重復(fù)性RSD是0.3%（n=5）， 進(jìn)樣精密度0.7%（n=5）， 回收率平均值100.1%， RSD：1.0%（n=5）。結(jié)論 采用HPLC對(duì)腦心清膠囊添加硝苯地平進(jìn)行檢測(cè)， 發(fā)現(xiàn)其準(zhǔn)確度、靈敏度高， 重復(fù)性好， 是用于硝苯地平被非法添加在腦心清膠囊中測(cè)量的一種極佳的測(cè)定方式， 具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 腦心清膠囊;硝苯地平;高效液相色譜法

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.088

硝苯地平適用于各種類(lèi)型高血壓， 是一種防治心絞痛、抗高血壓的藥物， 對(duì)重度、頑固性高血壓有極佳的療效， 其起效快、峰/谷比值高是此藥的特點(diǎn)， 且經(jīng)臨床使用， 療效獲得肯定[1]。但是， 急需建立硝苯地平的檢驗(yàn)檢測(cè)方式， 對(duì)此類(lèi)非法添加進(jìn)行嚴(yán)厲打擊[2]。本文對(duì)HPLC檢測(cè)腦心清膠囊添加硝苯地平的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行研究， 結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇色譜柱為Agilent （250 mm×4.6 mm，?5 μm）， 以甲醇-水（60∶40）為流動(dòng)相， 檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm，?流量為1.0 ml/min， 進(jìn)樣量為20 μl， 柱溫為30℃。選擇帶DAD檢測(cè)器的Agilent 1260高效液相色譜儀， 島津UV 2700型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì);Mettler XS105型分析天平;上海波龍電子設(shè)備有限公司生產(chǎn)的USA-602超聲儀， Mettler Seven Excellence多功能參數(shù)測(cè)定儀。同時(shí)選取不同批號(hào)的、某廠家生產(chǎn)的3份腦心清膠囊樣品， 給出A、B、C編號(hào)， 并選擇編號(hào)為D的另一家腦心清膠囊， 選取批號(hào)為100338-201605中國(guó)食品藥品檢定研究院生產(chǎn)的硝苯地平對(duì)照品。甲醇（色譜醇）;超純水。

1. 2 方法

1. 2. 1 色譜條件 選擇色譜柱為Agilent （250 mm×4.6 mm， 5 μm）， 以甲醇-水（60∶40）為流動(dòng)相， 檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm， 流量為1.0 ml/min， 進(jìn)樣量為20 μl， 柱溫為30℃。

1. 2. 2 定性實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取硝苯地平對(duì)照品27.40 mg置入100 ml的量瓶中， 用甲醇稀釋至刻度， 搖勻， 濾過(guò)， 精密量取續(xù)濾液3 ml置10 ml的量瓶中， 加甲醇稀釋至刻度， 濾過(guò)并搖勻， 作為對(duì)照品溶液分析。分別選擇各20粒樣品A、B、C的編號(hào)， 對(duì)內(nèi)容物進(jìn)行稱(chēng)重， 分別為5.3834、5.3840、5.3765 g， 分別將內(nèi)容物置入研缽中研磨， 再分別精密稱(chēng)取B：0.8171 g， A：0.8076 g，?C：0.8031 g置于50 ml的量瓶中， 加適量甲醇， 振搖5 min溶解， 超聲處理10 min， 加甲醇稀釋到刻度， 濾過(guò)， 作為供試品溶液實(shí)施分析。結(jié)果：對(duì)照品色譜和供試品色譜中相應(yīng)保留時(shí)間處， 紫外光譜圖一致， 檢出一個(gè)色譜峰， 說(shuō)明在3種樣品中均含有硝苯地平。

選擇編號(hào)為D的另一家腦心清膠囊， 在50 ml的瓶中加入3粒內(nèi)容物， 加適量甲醇， 振搖5 min溶解， 超聲處理10 min， 加甲醇稀釋到刻度， 搖勻?yàn)V過(guò)， 選擇濾液作供試品溶液實(shí)施分析。結(jié)果：基于硝苯地平對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間內(nèi)， 樣品D無(wú)色譜峰， 顯示此樣品不含硝苯地平。分別稀釋后進(jìn)樣的硝苯地平對(duì)照品溶液， 當(dāng)信噪比為3時(shí)， 檢測(cè)限為0.02 μg。

1. 2. 3 定量實(shí)驗(yàn) 對(duì)照液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：分別在30 min、1 h、1.5 h、2 h、3 h選擇“定性實(shí)驗(yàn)”項(xiàng)下的硝苯地平對(duì)照品溶液進(jìn)行分析。對(duì)照液至少于3 h內(nèi)穩(wěn)定， 硝苯地平RSD為1.1%。

線性實(shí)驗(yàn)：精密稱(chēng)定硝苯地平對(duì)照品27.98 mg置100 ml的量瓶中， 加甲醇溶解稀釋至刻度， 搖勻， 分別精密量取5.00、4.00、3.00、2.00、1.00 ml置10 ml的量瓶中， 加甲醇溶解稀釋至刻度， 配制成濃度分別為139.90、111.92、83.94、55.96、27.98 μg/ml的溶液， 分別進(jìn)樣20 μl實(shí)施分析。相應(yīng)濃度為橫坐標(biāo)（X）、縱坐標(biāo)（Y）， 得出Y=130.2+13.92X回歸方程， 相關(guān)系數(shù)：r=0.9941。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：在研缽中研磨20粒A號(hào)樣品內(nèi)容物稱(chēng)重5.3840 g， 分別精密稱(chēng)取0.8072、0.8076、0.8031、0.8171、0.8076 g置50 ml的量瓶中， 加適量甲醇， 振搖5 min， 超聲處理10 min， 加甲醇稀釋到刻度， 濾過(guò)， 作為供試品溶液實(shí)施分析， 平均測(cè)定5份。結(jié)果計(jì)算出平均含量為1.03 mg/粒， 計(jì)算硝苯地平的含量， 依據(jù)“含量測(cè)定”項(xiàng)下校正因子（f）計(jì)算， RSD為0.3%。

進(jìn)樣精密度實(shí)驗(yàn)：連續(xù)5次， 選擇“定性實(shí)驗(yàn)”下的對(duì)照品溶液， 結(jié)果得RSD為0.7%。

2 結(jié)果

2. 1 硝苯地平回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取硝苯地平對(duì)照品27.75 mg置100 ml的量瓶中， 加甲醇稀釋到刻度， 精密量取15 ml置于50 ml量瓶中， 加甲醇溶解稀釋到刻度、搖勻， 在10 ml的量瓶中放置“定性試驗(yàn)”下A樣品溶液5 ml， 精密量取2 ml， 加甲醇稀釋到刻度且搖勻， 并實(shí)施進(jìn)樣分析。見(jiàn)表1。

2. 2 HPLC對(duì)腦心清膠囊添加硝苯地平的檢測(cè)結(jié)果? ?精密稱(chēng)取硝苯地平對(duì)照品27.40、29.04 mg分置100 ml的量瓶中， 并加甲醇溶解稀釋到刻度， 搖勻， 分別精密量取3 ml置10 ml的量瓶， 加甲醇稀釋到刻度， 進(jìn)樣分析。分別選擇各20粒樣品A、B、C的內(nèi)容物稱(chēng)重， 樣品分別為：C：0.8031、0.8054 g;B：0.8171、0.8189 g;A：0.8706、0.8711 g;均放置在50 ml的量瓶中， 加適量甲醇超聲處理10 min， 振搖5 min， 加甲醇稀釋至刻度， 濾過(guò)， 選擇續(xù)濾液20 μl進(jìn)樣分析。見(jiàn)表2。

3 討論

經(jīng)實(shí)驗(yàn)， 試用幾種不同色譜柱， 基于固定相的選擇上效果均較為理想， 如應(yīng)用C18、C8柱， 腦心清和硝苯地平分離度理想， 峰形尖銳， 色譜峰可較好分離， 保留時(shí)間適當(dāng)。通常以對(duì)照品和保留時(shí)間核對(duì)定性， 確認(rèn)紫外吸收光譜， 當(dāng)判斷為偽藥， 則非法添加西藥硝苯地平。本文實(shí)施線性關(guān)系等方法學(xué)研究， 為了審慎， 對(duì)其加入量為每粒1 mg稍多進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定[3， 4]。

硝苯地平無(wú)臭、無(wú)味， 是黃色結(jié)晶粉末、遇光不穩(wěn)定， 易出現(xiàn)歧化反應(yīng)， 易分解， 在價(jià)格上此種藥物有較強(qiáng)優(yōu)勢(shì)。存在負(fù)性肌力和傳導(dǎo)的作用， 藥效時(shí)間短、血壓波動(dòng)大， 增加冠心病患者死亡率， 但是容易出現(xiàn)非法添加使用化學(xué)藥物的情況， 造成無(wú)意中增加患者的風(fēng)險(xiǎn)性， 劑量上難以很好的把握， 對(duì)患者的生命產(chǎn)生嚴(yán)重威脅， 發(fā)生不良反應(yīng)[5， 6]。在具體的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中因硝苯地平遇光不穩(wěn)定， 溶解配制完成后避免分解， 需盡快使用[7]。腦心清膠囊主要成分為柿葉提取物， 內(nèi)含兒茶酸、槲皮素、山奈素、黃酮等有效成分， 選取現(xiàn)代化的方式進(jìn)行定性定量分析是提高其藥效質(zhì)量的有效方式。

綜上所述， 針對(duì)腦心清膠囊添加硝苯地平檢測(cè)中采用HPLC， 發(fā)現(xiàn)其準(zhǔn)確度、靈敏度高， 重復(fù)性好， 能夠作為一種極佳的測(cè)定方式， 用于硝苯地平被非法添加在腦心清膠囊中的測(cè)量， 具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

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[收稿日期：2019-11-07]