急性心肌梗死患者血清中miR-133a、miR-133b表達(dá)與預(yù)后關(guān)系

賈秋菊，李莉

心血管疾病包含多種疾病，其中急性心肌梗死（AMI）是冠狀動脈急性臟器功能障礙嚴(yán)重的疾病類型之一，患者死亡率居高不下，嚴(yán)重威脅人類生命健康。AMI患者若治愈不完善會伴發(fā)慢性心功能不全病癥，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。AMI臨床特征為心臟纖維化、心肌細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)[1]。經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）后AMI患者仍伴有左心室擴(kuò)張或心力衰竭癥狀，導(dǎo)致AMI患者預(yù)后恢復(fù)較差。先前實(shí)驗(yàn)證實(shí)AMI早階段臨床特征不明顯，因此尋找早期可以評估AMI預(yù)后的標(biāo)志物已成為研究熱點(diǎn)。近年來研究表明microRNA體內(nèi)水平異?？蓪?dǎo)致動脈粥樣硬化、心肌肥厚、高血壓等疾病發(fā)生[2,3]。已有文獻(xiàn)證實(shí)擴(kuò)張型心肌病心肌組織中miR-133抑制心肌成纖維細(xì)胞病理增生，減輕擴(kuò)張型心肌病心肌纖維化[4]。但miR-133a和miR-133b水平對AMI的預(yù)后是否有評價價值，尚不清楚。本文擬探討miR-133a和miR-133b在AMI血清中水平，以及其對AMI患者PCI后心血管事件發(fā)生的預(yù)測。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取遼寧省丹東市第一醫(yī)院于2016年5月至2017年11月收治的96例ST段抬高型AMI患者，其中男性52例，女性44例，年齡42歲～81（61.80±9.74）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《急性心肌梗死診斷和治療指南》2015修訂版中診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；患者第1次診斷為急性心肌梗死；愿意接受隨訪患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：有嚴(yán)重心臟疾病患者；患有惡性腫瘤患者；患有嚴(yán)重肝、腎功能不全患者；易反復(fù)發(fā)生嚴(yán)重感染患者；有精神病史患者。同時選取本院健康體檢者96例，其中男性54例，女性42例，年齡40～80歲（62.40±9.42）。本研究通過本院倫理委員會批準(zhǔn)，符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集所有空腹體檢健康者和AMI患者采集5 ml，室溫下靜置25 min后，3000×g 4℃，半徑為10 cm 5424R低速離心機(jī)（德國Eppendorf公司）離心15 min，離心后留上清液裝于無RNA酶的EP管中，-80℃，冷凍，備用。

1.2.2 實(shí)時熒光定量PCR（qRT-PCR）法檢測血清中miR-133a和miR-133b的水平在無菌環(huán)境下用試劑盒中無RNA酶試劑提取血清中總RNA，試劑盒購自日本TaKaRa公司，提取后用分光光度計檢測RNA質(zhì)量，OD260/OD280為1.9～2.0即可用于反轉(zhuǎn)錄，使用SYBR Premix Ex Tap ⅡKit（日本TaKaRa公司）得到cDNA。試劑盒購自日本TaKaRa公司采用CFX96 qRT-PCR儀（德國Bio-Rad公司）對miR-133a、miR-133b及內(nèi)參U6進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。miR-133a正向引物5’-GCCAAGC TGGTAAAAATGGAA-3’，反向引物5’-TATG GTTTTGACGACTGTGTAT-3’；miR-133b正向引物5’-TTTGGTCCCCTTCAA-CCAGCTA-3’，反向引物5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’；內(nèi) 參U 6 正 向 引 物5 ’ - A T T G G A A -CGATACAGAGAAGATT-3’，反向引物5’-GG AACGCTTCACGAATTTG-3’。引物由上海生工合成。qRT-PCR反應(yīng)體系20 μl（日本TaKaRa公司）：SYBR Premix Ex Tap Ⅱ 9 μl，模板 cDNA（25 ng/μl）2 μl，上游引物0.8 μl，下游引物0.8 μl，ddH2O 7.4 μl。反應(yīng)條件：95℃，60 s；95℃，20 s；60℃，30 s；72℃，20 s；36個循環(huán)。對miR-133a、miR-133b相對表達(dá)量用2-△△CT法計算。

1.2.3 指標(biāo)檢測用酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測總膽固醇（TC）和低密度脂蛋白（LDL-C），分別用試劑盒總膽固醇ELLSA試劑盒和LDL-C ELLSA試劑盒。試劑盒購自北京九強(qiáng)生物科技有限公司。

1.2.4 超聲心動圖檢查AMI患者入院后12h內(nèi)進(jìn)行急診PCI，術(shù)后半年內(nèi)所有AMI患者超聲心動圖復(fù)查，記錄左心室舒張末期容積（LVEDV）、左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）和左心室收縮末期容積（LVESV）。采用iu22心臟彩色多普勒超聲儀（荷蘭飛利浦電子集團(tuán)）進(jìn)行此項(xiàng)操作。

1.3 統(tǒng)計方法所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析。計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料采用例數(shù)（構(gòu)成比）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AMI組和對照組一般資料比較AMI組和對照組性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)（BMI）及高血壓、糖尿病基礎(chǔ)疾病比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。AMI組TC、LDL-C、LVEF水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）（表1）。

2.2 AMI組和對照組血清miR-133a、miR-133b水平比較與對照組相比，AMI組患者血清miR-133a、miR-133b水平較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。

表1 AMI組和對照組一般資料比較

2.3 不同miR-133a、miR-133b水平AMI患者術(shù)后半年左心功能指標(biāo)分別根據(jù)血清miR-133a、miR-133b水平平均數(shù)，將96例AMI患者分為miR-133a高表達(dá)50例，miR-133a低表達(dá)46例；miR-133b高表達(dá)49例，miR-133b低表達(dá)47例。與miR-133a高表達(dá)組相比，miR-133a低表達(dá)組AMI患者LVEF較高，LVEDV、LVESV較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。與miR-133b高表達(dá)組相比，miR-133b低表達(dá)組AMI患者LVEF較高，LVEDV、LVESV較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）（表3）。

表2 AMI組和對照組血清miR-133a、miR-133b水平比較（±s）

表2 AMI組和對照組血清miR-133a、miR-133b水平比較（±s）

項(xiàng)目 對照組（n=96） AMI組（n=96） P值miR-133a 1.47±0.68 17.14±3.76 ＜0.001 miR-133b 1.54±0.72 25.08±5.85 ＜0.001

2.4 血清miR-133a和miR-133b與AMI患者短期預(yù)后關(guān)系A(chǔ)MI患者PCI后心血管事件總發(fā)生率為19.79%。miR-133a高表達(dá)組、miR-133a低表達(dá)組術(shù)后半年心血管事件總發(fā)生率分別為30.00%、8.51%，2組心血管事件總發(fā)生率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。miR-133b高表達(dá)組、miR-133b低表達(dá)組術(shù)后半年心血管事件總發(fā)生率分別為28.57%、10.64%，2組心血管事件總發(fā)生率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表4）。

表3 不同miR-133a、miR-133b水平AMI患者術(shù)后半年左心功能指標(biāo)（±s）

表3 不同miR-133a、miR-133b水平AMI患者術(shù)后半年左心功能指標(biāo)（±s）

注：LVEF：左心室射血分?jǐn)?shù)；LVEDV：左心室舒張末期容積；LVESV：左心室收縮末期容積

項(xiàng)目 miR-133a miR-133b高表達(dá)（n=50） 低表達(dá)（n=46） P值 高表達(dá)（n=49） 低表達(dá)（n=47） P值LVEF（%） 51.46±9.56 56.14±10.05 0.022 51.23±9.16 55.67±10.15 0.027 LVEDV（ml） 119.23±24.08 106.38±19.83 0.005 120.25±24.18 109.27±19.12 0.016 LVESV（ml） 47.31±11.82 39.83±10.06 0.001 48.06±12.05 41.62±9.79 0.005

表4 不同miR-133a和miR-133b水平患者隨訪期間心血管事件發(fā)生率比較

3 討論

AMI是目前常見的心血管疾病，死亡率不斷上升[6]。死亡率高的另一方面原因是AMI患者PCI后預(yù)后恢復(fù)較差。目前AMI發(fā)病機(jī)制尚不清楚，患者經(jīng)臨床治療后，仍有并發(fā)心血管疾病案例[7]。因此，尋找早期生物標(biāo)志，預(yù)防患者術(shù)后心血管事件再次發(fā)生，是醫(yī)學(xué)上迫切需要解決的問題。心肌重構(gòu)是機(jī)體AMI后一種適應(yīng)反應(yīng)。AMI后，部分心肌細(xì)胞缺血，導(dǎo)致心功能下降，引起心室擴(kuò)張、細(xì)胞信號通路異常等，最終引起心肌重構(gòu)[8]。miR-133a和miR-133b均屬于miR-133家族，分別位于人18號、6號染色體上，二者序列在3’端存在差異。Dakhlallah等[9]研究發(fā)現(xiàn)miR-133a在心肌梗塞大鼠血清中水平上調(diào)，可減少心肌梗死后心肌細(xì)胞的凋亡降低，心肌纖維化癥狀得到改善。譚永錦等[10]研究發(fā)現(xiàn)miR-133a在AMI患者血漿中水平上調(diào)，可能與心肌梗死后心室重構(gòu)有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)與對照組相比，miR-133a和miR-133b在ST抬高型AMI患者血清水平顯著較高，與林秋偉等[11]、季倩等[12]發(fā)現(xiàn)一致，提示miR-133a和miR-133b可能與AMI疾病發(fā)展密切相關(guān)。田智羽等[13]研究發(fā)現(xiàn)AMI患者術(shù)后半年內(nèi)，仍會發(fā)生心律失常、再發(fā)心肌梗死、梗死后心絞痛、心力衰竭等心血管事件，說明AMI患者預(yù)后差。本研究發(fā)現(xiàn)AMI患者術(shù)后半年發(fā)生死亡、再次心肌梗死、嚴(yán)重心律失常、心力衰竭等心血管事件總概率為19.79%，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，miR-133a高表達(dá)組、miR-133b高表達(dá)組術(shù)后半年心血管事件總發(fā)生率分別高于miR-133a低表達(dá)組、miR-133b低表達(dá)組，提示miR-133a、miR-133b水平可能與AMI患者PCI后心血管事件發(fā)生風(fēng)險有關(guān)。

LVEF、LVESV是臨床上評價心功能狀態(tài)指標(biāo)，較為靈敏。有文獻(xiàn)證實(shí)[14]AMI患者心功能指標(biāo)LVEF較低，LVESV、LVEDV較高。郭營波等[15]研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)PCI的AMI患者，術(shù)后6個月，與miR-155低表達(dá)組相比，miR-155高表達(dá)組患者心功能指標(biāo)LVEF較低，LVESV、LVEDV較高，術(shù)后1年心血管總事件發(fā)生率為18%。本研究發(fā)現(xiàn)與miR-133a低表達(dá)組相比，miR-133a高表達(dá)組AMI患者術(shù)后半年心功能指標(biāo)LVEF顯著較低，LVESV、LVEDV顯著較高，提示miR-133a水平可能與AMI患者預(yù)后有關(guān)。與miR-133b低表達(dá)組相比，miR-133b高表達(dá)組AMI患者術(shù)后半年心功能指標(biāo)LVEF顯著較低，LVESV、LVEDV顯著較高，提示AMI患者術(shù)后恢復(fù)情況可能受miR-133b水平影響。

miR-133a、miR-133b可能通過某一機(jī)制影響影響患者預(yù)后恢復(fù)，李安瑩等[16]研究發(fā)現(xiàn)miR-133a在心肌梗死后心衰大鼠心肌細(xì)胞中水平顯著上升，可抑制促凋亡基因Caspase9表達(dá)，減少心肌細(xì)胞凋亡。但此內(nèi)容本研究并未探討。本研究中AMI患者血清miR-133a、miR-133b水平上調(diào)，與患者術(shù)后心功能和心血管事件發(fā)生有關(guān)，可能對評估患者預(yù)后具有一定意義。本研究樣本量較少，研究區(qū)域有限，可能研究結(jié)果有一定的局限性。有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量深入研究AMI預(yù)后與血清miR-133a、miR-133b水平的關(guān)系。