破銅錢藥材的生藥學(xué)鑒別研究*

王仕梅，徐 梅，周雅雪，嚴(yán)福林，魏升華

(貴州中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

破銅錢來源于牻牛兒苗科植物東亞老鸛草GeraniumnepalensisSweet. var.thubergii(Sieb.et Zucc.)Kudo的干燥全草[1]，為尼泊爾老鸛草的變種，民間作為藥用的老鸛草多指老鸛草屬植物。本屬全世界約400種，據(jù)《中國植物志》[2]記載我國約55種和5變種，主要分布于西南貴州、云南的內(nèi)陸山地和溫帶落葉闊葉林區(qū)，多地本草不乏記載?！兜崮媳静荨穂3]記載：老鸛草用于“祛諸風(fēng)皮膚發(fā)癢，筋骨疼痛，手足痙攣，麻木?！薄毒V目拾遺》[4]謂：“祛風(fēng)，伸筋骨，通經(jīng)絡(luò)，治損傷，麻木，浸酒常飲?！?《中國藥典》[5]2015版一部收載牻牛兒苗、老鸛草、野老鸛草以供藥用。

老鸛草屬植物作為破銅錢之名載于《貴州民間方藥集》[6]，為貴州苗族、布依族等習(xí)用藥物。用于治療跌打損傷，刀傷出血，益肺氣。據(jù)文獻(xiàn)查閱與民間調(diào)查，貴州民間常用白酒浸泡老鸛草，制成藥酒以外擦或內(nèi)服，治療肩關(guān)節(jié)周圍炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、坐骨神經(jīng)痛等，療效顯著。亦有用于治療黃疸、痘疹疥癩、痢疾等疾病。破銅錢為貴州省少數(shù)民族用藥，收載在2003版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中。目前有關(guān)破銅錢的研究報(bào)道較少，主要集中在化學(xué)成分[7-11]及總黃酮工藝優(yōu)化[12-14]方面，尚未見生藥學(xué)鑒別方面的報(bào)道。鑒于此，筆者對破銅錢的外觀性狀、顯微特征、薄層色譜進(jìn)行了研究，以期為破銅錢藥材的鑒定及質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

LaiKaDMi1顯微鏡(萊卡顯微系統(tǒng)(上海)有限公司)、GoodLooK-1000薄層色譜成像系統(tǒng)(上?？普苌萍加邢薰?、萬分之一電子分析天平(上海佑科儀器儀表有限公司，YS1609256)、HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)、DFT50A-中草藥粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)。

1.2 試藥

山奈酚對照品(成都瑞芬思生物科技有限公司，S-014-160708，HPLC>98%)，5%三氯化鋁溶液、10%硫酸、無水乙醇、乙酸乙酯、甲苯、甲酸(均為分析純)，硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠、批號20180115)，水為實(shí)驗(yàn)室自制純水。

1.3 材料

所用樣本來至于貴州省貴陽市、龍里縣、盤州市、威寧縣、水城縣等不同地區(qū)野外采集的藥材樣品。由貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院魏升華教授鑒定為東亞老鸛草GeraniumnepalensisSweet. var.thubergii(Sieb.etZucc.)Kudo的干燥全草。憑證標(biāo)本存放于貴州中醫(yī)藥大學(xué)中藥材種植(養(yǎng)殖)及加工研究所。具體藥材樣品來源見表1。

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別

破銅錢莖纖細(xì)，長10～50 cm，節(jié)微膨大。表面灰綠色或紫紅色，有縱溝，被茸毛。質(zhì)脆，斷面黃白色，有的中空。葉具長柄，葉片卷曲皺縮，質(zhì)脆易碎，完整葉片展平后呈掌狀3～5深裂，兩面被茸毛。5個分果環(huán)繞中軸組成橢圓形蒴果。種子橢圓形，暗褐色。藥材形態(tài)圖詳見圖1。

圖1 破銅錢原植物(A)、藥材圖(B)Fig.1 Plants (A) and medicinal materials (B) of Herba Geranii

2.2 顯微鑒別

根橫切面：1)木栓層由類長方形細(xì)胞3～4列組成，皺縮，最外層顏色深，栓內(nèi)層由類方形細(xì)胞1～2列組成，較大；2)皮層甚寬，占根部2/3，由類圓形薄壁細(xì)胞數(shù)列組成，簇晶散在，許多淀粉粒分布在整個根部細(xì)胞中；3)韌皮部窄；4)不明顯束中形成層；5)韌皮射線窄；6)木質(zhì)部中導(dǎo)管集中分布于韌皮部下方，呈二原型分布。見圖2。

圖2 破銅錢根橫切面顯微圖Fig.2 Microscopic image of the transverse section ofthe root of Herba Geranii

莖橫切面：1)表皮由1列類方形細(xì)胞組成；2)皮層由較大的類圓形細(xì)胞5～6列組成；3)中柱鞘由壁厚且木化的纖維2～4列組成連續(xù)的環(huán)層；4)維管束外韌型10個，位于外側(cè)的5個較小，淀粉粒分散在維管束四周；5)髓部由類圓形薄壁細(xì)胞組成。見圖3。

葉橫切面：1)表皮：上表皮和下表皮各由1列類方形細(xì)胞組成，上表皮細(xì)胞較大。主脈處各有1列厚角組織分布在上下表皮內(nèi)側(cè)。2)葉肉：異面型。柵狀組織由1列排列整齊的寬長方形細(xì)胞組成。海綿組織由排列疏松的類圓形細(xì)胞3～4列組成。簇晶分布于柵狀細(xì)胞。3)主脈：維管束外韌型。木質(zhì)部位于上方，排成新月形。見圖4。

圖3 破銅錢莖橫切面顯微圖Fig.3 Microscopic image of the transverse section of the stem of Herba Geranii

圖4 破銅錢葉橫切面顯微圖Fig.4 Microscopic image of the transverse section of the leaf of Herba Geranii

葉的表面觀：葉的上下表皮細(xì)胞垂周壁深波狀彎曲。非腺毛多為單細(xì)胞，少數(shù)2～3細(xì)胞，長67～420 μm，直徑8～20 μm。腺毛多見，頭部單細(xì)胞，長圓形或類圓形，直徑5～16 μm，腺柄1～3細(xì)胞。氣孔不定式或不等式，副位細(xì)胞4～6。見圖5。

圖5 破銅錢葉上表皮(A)和下表皮(B、C)顯微圖Fig.5 Microscopic images of upper (A) and lower (B， C)epidermis of Herba Geranii leaves

粉末：本品粉末呈黃褐色或黃綠色。1)非腺毛：平直，單細(xì)胞，有的稍彎曲，易破碎。壁具疣狀突起。短的非腺毛較多。2)腺毛：頭部單細(xì)胞，橢圓形或長圓形。柄2～3個細(xì)胞，有的彎曲。3)簇晶：多成群存在。4)導(dǎo)管：螺紋和網(wǎng)紋導(dǎo)管。5)淀粉粒：圓形、橢圓形、類圓形。臍點(diǎn)線狀，層紋不明顯。多單粒。見圖6。

圖6 破銅錢粉末圖Fig.6 Powder diagram of Herba Geranii

2.3 薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備

精密稱取本品粉末2 g，加80%乙醇80 mL，超聲提取1 h，濾過，加5 mL 10%H2SO4水浴揮干，用1 mL乙醇溶解，作為供試品溶液。

2.3.2 對照品溶液的制備

精密稱取對照品山奈酚6 mg，加乙醇制成濃度為0.6 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。

2.3.3 鑒別方法

按照(《中國藥典》2015年版四部通則0502)[7]薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對照品溶液、供試品溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯∶甲苯∶甲酸(5∶4∶1)溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%AlCl3顯色，在105℃下烘2 min，放冷，置365 nm下檢視，供試品與對照品在同一位置上呈相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見圖7。

圖7 破銅錢薄層色譜圖Fig.7 Thin layer chromatography (TLC) of Herba Geranii

3 小結(jié)及討論

本研究對6批破銅錢藥材顯微特征和薄層鑒別進(jìn)行了研究，破銅錢根的主要鑒別特征為：木栓層由3～4列類長方形細(xì)胞組成，皺縮，皮層甚寬，占根部2/3，由數(shù)列類圓形薄壁細(xì)胞組成，含有簇晶。韌皮部較木質(zhì)部小。木質(zhì)部呈二原型分布。莖的主要鑒別特征為：表皮由1列類方形細(xì)胞組成，皮層由較大的類圓形細(xì)胞5～6列組成。中柱鞘由壁厚且木化的纖維2～4列組成連續(xù)的環(huán)層。維管束外韌型10個，位于外側(cè)的5個較小，髓由類圓形薄壁細(xì)胞組成，有胞間隙。葉的主要鑒別特征為：上表皮和下表皮各由1列類方形細(xì)胞組成，上表皮細(xì)胞較大。葉為異面葉，柵狀組織由1列排列整齊的寬長方形細(xì)胞組成。海綿組織由排列疏松的類圓形細(xì)胞3～4列組成。簇晶分布于柵狀細(xì)胞。維管束外韌型。木質(zhì)部位于上方，排成新月形。葉表皮的主要鑒別特征為：上表皮無氣孔，下表皮有氣孔，且腺毛與非腺毛較上表皮多。薄層色譜法研究考察了不同展開劑對薄層鑒別的影響，以乙酸乙酯∶甲苯∶甲酸(5∶4∶1)溶液為展開劑，6批不同產(chǎn)地破銅錢樣品與標(biāo)準(zhǔn)品(山奈酚)在相應(yīng)的位置上顯相同的斑點(diǎn)且斑點(diǎn)清晰，重復(fù)性好。

本研究采集了6 批不同產(chǎn)地的樣品進(jìn)行詳細(xì)的對比觀察，并用現(xiàn)代儀器來研究藥材性狀、顯微特征以及薄層特征，結(jié)果具有充分的代表性和準(zhǔn)確性，可為鑒別及制定破銅錢藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。