血清和腹腔液糖類抗原125 水平與子宮內(nèi)膜異位癥r-AFS 分期的相關(guān)性

楊曼春，曹小勇

子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EM）是育齡期女性常見疾病，雖屬于良性疾病，卻有惡性行為，可以侵及周圍組織，是導(dǎo)致不孕的重要原因［1］。其臨床表現(xiàn)多樣，早期診斷困難，尋找有效的標(biāo)志物有助于提升其早診早治效果，目前臨床研究顯示糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）、血管內(nèi)皮 生 長 因 子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、Toll 樣受體2（toll-like receptor 2，TLR2）等在EM 病人血清及腹腔液中均有明顯提升［2-6］。但針對(duì)CA125 的報(bào)道中，不同分期病人CA125 的變化情況并不完全一致［7-8］，這提示CA125 對(duì)EM 嚴(yán)重程度的作用可能受其它因素影響，本研究擬引入TNF-α等指標(biāo)的交互作用，探討血清及腹腔液CA125 水平與EM 分期的相關(guān)性，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入2017 年1 月至2018 年5 月滎陽市中醫(yī)院接受治療的EM 病人89 例為EM 組，參考美國生育學(xué)會(huì)提出的修正EM 分期法（the revised American Fertility Society classification，r-AFS）將病人劃分為Ⅰ～Ⅳ期組，另納入同期健康體檢女性80例為非EM 組。EM 組年齡范圍為21～39 歲，年齡（28.71±3.15）歲；孕次范圍為1～4 次，孕次（1.97±0.53）次；病程范圍為1～10年，病程（4.82±1.85）年；單側(cè)盆腔病變41 例、雙側(cè)盆腔病變48 例；Ⅰ期11例、Ⅱ期23 例、Ⅲ期34 例、Ⅳ期21 例；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）（19.17±1.58）kg/m2；月經(jīng)周期（29.19±5.28）d。非EM 組年齡范圍為20～38 歲，年齡（29.10±3.32）歲；孕次范圍為0～4 次，孕次（1.31±0.41）次；BMI（19.52±1.57）kg/m2；月經(jīng)周期（28.80±6.21）d。兩組病人年齡、BMI、月經(jīng)周期比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) EM 病人納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理檢查確診為EM；原發(fā)EM病人；簽署知情同意書。非EM病人納入標(biāo)準(zhǔn)：同期于體檢科接受健康體檢，盆腔正常，各檢測指標(biāo)無明顯異常；簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：EM 病人排除標(biāo)準(zhǔn)：腦、心、肝、腎等重要臟器疾病者；免疫系統(tǒng)疾病者；術(shù)前3個(gè)月內(nèi)應(yīng)用激素類或免疫抑制劑治療者。非EM病人不另設(shè)排除標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 檢測指標(biāo) EM 組均接受腹腔鏡手術(shù)治療，術(shù)前采集外周靜脈血5 mL，術(shù)中經(jīng)穿刺針吸取子宮膀胱凹陷或子宮直腸凹陷處腹腔液5 mL；非EM組入組后采集外周靜脈血5 mL。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測VEGF、IL-6、TNF-α水平，其中VEGF、IL-6試劑盒購自武漢新啟迪，TNF-α試劑盒購自上海酶聯(lián)。采用化學(xué)發(fā)光法檢測CA125水平，試劑盒購自廈門波生。1

.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料按x±s表示，多組間對(duì)比采用單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)（方差齊）或Tamhane T2檢驗(yàn)（方差不齊）。各實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)間的相關(guān)性采用Pearson 方法分析。CA125與r-AFS分期的相關(guān)性采用Spearman方法分析。CA125對(duì)鑒別r-AFS分期Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期的效能采用ROC曲線分析。CA125及CA125與其它檢測指標(biāo)的交互作用與r-AFS分期的關(guān)系采用逐步進(jìn)入的二分類logistics回歸分析檢驗(yàn)，納入標(biāo)準(zhǔn)0.05，剔除標(biāo)準(zhǔn)0.10。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)對(duì)比 不同r-AFS 分期EM 病人及非EM 病人血清各檢測指標(biāo)對(duì)比：血清CA125 水平對(duì)比，EM Ⅳ期＞EM Ⅲ期組＞EM Ⅱ期組、EM Ⅰ期組及非EM 組，且EM Ⅱ期組＞非EM組，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；各組VEGF、IL-6、TNF-α等指標(biāo)對(duì)比見表1。不同r-AFS分期EM病人腹腔液各檢測指標(biāo)對(duì)比：腹腔液CA125 水平對(duì)比，EM Ⅳ期組＞EM Ⅲ期組＞EM Ⅱ期組、EM Ⅰ期組及非EM 組，上述差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；各組VEGF、IL-6、TNF-α等指標(biāo)對(duì)比見表2。

表1 不同r-AFS分期EM病人及非EM病人各血清檢測指標(biāo)對(duì)比/

表1 不同r-AFS分期EM病人及非EM病人各血清檢測指標(biāo)對(duì)比/

注：與非EM組對(duì)比，aP＜0.05；與EM Ⅰ期組對(duì)比，bP＜0.05；與EM Ⅱ期組對(duì)比，cP＜0.05；與EM Ⅲ期組對(duì)比，dP＜0.05。EM為子宮內(nèi)膜異位癥，CA125為糖類抗原125，VEGF為血管內(nèi)皮生長因子，IL-6為白細(xì)胞介素-6，TNF-α為腫瘤壞死因子α

組別非EM組EM Ⅰ期組EM Ⅱ期組EM Ⅲ期組EM Ⅳ期組F值P值TNF-α/（ng/mL）0.96±0.21 1.07±0.34 1.32±0.36a 1.81±0.39abc 1.84±0.48abc 58.922 0.000例數(shù)80 11 23 34 21 CA125/（IU/mL）15.57±7.14 22.98±13.73 32.03±13.17a 74.97±17.52abc 109.50±36.18abcd 173.491 0.000 VEGF/（pg/mL）117.03±47.31 158.35±50.91a 206.11±39.27ab 259.88±49.83abc 319.23±48.02abcd 107.515 0.000 IL-6/（pg/mL）118.79±29.74 107.10±17.04 126.60±23.30 151.74±39.73abc 181.97±38.33abc 21.392 0.000

表2 不同r-AFS分期EM病人各腹腔液檢測指標(biāo)對(duì)比/

表2 不同r-AFS分期EM病人各腹腔液檢測指標(biāo)對(duì)比/

注：與EM Ⅰ期組對(duì)比，aP＜0.05；與EM Ⅱ期組對(duì)比，bP＜0.05；與EM Ⅲ期組對(duì)比，cP＜0.05；EM 為子宮內(nèi)膜異位癥，CA125 為糖類抗原125，VEGF為血管內(nèi)皮生長因子，IL-6為白細(xì)胞介素-6，TNF-α為腫瘤壞死因子α

TNF-α/（ng/mL）1.00±0.28 1.28±0.32a 1.75±0.40ab 1.75±0.23ab 21.902 v0.000組別EM Ⅰ期組EM Ⅱ期組EM Ⅲ期組EM Ⅳ期組F值P值例數(shù)11 23 34 21 CA125/（IU/mL）24.08±12.47 28.34±12.71 79.35±16.34ab 111.40±42.22abc 57.843 0.000 VEGF/（pg/mL）153.52±55.76 205.41±44.86a 232.49±43.04a 330.73±45.61abc 45.255 0.000 IL-6/（ng/mL）116.73±17.15 125.40±29.81 150.04±28.48ab 178.32±25.04abc 19.110 0.000

2.2 EM 病人血清及腹腔液CA125 與其它指標(biāo)相關(guān)分析 EM 病人血清CA125 與腹腔液CA125 呈高度正相關(guān)（r＝0.868，P＜0.001），見圖1；EM 病人血清CA125 與VEGF 呈 高 度 正 相 關(guān)（r≥0.800，P＜0.001），血清CA125 與IL-6、TNF-α 呈中度正相關(guān)（0.400≤r＜0.800，P＜0.001），見表3；EM病人腹腔液CA125 與VEGF、IL-6 及TNF-α 均呈中度正相關(guān)（0.500≤r＜0.800，P＜0.001），見表4。

圖1 EM病人血清CA125與腹腔液CA125線性相關(guān)分析

表3 EM病人血清CA125與其它實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)相關(guān)性分析

表4 EM病人腹腔液CA125與其它實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)相關(guān)性分析

2.3 血清和腹腔液CA125 與EM 分期相關(guān)性分析 血清CA125 與EM 分期呈高度正相關(guān)（rs＝0.841，P＜0.001）；腹腔液CA125 與EM 分期呈中度正相關(guān)（rs＝0.799，P＜0.001）。

2.4 血清和腹腔液CA125 對(duì)鑒別EM Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期病人效能 病人血清和腹腔液CA125 對(duì)鑒別EM Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期病人均有良好的效能，ROC曲線下面積分別0.978、0.980，見圖2。由于兩者呈高度正相關(guān)，考慮早期檢測便捷性，二分類logistic分析僅取血清CA125進(jìn)行分析。

圖2 血清和腹腔液CA125鑒別EM Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期ROC曲線

2.5 血清CA125與TNF-α 的交互作用對(duì)EM 分期的影響分析 根據(jù)表4 結(jié)果，血清CA125 與VEGF、IL-6、TNF-α均呈一定程度的正相關(guān)性，存在多重共線性可能，通過多元線性回歸分析驗(yàn)證后，在二分類logistics 回歸分析中排除VEGF 和IL-6。納入EM分期為因變量（Ⅲ～Ⅳ期＝1，Ⅰ～Ⅱ期＝0），納入血清CA125、TNF-α及兩者的交互作用變量（CA125×TNF-α）為自變量（均按連續(xù)變量賦值），另納入病人年齡（20～29 歲＝0，30～39 歲＝1）、BMI（≥中位值＝1，＜中位值＝0）、孕次（≥中位值＝1，＜中位值＝0）、月經(jīng)周期（≥中位值＝1，＜中位值＝0）、人工流產(chǎn)史（有＝1，無＝0）、自然流產(chǎn)史（有＝1，無＝0）為協(xié)變量，經(jīng)二分類logistics 回歸分析顯示，CA125、TNF-α、CA125×TNF-α 仍是EM 高分期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見表5。

表5 二分類logistics回歸分析結(jié)果

3 討論

EM的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但目前大量研究已證實(shí)EM 病人血清和腹腔液中CA125 明顯升高，并認(rèn)為該指標(biāo)有助于診斷EM：Chen等［9］報(bào)道顯示EM病人中血清CA125 陽性（≥35 U/mL）者68.4%，而健康人群僅26.7%；Socolov 等［10］對(duì)169 篇臨床報(bào)道進(jìn)行總結(jié)分析，指出CA125 是鑒別診斷EM 及指導(dǎo)隨訪干預(yù)的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，EM Ⅱ期以上病人，其血清CA125水平明顯高于非EM病人，提示其對(duì)診斷EM 有一定作用，且隨著EM 分期的升高，血清及腹腔液CA125均呈一定程度的升高趨勢，提示其對(duì)評(píng)估EM 嚴(yán)重程度也可能有一定作用。EM 病人血清CA125水平升高，主要是因?yàn)閮?nèi)異病灶種植部位腹膜被損傷［11］：正常情況下，腹腔屏障只允許少量CA125進(jìn)入血液循環(huán)，而腹膜損傷后，大量CA125進(jìn)入血循環(huán)，使血清CA125 水平升高，且病情越嚴(yán)重，腹膜損傷越嚴(yán)重，因此高分期病人血清CA125水平更高。EM病人腹腔液CA125水平升高，則可能是因?yàn)椋焊骨灰菏钱愇粌?nèi)膜生存的重要環(huán)境，而異位內(nèi)膜分泌CA125的功能是正常內(nèi)膜2～4倍［12］，病灶種植及炎癥反應(yīng)則會(huì)導(dǎo)致CA125釋放進(jìn)入腹腔液。

上述結(jié)論同時(shí)提示，病人r-AFS分期越高，血清及腹腔液中CA125水平越高，但臨床實(shí)際中往往難以觀察到CA125嚴(yán)格按照上述趨勢變化：本研究中雖然能夠利用血清及腹腔液CA125 水平鑒別Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ～Ⅳ期病人，但EM Ⅱ期組血清及腹腔液CA125 水平均與Ⅰ期組接近，且EM Ⅰ期組血清CA125 水平與非EM 組接近；劉頌平等［13］報(bào)道顯示EM Ⅰ～Ⅱ期病人血清CA125 水平與非EM 病人接近；朱琳等［14］報(bào)道顯示EM Ⅰ～Ⅱ期病人血清CA125水平與Ⅲ～Ⅳ期病人接近。上述結(jié)果一方面可能與因?yàn)椴煌噭┖袑?duì)CA125檢測精度不一致，另一方面則可能與CA125特異性較低有關(guān)，已有報(bào)道證實(shí)CA125與心臟疾病、腫瘤等其它疾病的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)［15-16］。但同時(shí)，這可能也提示CA125 對(duì)EM分期的影響，可能受到其它因素的協(xié)同影響。

基于此，本研究另納入其它與EM 發(fā)生及發(fā)展有關(guān)的因素，包括VEGF、IL-6和TNF-α［17-18］，分析顯示，在血清和腹腔液中，CA125均與上述指標(biāo)呈一定程度的正相關(guān)，尤其是與VEGF和IL-6相關(guān)性較強(qiáng)，且多元線性回歸顯示CA125與VEGF和IL-6存在較強(qiáng)的多重共線性，提示CA125 的變化可能直接受VEGF 和IL-6 變化的影響。而血清CA125 與TNF-α的共線性關(guān)系較弱，經(jīng)logistics 回歸分析顯示兩者的交互作用也是EM 高分期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這提示CA125對(duì)EM分期的影響可能受到TNF-α的協(xié)同影響，這可能是造成不同研究［7-8，13-14］中，隨著病人者r-AFS 分期越高，病人血清或腹腔液CA125 變化趨勢不完全一致的原因之一。

綜上，血清和腹腔液CA125 均隨著EM 病人r-AFS 分期的升高而升高，兩者對(duì)鑒別Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期病人有較好的效能；血清CA125可能通過與TNF-α 協(xié)同作用，共同影響EM 的病情發(fā)展。但本研究樣本量有限，納入觀察指標(biāo)較少，且欠缺病理機(jī)制性探討，因此仍難以反映CA125 與r-AFS 分期的內(nèi)在關(guān)系，有待后續(xù)研究補(bǔ)充。