山銀花鑒定及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究進(jìn)展

李曼鈿 敖冬梅 陳君

[摘要] 山銀花作為常用中藥，亦是藥食同源產(chǎn)品，在市場(chǎng)流通中不僅有《中國(guó)藥典》規(guī)定的法定來(lái)源，更有民間藥用品種及混淆品慘雜其中。為了規(guī)范山銀花品質(zhì)，建立穩(wěn)定可控質(zhì)量評(píng)判方法，本文試從山銀花近幾年來(lái)在定性鑒別和定量分析研究方面對(duì)其的質(zhì)量控制的研究現(xiàn)狀進(jìn)行總結(jié)，為山銀花質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)方法的完善和優(yōu)化提供基礎(chǔ)。

[關(guān)鍵詞] 山銀花;基原植物;質(zhì)量控制;定量分析

[中圖分類(lèi)號(hào)] R284? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2020）03（b）-0029-04

[Abstract] As a common traditional Chinese medicine， Lonicerae Flos is also a homologous product of medicine and food. In the market circulation， it not only has the legal source stipulated in the Chinese pharmacopoeia， but also has folk medicinal varieties and mixed products. In order to standardize the quality of Lonicerae Flos and establish a stable and controllable quality evaluation method， this paper tries to summarize the research status of quality control of Lonicerae Flos from the aspects of qualitative identification and quantitative analysis in recent years， so as to provide a basis for the improvement and optimization of quality control and evaluation methods of Lonicerae Flos.

[Key words] Lonicerae Flos; Basal plant; Quality control; Quantitative analysis

山銀花（Lonicerae Flos）來(lái)源于忍冬科植物灰氈毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.、紅腺忍冬L. hypoglauca Miq.、華南忍冬L. confusa DC.或黃褐毛忍冬L. fulvotomentosa Hsu et S.C.Cheng的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花，其具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，主要用于治療癰腫療瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒、溫病發(fā)熱等癥[1]，是銀翹解毒丸（片）、犀羚解毒丸（片）、銀花口服液、維C銀翹片等多種中成藥的主要原料。近年來(lái)，山銀花還廣泛應(yīng)用于食品、飲料、保健品、化妝品和獸藥等方面。我國(guó)的忍冬屬植物有98種，各省均有廣泛分布，以西南部種類(lèi)較多，可供藥用的達(dá)47種[2]，山銀花藥材來(lái)源于其中4種植物。除藥典收載的來(lái)源，市場(chǎng)上還流通著其他忍冬屬植物作為地方或民間藥用品種，然不同基原植物的山銀花藥材及其混淆品的成分及功效均有所差異，且生長(zhǎng)環(huán)境、采收季節(jié)、加工方式等多方面因素均不同程度影響山銀花的化學(xué)成分，因此有必要對(duì)其進(jìn)行鑒別。當(dāng)前，對(duì)山銀花的鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)方法包括藥典規(guī)定的性狀、顯微、薄層鑒別和含量測(cè)定等項(xiàng)目，多集中于《中國(guó)藥典》[1]規(guī)定檢測(cè)的活性成分綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷和川續(xù)斷皂苷乙;常結(jié)合高效液相色譜法、氣相色譜法、紫外-可見(jiàn)分光光度法、高效毛細(xì)管電泳法、液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)等方法對(duì)山銀花的質(zhì)量進(jìn)行控制[3]。但中藥成分復(fù)雜，主要以多成分協(xié)同發(fā)揮療效，用一種或幾種成分含量的高低來(lái)評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量存在一定的局限性，因此有必要對(duì)山銀花建立全面有效的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，保證安全用藥。本文對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行了綜述，為山銀花鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)方法的研究提供參考。

1 山銀花的定性鑒別方法

對(duì)山銀花鑒別主要是通過(guò)將法定來(lái)源的品種與其他同屬植物及混淆品進(jìn)行外觀(guān)性狀和成分特性的鑒別?！吨袊?guó)藥典》[1]2015年版記載灰氈毛忍冬花蕾呈棒狀而稍彎曲，長(zhǎng)3.0～4.5 cm，表面黃色或黃綠色，總花梗集結(jié)成簇;質(zhì)稍硬，手捏之稍有彈性;紅腺忍冬的花蕾長(zhǎng)2.5～4.5 cm，表面黃白至黃棕色，花柱無(wú)毛;華南忍冬的花蕾長(zhǎng)1.6～3.5 cm，萼筒和花冠密被灰白色毛;黃褐毛忍冬的花蕾長(zhǎng)1.0～3.4 cm，花冠表面淡黃棕色或黃棕色，密被黃色茸毛[1]。對(duì)于此類(lèi)外觀(guān)描述較難將山銀花的4個(gè)來(lái)源之間進(jìn)行區(qū)分，也難以將其與其他同屬品種及混淆品忍冬植物進(jìn)行區(qū)分，需要借助顯微、薄層色譜、指紋圖譜等手段進(jìn)一步鑒別。

1.1 顯微鑒別

山銀花顯微鑒別特征據(jù)《中國(guó)藥典》[1]記載如下：灰氈毛忍冬的腺毛較少，厚壁非腺毛較多，表面微具疣狀突起，偶見(jiàn)草酸鈣簇晶，花粉粒直徑54～82 μm;紅腺忍冬的腺毛極多，頭部盾形而大，厚壁非腺毛長(zhǎng)短懸殊，表面具細(xì)密疣狀突起，有的胞腔內(nèi)含草酸鈣結(jié)晶;華南忍冬的腺毛較多，厚壁非腺毛，單細(xì)胞，表面有微細(xì)疣狀突起，有的具螺紋，邊緣有波狀角質(zhì)隆起;黃褐毛忍冬的腺毛有兩種類(lèi)型：一種較長(zhǎng)大，頭部呈倒圓錐形或倒卵形，另一種較短小，厚壁非腺毛平直或稍彎曲，表面疣狀突起較稀，有的具菲薄橫隔。根據(jù)顯微特征差異，王萌等[4]用數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法對(duì)山東地區(qū)的忍冬、灰氈毛忍冬及嫁接植株花蕾的顯微特征差異進(jìn)行了研究，區(qū)分了3種花蕾的粉末及表面顯微特征，可作為山銀花法定來(lái)源的判別依據(jù)?？祹浀萚5]用顯微鏡及數(shù)碼成像系統(tǒng)觀(guān)察并記錄山銀花與金銀花的微觀(guān)性狀特征，完善了山銀花4個(gè)基原植物的顯微特征，為其鑒別提供了更詳細(xì)方法。由于其他未有錄入法定標(biāo)準(zhǔn)的民間藥用品種及混淆品的顯微特征研究較少，因此，此種判別方法仍具有局限性。

1.2 薄層色譜鑒別

對(duì)山銀花的薄層色譜鑒別一般按照《中國(guó)藥典》[1]進(jìn)行。因山銀花和金銀花中均含有綠原酸成分，以《中國(guó)藥典》[1]規(guī)定的綠原酸為對(duì)照不能很好地將兩者區(qū)分，而金銀花不含灰氈毛忍冬皂苷乙，馬躍新等[6]采用灰氈毛忍冬皂苷乙為對(duì)照品，三氯甲烷-甲醇-水（6∶4∶1）為展開(kāi)劑，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，可以區(qū)分山銀花和金銀花。薄層鑒別法快速簡(jiǎn)便，是山銀花鑒別的一種有效手段，但有關(guān)山銀花幾個(gè)種間的薄層色譜鑒別方法未見(jiàn)報(bào)道，仍需進(jìn)一步研究。

1.3 指紋圖譜鑒別

指紋圖譜具有整體性和模糊性的特點(diǎn)，是一種綜合的、可量化的鑒別手段。構(gòu)建指紋圖譜的方法主要有光譜法、色譜法等[7]。

1.3.1 光譜指紋圖譜鑒別? 光譜法以直觀(guān)、簡(jiǎn)便和快速等優(yōu)點(diǎn)，在鑒別中藥材方面得到廣泛運(yùn)用。田建平等[8]用紅外指紋圖譜確定不同產(chǎn)區(qū)的華南忍冬特征峰，用聚類(lèi)分析區(qū)別出山銀花（華南忍冬）的不同產(chǎn)區(qū)。馮潔等[9]用高光譜成像技術(shù)采集山銀花、金銀花光譜信息，用化學(xué)計(jì)量法處理后，建立起快速判別金銀花和山銀花的模型，可用于金銀花與山銀花的鑒別。銀勝高等[10]用紅外光譜法對(duì)廣西10個(gè)不同產(chǎn)地的紅腺忍冬樣品和6個(gè)不同產(chǎn)地的灰氈毛忍冬進(jìn)行紅外光譜試驗(yàn)研究，得到了廣西產(chǎn)紅腺忍冬和灰氈毛忍冬的特征吸收峰，可用于紅腺忍冬與灰氈毛忍冬的鑒別。禹亞杰等[11]用傅里葉紅外光譜法對(duì)14種不同產(chǎn)地不同品種藥用忍冬進(jìn)行鑒別，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該方法可在一定程度上鑒定和識(shí)別忍冬科不同品種藥用忍冬。采用光譜法鑒別山銀花，具有樣品無(wú)損，特征較為全面的特點(diǎn)，不失為山銀花鑒別可優(yōu)先考慮的方法之一。然目前對(duì)山銀花鑒別的光譜法研究報(bào)道較少，需進(jìn)一步深入研究。

1.3.2 色譜指紋圖譜鑒別? 色譜指紋圖譜鑒別中藥真?zhèn)?、控制其質(zhì)量是較傳統(tǒng)的方法，具有與光譜法同樣的整體觀(guān)特點(diǎn)。馮華等[12]采用高效液相色譜標(biāo)定出13批山銀花和3批金銀花藥材12個(gè)共有峰，為山銀花鑒別提供了依據(jù)。林廷龍等[13]采用高效液相色譜梯度洗脫法確定了黃褐毛忍冬藥材特征圖譜中的9個(gè)共有峰，建立黃褐毛忍的特征圖譜，可用于黃褐毛忍冬鑒別。周游宇等[14]用高效液相色譜建立起10批山銀花配方顆粒高效液相色譜特征指紋圖譜，確定其8個(gè)共有峰，解析出山銀花5個(gè)共有峰成分，可用于山銀花配方顆粒的鑒別。高效液相色譜在鑒別山銀花方面研究相對(duì)較多，具有儀器精密，較為全面的特點(diǎn)，但其使用時(shí)仍需對(duì)樣品進(jìn)行提取，樣品及試劑都有一定的損耗，是其缺點(diǎn)之一，可作為山銀花鑒別的補(bǔ)充。

1.4 分子生物學(xué)技術(shù)鑒別

DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)不受環(huán)境因素、個(gè)體發(fā)育階段及組織部位的影響，具有多態(tài)性強(qiáng)，準(zhǔn)確率高等特點(diǎn)，在中藥材鑒別中得到廣泛運(yùn)用。何志敏等[15]用同源克隆法從5個(gè)忍冬屬（忍冬、灰氈毛忍冬、紅腺忍冬、黃褐毛忍冬、華南忍冬）12個(gè)樣品中克隆FNSII基因，分析不同忍冬屬植物中的SNP位點(diǎn)，通過(guò)比較分析，獲得19個(gè)SNP位點(diǎn)，可用于將12個(gè)樣本鑒別為金銀花、灰氈毛忍冬、紅腺忍冬、華南忍冬及黃褐毛忍冬。胡凱等[16]以Bar-HRM聯(lián)用技術(shù)從DNA水平鑒別出金銀花與山銀花。現(xiàn)代生物技術(shù)在鑒別山銀花方面有其精確獨(dú)到的一面，為山銀花鑒別提供好的方法。

2 山銀花質(zhì)量評(píng)價(jià)的定量分析方法

2.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法因其靈敏度高、線(xiàn)性范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，不僅在山銀花鑒別中最為常用，且在山銀花的質(zhì)量控制中也有廣泛應(yīng)用。盧鳳來(lái)等[17]用高效液相色譜法檢測(cè)山銀花中綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的含量，為山銀花藥材的質(zhì)量控制提供了簡(jiǎn)便可靠的方法。因高效液相色譜法和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙，可降低綠原酸等具有紫外吸收物質(zhì)的檢測(cè)靈敏度，代晶等[18]采用高效液相色譜法、紫外檢測(cè)器和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定灰氈毛忍冬中9種成分的含量，結(jié)果在考察范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與各自峰面積之間線(xiàn)性關(guān)系良好。除了《中國(guó)藥典》[1]規(guī)定成分，山銀花還含有其他活性成分，如有機(jī)酸類(lèi)（新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸及異綠原酸等）、黃酮類(lèi)（木犀草苷等），因此在其質(zhì)量評(píng)價(jià)時(shí)也常用這些成分作為參照。羅艷等[19]采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定灰氈毛忍冬中7種有機(jī)酸的含量，發(fā)現(xiàn)7種有機(jī)酸在一定濃度范圍與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好，為灰氈毛忍冬質(zhì)量控制提供了依據(jù)。王艷艷等[20]用高效液相色譜法測(cè)定灰氈毛忍冬中綠原酸與木犀草苷的含量，測(cè)出23個(gè)不同產(chǎn)地灰氈毛忍冬中綠原酸含量介于0.0368%～7.2956%，木犀草苷含量介于0.0187%～0.0962%，為其質(zhì)量控制提供了依據(jù)。范紅梅等[21]采用高效液相色譜測(cè)定黃褐毛忍冬中木犀草苷的含量，發(fā)現(xiàn)木犀草苷在4.12～50.22 g范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，可用于黃褐毛忍冬的質(zhì)量控制。彭維等[22]用高效液相色譜法對(duì)紅腺忍冬的綠原酸、咖啡酸含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示綠原酸加樣回收率為99.6%、RSD為2.16%;咖啡酸加樣回收率為101.1%、RSD為3.26%，該方法可以對(duì)紅腺忍冬進(jìn)行質(zhì)量控制。山銀花質(zhì)量控制采用高效液相色譜法常以一種或多種成分為對(duì)照，測(cè)定其含量，但由于中藥有效成分復(fù)雜眾多，此種方法具有一定局限性，還需進(jìn)一步研究。

2.2 氣相色譜-質(zhì)譜法

山銀花中含有揮發(fā)油成分，對(duì)其以揮發(fā)油進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)常用氣相色譜-質(zhì)譜法。黃麗華等[23]采用氣相色譜-質(zhì)譜法聯(lián)用技術(shù)對(duì)花蕾期、銀花期、金花期的黃褐毛忍冬揮發(fā)油成分進(jìn)行比較，從3個(gè)時(shí)期的黃褐毛忍冬揮發(fā)油中分別分離出揮發(fā)性成分，確定了不同時(shí)期的黃褐毛忍冬共44種化合物，為其質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。茍占平等[24]用氣相色譜-質(zhì)譜法分析紅腺忍冬干燥花蕾的揮發(fā)油成分，以計(jì)算機(jī)質(zhì)譜庫(kù)檢索，分離鑒定出21個(gè)化合物。氣相色譜法在鑒別及測(cè)定含揮發(fā)油成分的中藥材中扮演重要角色，為山銀花揮發(fā)油成分鑒別及質(zhì)量控制的重要方法。

2.3 光譜法

藥材的道地性是控制藥材商品質(zhì)量的關(guān)鍵，申麗娟等[25]用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法測(cè)定全國(guó)7個(gè)主要產(chǎn)地的26個(gè)山銀花樣品中的10種金屬元素的含量，研究得出山銀花不同產(chǎn)地金屬元素的含量分布特征，為山銀花資源質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。此外，光譜法在對(duì)山銀花各類(lèi)成分的定量分析也有其獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)。張易等[26]采用近紅外光譜法測(cè)定山銀花中4種有機(jī)酸含量，用偏最小二乘法建立山銀花定量校正模型，建立了快速測(cè)定山銀花4種有機(jī)酸的方法。

2.4 其他方法

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，山銀花的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法趨于多樣化。王磊等[27]用微量量熱法測(cè)定并繪制金銀花和灰氈毛忍冬作用于大腸埃希菌生長(zhǎng)代謝過(guò)程的熱功率圖，建立生物熱動(dòng)力學(xué)模型，檢測(cè)了金銀花、山銀花對(duì)大腸桿菌的抑制作用，為山銀花質(zhì)量評(píng)價(jià)提供新的思路和技術(shù)平臺(tái)。殷召軍[28]以馬錢(qián)子苷、當(dāng)藥苷、異綠原酸、木犀草苷、綠原酸為對(duì)照，用膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳法測(cè)定山銀花中5種有效成分，結(jié)果山銀花5種成分在8 min內(nèi)分離良好，線(xiàn)性范圍內(nèi)r ≥ 0.9900，為山銀花及其制劑的質(zhì)量控制提供了方法。近幾年來(lái)對(duì)山銀花的鑒別及質(zhì)量評(píng)價(jià)方面的研究方法多樣且取得長(zhǎng)足的發(fā)展，綜合化、全面化的質(zhì)量評(píng)價(jià)是其發(fā)展的趨勢(shì)。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，目前對(duì)山銀花的研究日漸增加，為山銀花質(zhì)量控制打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，但其質(zhì)量評(píng)價(jià)的方法多著眼于有效成分的含量測(cè)定，存在一定的局限性;同時(shí)還缺乏確切實(shí)用的質(zhì)量等級(jí)評(píng)判和分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，不利于山銀花藥材商品國(guó)際化。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的方法和技術(shù)也在進(jìn)步，新的評(píng)價(jià)模式越來(lái)越傾向于全面評(píng)價(jià)，如劉昌孝院士提出的中藥質(zhì)量標(biāo)志物的概念，在建立中藥全程質(zhì)量控制及質(zhì)量溯源體系起有利作用[3]。還有學(xué)者提出的一測(cè)多評(píng)法、質(zhì)量常數(shù)等級(jí)評(píng)價(jià)方法、開(kāi)展中藥材全息圖譜質(zhì)量評(píng)測(cè)人工智能系統(tǒng)構(gòu)建研究的策略以及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的發(fā)展[3]，這些方法都為山銀花質(zhì)量評(píng)價(jià)的發(fā)展提供了新的思路和方法。

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（收稿日期：2019-09-29? 本文編輯：顧家毓）