遼寧絨山羊正常組織中PrPc分布的研究

摘要：本實(shí)驗(yàn)采取遼寧絨山羊正常組織，心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、大腦、小腦、腦干和淋巴結(jié)，采用朊蛋白單克隆抗體7D9單抗，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，對絨山羊不同組織中的PrPc進(jìn)行了定性、定量和定位的研究。結(jié)果為正常朊蛋白在大腦、小腦、腦干等中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布廣泛，其次是脾臟、淋巴結(jié)等淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)，而肝臟、心臟和肺臟組織器官未檢測到PrPc。朊蛋白單克隆抗體7D9可以用于遼寧絨山羊正常組織朊蛋白的免疫組織化學(xué)研究。

關(guān)鍵詞：遼寧絨山羊;朊蛋白;免疫組織化學(xué)

近年來，對于TSE檢測的發(fā)展非常迅速，盡管朊病毒的分類本質(zhì)還不明確，但其一些生物學(xué)特性已有研究，如抵抗性、傳染性等。PrPc檢測逐漸成為TSE的確診依據(jù)。其中免疫組織化學(xué)（IHC）診斷方法具有特異性高、成本低、操作簡單、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織確定為法定TSE診斷方法之一。IHC已廣泛用于羊癢病等動(dòng)物海綿狀腦病的診斷和檢測。朊蛋白在不同組織中的分布和表達(dá)量是朊病毒的致病基礎(chǔ)。本試驗(yàn)將應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，對遼寧絨山羊PrPc在不同組織中的分布進(jìn)行定性、定量和定位的研究，旨在探求TSE的發(fā)病機(jī)理、傳播途徑以及為揭示朊蛋白在組織中的表達(dá)量與 PrPSc的感染途徑之間的關(guān)系提供生物學(xué)信息。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

來自營口臨床健康的遼寧絨山羊成年母羊（3～5歲）30只屠宰后，立即采取大腦、小腦、腦干、肝臟、心臟、脾臟、肺臟、腎臟、腸系膜淋巴結(jié)、扁桃體等組織器官，放入10%福爾馬林溶液中固定。

1.2 試驗(yàn)方法

樣品組織蠟塊制備，石蠟切片脫蠟至水，石蠟切片去除內(nèi)源性過氧化物酶，石蠟切片的修復(fù)和抗原暴露，滴加特異性一抗和二抗，顯色、水化、蘇木素復(fù)染及封片，用PBS代替PrPc單克隆抗體做陰性對照。

2 結(jié)果和分析

免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示，在遼寧絨山羊的大腦、腦干、小腦、淋巴結(jié)、脾臟、腎臟、肺臟均觀察到了PrPc的表達(dá)，尤其在大腦、腦干、小腦、淋巴結(jié)和脾臟中PrPc的表達(dá)量豐富。腦干部神經(jīng)元排列緊密，可見明顯的紅色片狀區(qū)域;朊蛋白在脾臟分布較為廣泛，表達(dá)量多。淋巴結(jié)中PrPc數(shù)量很多，分布較為廣泛，在心臟、肝臟、腎臟和肺臟未檢測出PrPc表達(dá)，結(jié)果為陰性。

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)表明，正常朊蛋白（ PrPc） 在遼寧絨山羊的大腦、腦干、小腦、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)均有表達(dá)，且在有些組織中呈現(xiàn)高表達(dá)量。雖然在遼寧絨山羊心臟、肝臟和肺組織沒有檢測到PrPc，但這并不能說明該組織中不含有PrPc，可能由于表達(dá)量低而難以檢出，或由于PrPc空間結(jié)構(gòu)的存在，某些抗原位點(diǎn)可能處于被隱蔽狀態(tài)，而抗原修復(fù)方式對一些構(gòu)象依賴性的位點(diǎn)會(huì)造成影響，從而導(dǎo)致抗原位點(diǎn)的暴露存在差別，這些因素都將影響免疫組化檢測的結(jié)果。

本試驗(yàn)利用單抗7D9進(jìn)行遼寧絨山羊正常組織中PrPc免疫組織化學(xué)研究，通過對抗原的甲酸和高溫水浴熱修復(fù)，在大腦、小腦、腦干等中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及脾臟、淋巴結(jié)等淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)都檢測到了高表達(dá)的PrPc，這與以往的報(bào)道一致。甲酸和高溫水浴對PrPc的暴露具有很好的修復(fù)作用。

作者簡介：龔商羽（1981-），女，碩士，中級獸醫(yī)師。主要從事重大動(dòng)物疫病的預(yù)防和控制的研究。