良附丸對(duì)寒邪客胃證大鼠胃排空及小腸推進(jìn)度的影響

張 晶，徐小薈，趙書(shū)彬，張曦元，熊麗輝*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117；2.松原市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，吉林 松原 138000）

胃脘痛[1]也稱為胃痛，為臨床中內(nèi)科常見(jiàn)疾病之一，與季節(jié)、氣候、地理等條件密切相關(guān)。東北地區(qū)緯度高，冬季寒冷，寒邪客胃證更為多見(jiàn)?！端貑?wèn)·調(diào)經(jīng)論》曰：“氣血不和，百病乃變化而生?！盵2]脾胃為后天之本，氣血生化的源泉。寒邪客胃，易傷陽(yáng)氣，致使氣機(jī)不暢，氣血不通則痛。王魯民[3]提出“天下疾病，唯寒不破，治療疾病，重在治寒”理論。目前，胃脘痛的實(shí)驗(yàn)研究多以脾胃虛寒為主，模型易于復(fù)制且治療經(jīng)驗(yàn)豐富。反之，寒邪客胃證的研究較少且治療單一。我們將主要研究單純寒邪對(duì)胃腸動(dòng)力的影響，通過(guò)檢測(cè)胃排空和小腸推進(jìn)度進(jìn)一步說(shuō)明其影響程度。

本研究選用的方劑良附丸出自清代謝元慶《良方集腋》。組方中高良姜味辛性熱，歸脾胃經(jīng)，為祛寒濕、溫脾胃的要藥；香附辛平，微苦干，歸肝脾三焦經(jīng)，醋制為疏肝解郁，理氣調(diào)中的常用藥。二者合用溫中散寒、行氣止痛。我們通過(guò)對(duì)治療組和模型組的比較分析，進(jìn)一步探究寒邪的影響程度及驗(yàn)方良附丸的有效性?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 雄性SD大鼠100只，SPF級(jí)，體質(zhì)量（200±20）g，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001。由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司提供。于長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行造模實(shí)驗(yàn)，室內(nèi)溫度22～25 ℃。

1.2 藥物 高良姜，醋香附均購(gòu)于長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院免煎顆粒藥房。高良姜9 g，醋香附9 g，按照人和動(dòng)物體表面積法[4]，免煎顆粒和中藥劑量換算法，大鼠按照0.2 g·mL-1，每100 g給藥1 mL，計(jì)算出藥量后，稀釋溶解于冰箱保存，用前加熱。

1.3 制備半固體糊 參照文獻(xiàn)[5-6]方法，天平稱取10 g羧甲基纖維素鈉，溶解于250 mL的蒸餾水中，之后分別加入奶粉16 g，糖8 g，淀粉8 g和活性炭末2 g，攪拌均勻。配制成300 mL約300 g的黑色半固體糊儲(chǔ)存于4 ℃冰箱，用前稍加熱并搖勻。

1.4 試劑與儀器 10%水合氯醛、生理鹽水、羧甲基纖維素鈉、淀粉、糖、奶粉、活性炭、電子天平、體重秤、手術(shù)剪、鑷子、棉線繩子、小鼠灌胃針頭、注射器、燒杯（100 mL）、玻璃棒、卷尺等。

1.5 方法

1.5.1 分組和給藥 選取SD大鼠100只，適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后稱量體質(zhì)量，Excel表格錄入，按體質(zhì)量分為7組，分別是正常組、模內(nèi)組、模外組、模混組、治內(nèi)組、治外組、治混組，每組10只。治療組予以良附丸免煎顆粒，研粉沖水后大鼠依照0.2 g·mL-1，每100 g 給藥1 mL，每日上午8時(shí)給藥1次，一共給藥7 d。

1.5.2 造模和實(shí)驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)參照胃實(shí)寒[7]造模方法，再此基礎(chǔ)上進(jìn)行改良。模內(nèi)冰水灌胃法：從冰箱取出冷凍好的蒸餾水，待其融化至冰水混合物時(shí)，按每100 g給藥2 mL灌胃，每日2次。模外束縛敷冰法：用粗棉繩將大鼠四肢束縛，上下肢分別交叉綁在冰凍好的礦泉水瓶上，每次20 min，每日1次，生理鹽水灌胃每日2次。?；鞛閮烧呓Y(jié)合。大鼠定量飲食每組200 g，飲水400 mL，于每日8時(shí)記錄體質(zhì)量、飲食、飲水等變化。治療組在造模前灌藥，每日1次，間隔4 h。7 d后，解剖取材。

1.6 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)

1.6.1 一般情況檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)7 d，每天檢測(cè)大鼠體質(zhì)量、飲食、飲水、毛發(fā)等變化。

1.6.2 胃排空率檢測(cè) 最后1 d造模給藥后，大鼠禁食不禁水12 h，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天大鼠按 3 mL·kg-1半固體胡灌胃[8-9]，30 min后麻醉取材。腹主動(dòng)脈取血后，打開(kāi)腹腔，手術(shù)線結(jié)扎幽門和賁門，取出胃，用濾紙稀釋干凈血液后稱總重，而后沿胃大彎剪開(kāi)，生理鹽水洗去胃內(nèi)容物，濾紙吸干水分，稱凈重。胃中殘留率=（胃全重-胃凈重）／所灌半固體糊×100%；胃排空率=[1-（胃全質(zhì)量-胃凈質(zhì)量）／灌胃量]×100%[8-11]。

1.6.3 小腸推進(jìn)度率檢測(cè) 取完胃后，分離腸，將幽門到回盲部的腸管分離出來(lái)并測(cè)量長(zhǎng)度，此為小腸總長(zhǎng)度，之后測(cè)炭末推進(jìn)度，即幽門部到炭末移動(dòng)的最遠(yuǎn)距離，計(jì)算小腸推進(jìn)率。小腸推進(jìn)率（%）=幽門部到炭末前沿的長(zhǎng)度/小腸的總長(zhǎng)度×100 %。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選用 SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析總結(jié)，計(jì)數(shù)資料采用百分率和χ2表示，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠飲食、飲水與體質(zhì)量變化比較 見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠飲食、飲水與體質(zhì)量變化比較（±s，n =10）

表1 各組大鼠飲食、飲水與體質(zhì)量變化比較（±s，n =10）

注：與空白組比較，### P＜0.001；與相應(yīng)模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001

3.2 各組大鼠胃殘留率、排空率與小腸推進(jìn)率變化比較 見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠胃殘留率、排空率與小腸推進(jìn)率變化比較（±s，n =10） %

表2 各組大鼠胃殘留率、排空率與小腸推進(jìn)率變化比較（±s，n =10） %

注：與空白組比較，### P＜0.001；與相應(yīng)模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001

3 討論

本研究分析寒邪客胃與氣血之間的關(guān)系，探討寒邪客胃型胃脘痛的特征，進(jìn)而更好服務(wù)于臨床。本研究結(jié)果表明，模內(nèi)和模外、?；煜啾?，對(duì)大鼠飲食、體質(zhì)量的影響不大，與畢殿紅[12]研究有所不同，說(shuō)明外寒影響程度大于內(nèi)寒。我們改良后的造模方法，符合寒邪客胃證，對(duì)胃腸功能有抑制作用，能夠減輕胃排空率[13-14]，但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)良附丸對(duì)胃排空的治療作用不顯著，可能與高良姜水煎劑抑制胃腸蠕動(dòng)有關(guān)[13]。實(shí)驗(yàn)創(chuàng)新發(fā)現(xiàn)內(nèi)寒能夠明顯降低寒邪客胃證大鼠的小腸推進(jìn)率，外寒對(duì)其影響不顯著，通過(guò)良附丸的治療能顯著改善大鼠小腸推進(jìn)率，增強(qiáng)胃腸動(dòng)力，進(jìn)一步明確不同寒邪對(duì)大鼠的影響，指導(dǎo)臨床選擇最優(yōu)治療方案。

在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)胃底部伴有不同程度脹滿，血流變學(xué)有改變，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示溫里散寒效果不是很明顯，繼而提出新的問(wèn)題，寒邪客胃易出現(xiàn)氣滯和血瘀，寒邪客胃證的治療是否應(yīng)以標(biāo)實(shí)為主，本虛為次。通過(guò)對(duì)《中華醫(yī)典》的搜索，篩選出胃實(shí)寒的治療多以散寒、行氣、活血為主，但未明確說(shuō)明三者權(quán)重，所以所以接下來(lái)的我們將就此展開(kāi)深入研討，以散寒、行氣、活血法探討寒邪客胃治療權(quán)重，為臨床胃實(shí)寒的治療提供新思路。