非小細(xì)胞肺癌患者血漿Cripto-1的水平及臨床意義

池傳珍 徐春華 朱艷梅

Cripto-1(CR-1)是表皮生長(zhǎng)因子Cripto-FRL-Criptic(EGF-CFC)家族成員之一，其基因定位在人染色體3P21.3[1]。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CR-1在人類的多種腫瘤中高表達(dá)[2-5]，它可以激活PI3K/Akt/GSK-3βc-Src和ras/raf/MAPK信號(hào)通路，介導(dǎo)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡[6]。然而CR-1在肺癌患者血漿中的變化情況鮮見(jiàn)報(bào)道，我們應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定了35例正常體檢者，40例良性肺部疾病患者和102例NSCLC患者血漿CR-1濃度，探討CR-1與NSCLC之間的關(guān)系以及臨床中的應(yīng)用價(jià)值。

資料與方法

一、臨床資料

本次研究中選取2007年1月至2009年12月來(lái)我院接受治療的患者為研究對(duì)象，研究對(duì)象去除資料不全以及不愿意接受調(diào)查者。其中NSCLC組共有102位患者經(jīng)病理組織學(xué)確診?；颊吣挲g在35～78歲之間，其中男性52例，女性50例。根據(jù)病理類型不同將患者進(jìn)行劃分，發(fā)現(xiàn)42例鱗癌、60例腺癌；低分化癌占比較高，共有48例，其次是中分化癌40例，高分化癌14例。根據(jù)肺癌TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期30例，Ⅲ期29例，Ⅳ期30例；根據(jù)有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可以將患者分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者62例。良性肺疾病組為同期住院患者40例，男25例，女15例，年齡35～74歲。健康對(duì)照組35名，均為門診健康體檢者，男25名，女10名，年齡23～69歲。3組年齡和性別之間的差異P>0.05，表明差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表1)。本次研究中對(duì)患者進(jìn)行了為期一年的隨訪。

二、檢測(cè)方法

均空腹無(wú)菌抽取外周靜脈血2 mL，用0.11mol/L枸櫞酸鈉抗凝，3000 r/min離心10 min，收集血漿-70℃冰箱中保存便于日后檢測(cè)。收集標(biāo)本時(shí)應(yīng)排除接受放化治療、手術(shù)治療以及其他抗腫瘤治療的患者。通過(guò)ELISA法檢測(cè)CR-1水平，操作過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照CR-1檢測(cè)試劑盒上的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、NSCLC患者和良性肺疾病以及健康對(duì)照者血漿CR-1水平比較

這一結(jié)果表明NSCLC患者血漿CR-1水平顯著高于良性肺疾病患者和健康對(duì)照者(P<0.05)；良性肺疾病和健康對(duì)照組之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表1)。

表1 不同組別血漿CR-1水平

二、NSCLC患者血漿CR-1水平與臨床病理關(guān)系

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NSCLC患者血漿中的CR-1水平和病理類型、患者的性別、年齡以及病理分級(jí)之間的差異P>0.05，表明無(wú)明顯相關(guān)性。相比之下，TNM分期與是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的差異P<0.05，表明存在顯著相關(guān)性(見(jiàn)表2)。

三、NSCLC患者血漿CR-1水平與患者生存時(shí)間的關(guān)系

統(tǒng)計(jì)所有患者生存時(shí)間，>12個(gè)月患者52例，<12個(gè)月者50例，其血漿CR-1水平分別為(3.99±2.34)ng/mL和(7.87±3.47)ng/mL，生存時(shí)間>12個(gè)月CR-1明顯低于生存時(shí)間<12個(gè)月者(χ2=3.617，P=0.001)，說(shuō)明NSCLC患者血漿CR-1與患者生存時(shí)間密切相關(guān)。

血漿CR-1水平對(duì)NSCLC患者生存的影響進(jìn)行單因素和多因素分析(表3)。單因素分析顯示，血漿CR-1水平與患者預(yù)后有關(guān)(P=0.005)。在多因素分析中，結(jié)果顯示血漿CR-1水平是影響NSCLC患者預(yù)后的獨(dú)立因素(P=0.03)。

表2 NSCLC患者血漿CR-1水平與臨床病理特征的關(guān)系

表3 NSCLC患者預(yù)后影響因素的Cox多因素回歸分析結(jié)果

注：*P<0.05

討 論

CR-1為表皮生長(zhǎng)因子Cripto-FRL-Criptic(EGF-CFC)家族成員之一，是從人類的惡性畸胎瘤cDNA文庫(kù)中分離出來(lái)的188個(gè)氨基酸組成的糖蛋白，參與細(xì)胞黏附和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。生理情況下，CR-1參與胚胎的正常發(fā)育，在出生后CR-1表達(dá)降低，隨著年齡的增長(zhǎng)，青春期后CR-1主要存在乳腺組織中，起著促進(jìn)乳腺組織發(fā)育的作用。通過(guò)分析人體多種上皮惡性腫瘤后發(fā)現(xiàn)，CR-1高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切關(guān)聯(lián)[2-5]。Yoon等[7]報(bào)道口腔鱗狀細(xì)胞癌中CR-1的表達(dá)與其進(jìn)展、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Ertoy等[8]報(bào)道宮頸癌中CR-1蛋白的過(guò)表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，CR-1蛋白在宮頸癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)水平明顯高于原發(fā)腫瘤。Liu[5]等的研究結(jié)果顯示，CR-1蛋白在食管癌組織中的表達(dá)水平與食管癌TNM分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，CR-1表達(dá)是食管癌預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。Gong等[9]通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)乳腺癌標(biāo)本中CR-1的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)CR-1在乳腺癌組織中的陽(yáng)性率為 47.5%，CR-1 表達(dá)是乳腺癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素。Bianco 等[10]通過(guò)對(duì)健康志愿者、良性乳腺病變及乳腺癌和結(jié)腸癌患者血漿CR-1檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，乳腺癌和結(jié)腸癌患者血漿CR-1水平明顯高于良性乳腺病變患者和健康者。徐春華等[11]通過(guò)Western blot檢測(cè)新鮮NSCLC組織，發(fā)現(xiàn)CR-1表達(dá)明顯高于癌旁正常肺組織，且肺癌細(xì)胞分化越差，CR-1陽(yáng)性表達(dá)越高；該研究還發(fā)現(xiàn)NSCLC組織CR-1表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)。黃美歐等[12]通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CR-1蛋白在人肺癌組織中的表達(dá)，結(jié)果證實(shí)CR-1蛋白表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移、侵襲顯著相關(guān)。

本研究采用ELISA法對(duì)35例正常體檢者，40例良性肺部疾病患者和102例NSCLC患者血漿CR-1水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，NSCLC患者血漿中的CR-1水平顯著高于健康對(duì)照組與良性肺部疾病組，證明通過(guò)檢測(cè)CR-1水平有利于早期診斷NSCLC。Xu等[13]的研究結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)，在I/Ⅱ期肺癌患者中，血漿CR-1聯(lián)合CEA，與單用CEA相比，可使診斷的敏感性提高近21%，特異性提高95%。NSCLC患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者血漿中CR-1水平明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者；Ⅲ～Ⅳ期患者血漿CR-1水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，說(shuō)明血漿CR-1水平與NSCLC患者的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此可以推測(cè)血漿CR-1檢測(cè)有利于評(píng)估NSCLC病情的嚴(yán)重程度。而生存時(shí)間>12個(gè)月患者血漿CR-1明顯低于生存時(shí)間<12個(gè)月者，則可以初步推斷血漿CR-1檢測(cè)對(duì)于判定NSCLC的預(yù)后也有一定參考作用。進(jìn)一步的單因素和多因素分析顯示血漿CR-1水平是影響NSCLC預(yù)后的獨(dú)立因素。

綜上所述，血漿CR-1水平可以用來(lái)評(píng)估腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移，可以作為肺癌檢測(cè)和預(yù)后的重要指標(biāo)，有利于為臨床工作者提供參考作用。