中藥貓爪草搗碎前后煎煮溶出度和多糖含量比較研究

鄭文川，羅明超，黃華文，鄧廣海

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院 藥學(xué)部，廣東 廣州 510120)

貓爪草為毛茛科植物小毛茛RanunculusternatusThunb.的干燥塊根[1]，始載于《中藥材手冊》，1977年后歷版《中國藥典》均有收載。貓爪草性溫，味甘、辛，入肝、肺經(jīng)，具有消腫散結(jié)、清熱解毒的功效[1]，臨床上用于淋巴結(jié)核、淋巴結(jié)炎、肺結(jié)核、咽炎、淋巴瘤、甲狀腺瘤、乳腺腫瘤、肺癌等疾病的治療[2]。現(xiàn)代研究表明，貓爪草主要含有多糖、有機酸、甾醇及脂、揮發(fā)油、氨基酸、黃酮及其苷、生物堿及多種微量元素[3]，其中多糖為其主要的活性成分之一，具有抗腫瘤[4]、保肝[5-7]、抗氧化[8]、調(diào)節(jié)免疫[8-11]的作用。我們在臨床實踐中發(fā)現(xiàn)，市場上貓爪草多以栽培為主，栽培品個頭較大，簇生塊根的直徑多在4～9 mm之間，質(zhì)地結(jié)實顯粉性，浸泡和煎煮過程中常存在浸泡不透，中間“干心”的現(xiàn)象，影響臨床療效。目前，關(guān)于貓爪草煎煮方法的相關(guān)文獻未見報道。為了探索貓爪草經(jīng)搗碎處理后能否一定程度上縮短煎煮時間，提高煎煮溶出度，本研究將以水溶性浸出物的含量和多糖含量為評價指標(biāo)，考察貓爪草搗碎前后煎煮液中指標(biāo)的變化，通過綜合分析，得出貓爪草最佳飲片形態(tài)和煎煮參數(shù)，從而達(dá)到提高臨床療效的目的。現(xiàn)將實驗過程報道如下。

1 儀器與材料

UV-2401型分光光度計(日本島津)；SK1200H型超聲波提取器(上?？茖?dǎo)有限公司)；240型電子分析天平(德國賽多利斯集團)；全自動紫砂鍋煮藥機(彩塘友泰五金器械廠)；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。貓爪草飲片(批號：181109071)由康美藥業(yè)股份有效公司提供，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定為毛茛科植物小毛茛RanunculusternatusThunb.的干燥塊根；葡萄糖(≥98%)、無水乙醇、苯酚、濃硫酸等試劑均為分析純，購于廣州化學(xué)試劑廠；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 飲片搗碎處理

取適量貓爪草飲片，放入飲片專用銅盅中，將其搗碎成粒度約為2～5 mm的粗顆粒，取出，即得。

2.2 貓爪草搗碎前后浸泡情況比較

分別取貓爪草飲片(整粒)和貓爪草飲片(搗碎)約60 g，加入500 mL清水，使清水完全淹沒飲片，每隔10 min取出適量飲片，切開，觀察水浸泡情況。結(jié)果表明，貓爪草飲片(整粒)浸泡30 min后，切開大部分直徑6～9 mm的飲片，中間仍存有“干心”的現(xiàn)象，浸泡60 min后“干心”現(xiàn)象明顯減少；而貓爪草飲片(搗碎)浸泡20 min后，基本未發(fā)現(xiàn)“干心”現(xiàn)象。如表1所示。

2.3 貓爪草搗碎前后煎煮溶出度比較

分別取貓爪草飲片(整粒)和貓爪草飲片(搗碎)約30 g，加入450 mL清水浸泡30 min，放入全自動紫砂鍋煲藥機中，武火加熱至沸騰，文火煎煮1 h。煎煮液經(jīng)紗布濾過，放冷，濾液加水定容或低溫濃縮至300 mL，即為貓爪草煎煮定容液，搖勻，精密量取此溶液15 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105 ℃干燥3 h，然后置干燥器中冷卻30 min，稱定重量，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。結(jié)果，貓爪草飲片(整粒)和貓爪草飲片(搗碎)的水溶性浸出物的含量分別為13.42%和17.05%(n=3)。結(jié)果見表2。

表1 兩種貓爪草飲片浸泡過程觀察結(jié)果

表2 貓爪草搗碎前后煎煮溶出度測定結(jié)果

2.4 貓爪草搗碎前后煎煮液多糖含量比較

2.4.1 供試品溶液的制備 精密吸取“2.3”項下貓爪草煎煮定容液1 mL，置10 mL試管中，滴加無水乙醇4 mL(速度約2滴/s)，邊滴邊置于快速旋渦振蕩器上振蕩，密封，冷藏放置24 h，取出，以2 500 r/min離心15 min，棄去上清液，沉淀部分加入80%乙醇2 mL，充分混合，以2 500 r/min離心15 min，棄去上清液，沉淀部分加入無水乙醇2 mL，充分混合，離心，棄去上清液，反復(fù)處理3次，沉淀部分再用熱蒸餾水溶解，放冷，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，振搖混勻，濾過，即得供試品溶液。

2.4.2 對照品制備及線性關(guān)系考察 精密稱取無水葡萄糖對照品100.80 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得葡萄糖對照品溶液。分別精密吸取葡萄糖對照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述濃度對照品溶液2 mL，加入5%的苯酚溶液1.0 mL和濃硫酸5.0 mL，超聲處理5 min，于40 ℃恒溫箱放置20 min，冷卻至室溫，同時以2 mL蒸餾水按上述條件處理作為空白溶液，于490 nm波長處測定吸光度(圖1)。結(jié)果，葡萄糖線性回歸方程為：Y=9.973X+0.005 18，線性范圍為：0.010 08～0.100 8 mg/mL，r=0.999 8(n=6)。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 吸取“2.3”項下貓爪草煎煮定容液1 mL，按照“2.4.2”項下線性關(guān)系考察方法進行操作，自“分別精密吸取葡萄糖對照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻”起進行操作，分別在0、2、4、6、8 h測定多糖的吸收度值，結(jié)果不同時間多糖的吸收度值RSD(%)=2.19%(n=5)。表明吸收度值在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性考察 吸取“2.3”項下貓爪草煎煮定容液1 mL，5份，按照“2.4.2”項下線性關(guān)系考察方法進行操作，自“分別精密吸取葡萄糖對照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻”起進行操作，測定樣品中多糖的吸收度值，結(jié)果5份樣品吸收度值RSD(%)=1.36%(n=5)，表明所用方法的重復(fù)性較好。

2.4.5 加樣回收率考察 精密吸取“2.3”項下貓爪草(整粒)煎煮定容液0.5 mL，加入適量葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.5 mL，按照“2.4.2”項下線性關(guān)系考察方法進行操作，自“分別精密吸取葡萄糖對照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻”起進行操作，測定其吸光度，計算貓爪草(整粒)多糖平均回收率及RSD，結(jié)果貓爪草(整粒)多糖平均回收率為97.66%，RSD=2.71%(n=5)，表明所用方法準(zhǔn)確性較高。

2.4.6 多糖的含量測定 精密吸取“2.3”項下貓爪草(整粒)和貓爪草(搗碎)煎煮溶液1.0 mL，按照“2.4.2”項下線性關(guān)系考察方法進行操作，自“分別精密吸取葡萄糖對照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻”起進行操作，測定兩者的吸光度，計算其多糖含量。結(jié)果貓爪草飲片(整粒)和貓爪草飲片(搗碎)中煎煮液的多糖含量分別為5.44%和6.67%(n=3)。結(jié)果見表3。

表3 貓爪草搗碎前后煎煮多糖含量測定結(jié)果

3 討論

2009年衛(wèi)生部和國家中醫(yī)藥管理局聯(lián)合頒發(fā)《醫(yī)療機構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》，對中藥飲片的煎煮步驟及操作進行了明確規(guī)定[12]。然而我們在臨床實踐中，發(fā)現(xiàn)不同飲片形態(tài)對飲片煎煮質(zhì)量影響較大，如法半夏、夏天無、貓爪草等飲片，2015年版《中國藥典》規(guī)定其整粒入藥，然而這類藥材直徑較大、富含淀粉、質(zhì)地致密，導(dǎo)致浸泡和煎煮過程中水分難以滲透到藥材內(nèi)部，有效成分也很難滲透到煎煮液中，甚至煎煮后藥渣還存在“內(nèi)有干心”的現(xiàn)象，嚴(yán)重影響了飲片的煎煮質(zhì)量，從而影響了臨床療效。本研究對貓爪草兩種飲片形式(整粒和搗碎)浸泡和煎煮進行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，貓爪草經(jīng)過搗碎處理后有利于水分滲透，促進了成分溶出，因此可得出“臨用時搗碎”是貓爪草一種較為理想的飲片形式，建議新版《中國藥典》對貓爪草項下“用法用量”進行修訂，目的是提高貓爪草煎煮質(zhì)量，節(jié)省藥材資源。