尖銳濕疣患者外周血IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4因子水平檢測及臨床意義

馬亞平

湖北省襄陽市中心醫(yī)院檢驗科，湖北襄陽 441021

尖銳濕疣是我國臨床上比較常見的性傳播疾病，主要是由于患者感染了人乳頭瘤病毒(HPV)[1],該疾病的特點為反復發(fā)作，臨床發(fā)現(xiàn)，對于患者的同一部位即使進行相同方法的治療，治療后患者復發(fā)率與復發(fā)程度均不相同。這就說明，導致尖銳濕疣反復發(fā)作的原因可能除了與病毒亞型、感染部位有關(guān)外，還可能與免疫應答狀態(tài)存在一定聯(lián)系[2]。早在80年代，我國發(fā)生尖銳濕疣的患者人數(shù)逐漸增多，因此，對引發(fā)的相關(guān)因素進行研究與分析，可為臨床治療尖銳濕疣提供一定的科學依據(jù)。本研究對尖銳濕疣患者外周血白細胞介素-2(IL-2)、IL-12、γ-干擾素(IFN-γ)、IL-4因子水平進行檢測，并對其臨床意義進行分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年8月至2018年8月本院收治的尖銳濕疣患者50例作為研究組，另選取同期在本院進行體檢的健康者50例作為對照組。對照組50例，男30例，女20例，年齡18～54歲，平均(45.5±4.6)歲；研究組50例，男33例，女17例，年齡18～55歲，平均(45.2±4.2)歲；病程3個月至1年，平均(0.6±0.1)年。兩組研究對象性別、年齡等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究得到本院倫理委員會批準。

1.2納入和排除標準

1.2.1納入標準 (1)研究組患者均符合尖銳濕疣相關(guān)診斷標準；(2)經(jīng)臨床診斷、檢查確診為尖銳濕疣；(3)近期未使用任何免疫調(diào)節(jié)劑、增強劑、抑制劑；(4)對照組身心健康，無重大疾??；(5)30 d內(nèi)未使用過對研究結(jié)果產(chǎn)生影響的藥物；(6)所有研究對象均知情同意此研究并簽署知情同意書。

1.2.2排除標準 (1)存在自身免疫性疾病的患者；(2)進行器官移植的患者；(3)存在腫瘤等惡性疾病的患者；(4)全身器官發(fā)生衰竭的患者；(5)心肝腎功能異常的患者；(6)處于懷孕或哺乳期的患者。

1.3方法

1.3.1主要試劑 試劑主要有抗CIM單抗[異硫氰酸胍(FITC)標記，鼠抗人IgG，法國基因公司提供]；抗IL-2、IL-12、IL-4單抗(PE標記，鼠抗人IgG)、抗IFN-1單抗[藻紅素(PE)標記，鼠抗人IgG]、CytodeteetTM試劑盒，均由荷蘭ImmunoQualityProducts公司提供；淋巴細胞分離液由上海恒信公司提供[3]。

1.3.2細胞計數(shù) 所有研究對象均在入院后第2天清晨采集空腹靜脈血5 mL，采用流式細胞儀計數(shù)。對采集的血液進行肝素抗凝，對外周血單個核細胞(PBMC)進行常規(guī)分離并制備細胞懸液，細胞濃度大約為1×106/mL[4]。取2 μmol/L莫能星、1 μmol/L艾羅霉素、50 ng/mL巴豆酯、1 mL細胞懸液加到培養(yǎng)板一孔中，后放置到37 ℃、5%二氧化碳條件下進行孵育，大約5 h后采用4%冷多聚甲醛液對細胞固定10 min，再次加入500 μL抗IL-2PE單抗、IL-12單抗、IL-4單抗、IFN-γ單抗，最后1管為對照，然后將其放置到4 ℃條件下避光孵育，大約20 min后對其進行細胞破膜液洗滌，并將其重新懸在HBSS中，混合均勻后上機檢測[5]。經(jīng)過流式細胞儀(FAC-Sort，美國BectonDickinson公司生產(chǎn))對細胞表面的抗原進行標記，并對T細胞亞群因子進行分選，計數(shù)大約為1×104個，同時采用CellQuest軟件對數(shù)據(jù)進行分析，將散點圖進行打印，通過熒光抗體染色對陽性細胞百分率進行記錄[6]。

1.4觀察指標 (1)比較兩組研究對象外周血IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4、Th1/Th2水平[7]。(2)比較兩組研究對象，包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。

2 結(jié) 果

2.1兩組研究對象IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4、Th1/Th2水平比較 見表1。研究組IL-2、IL-12、IFN-γ、Th1/Th2水平均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；研究組IL-4水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1 兩組IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4、Th1/Th2水平比較

2.2兩組研究對象T細胞亞群水平比較 見表2。研究組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；研究組CD8+水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表2 兩組T細胞亞群水平比較

3 討 論

尖銳濕疣是我國臨床上常見的性傳播疾病，發(fā)生原因主要與人體感染HPV有關(guān)，該疾病治療后復發(fā)率較高。因此，采取有效措施防止尖銳濕疣傳播、復發(fā)是臨床研究的重點。臨床研究發(fā)現(xiàn)，尖銳濕疣的發(fā)生、發(fā)展與機體免疫功能下降有緊密的聯(lián)系[8]。

CD4+T細胞按照分泌的細胞因子譜不同分為Th1、Th2功能不同的獨立細胞亞群。Th1細胞主要分泌IL-2、IL-12、IFN-γ因子，主要參與細胞毒T細胞所介導的細胞免疫，在抗病毒感染免疫期間發(fā)揮非常重要的作用；Th2細胞主要分泌IL-4，主要參與體液免疫[9]。Th1、Th2細胞在維持機體免疫應答平衡方面發(fā)揮關(guān)鍵性作用，如果二者平衡被打破，就會導致病毒感染性疾病侵入人體，使人體發(fā)生免疫性疾病。Th1、Th2細胞平衡狀態(tài)受多種原因的影響，其中IL-2、IL-12、IFN-γ因子水平是非常關(guān)鍵的因素，且IL-12、IL-4的作用是最關(guān)鍵的[10]。IL-2主要由Th1細胞分泌而來，其促進細胞毒T細胞殺傷的作用非常強，且可以增強自然殺傷(NK)細胞活性，是免疫調(diào)節(jié)過程中較為重要的因子。尖銳濕疣患者外周血中PBMC分泌的IL-2、IFN-γ因子水平降低。IL-2水平下降會導致NK細胞能力降低，最終會降低破壞病毒感染靶細胞、溶解病毒感染靶細胞的能力[11]。導致尖銳濕疣患者IL-2水平下降的原因很多，主要包括：(1)Th1細胞數(shù)量減少，導致Th1分泌的IL-2因子水平減少；(2)尖銳濕疣患者體內(nèi)IL-10、可溶性抑制因子水平明顯升高，促進了IL-4分泌；(3)尖銳濕疣患者體內(nèi)Th1、Th2平衡狀態(tài)遭到破壞，Th1細胞減少、Th2細胞增多，最終導致IL-2因子水平減少。

IL-12是當前臨床上發(fā)現(xiàn)的較為有效的NK細胞活性刺激因子與細胞毒T淋巴細胞(CVL)，它可以促進Th0細胞逐漸向Th1細胞分化、增殖，并且可以有選擇性地促進Th1型免疫應答發(fā)生。

IFN-γ主要由Th1細胞分泌而來，是巨噬細胞進行免疫反應調(diào)控的依賴因子，它可以對巨噬細胞進行激活，使其對細胞內(nèi)病原體進行清除。IFN-γ在淋巴細胞免疫功能調(diào)節(jié)方面也發(fā)揮非常重要的作用，并且可以明顯增強NK細胞的生物活性和抗原遞呈細胞的功能。

IL-4主要由Th2細胞分泌而來，它可以抑制Th0細胞逐漸向Th1細胞分化、增殖，但是會促進Th0細胞逐漸向Th2細胞分化、增殖，IL-4因子還可以通過對IFN-γ因子進行誘導來產(chǎn)生一氧化氮，并且會降低巨噬細胞消除病原體的功能[12]。尖銳濕疣患者局部淋巴細胞發(fā)生失衡會導致PBMC功能、淋巴細胞功能降低或者是受到抑制，從而不能有效地對病毒靶細胞進行清除，不能抑制病毒增長與繁殖。同時，IL-4可以促進自身受體的表達，并抑制IL-12的分泌，故會促進Th1應答向Th2應答轉(zhuǎn)移。

本研究結(jié)果顯示，研究組IL-2、IL-12、IFN-γ、Th1/Th2水平均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；研究組IL-4水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；研究組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；研究組CD8+水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。說明Th1/Th2狀態(tài)發(fā)生失衡是導致尖銳濕疣發(fā)生的關(guān)鍵原因。因此，在尖銳濕疣發(fā)生和發(fā)展過程中，患者細胞免疫功能處于紊亂狀態(tài)，由于Th1細胞的表達受到明顯抑制，而Th2則處于優(yōu)勢，就使Th1應答逐漸向Th2應答轉(zhuǎn)移。

導致尖銳濕疣發(fā)生的原因較多，發(fā)生機制較為復雜，尖銳濕疣患者發(fā)病后IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4水平異常，T淋巴細胞亞群也會發(fā)生異常，故尖銳濕疣患者細胞免疫功能降低是導致尖銳濕疣反復發(fā)作的重要原因。通過對患者各項因子水平進行檢測，可為臨床治療尖銳濕疣提供一定的科學依據(jù)。

綜上所述，尖銳濕疣患者外周血IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4因子水平存在明顯異常。