生物標(biāo)志物聯(lián)合檢測在早期糖尿病腎病診斷中的應(yīng)用

朱清紅,張吉才,康 敏

湖北省十堰市太和醫(yī)院/湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖北十堰 442000

流行病學(xué)報(bào)道提示，糖尿病腎病確診時(shí)多已進(jìn)入中晚期，臨床治療難度較大，患者遠(yuǎn)期預(yù)后亦較差[1]。盡早診斷糖尿病腎病并積極給予干預(yù)，對(duì)于延緩患者病情進(jìn)展及逆轉(zhuǎn)腎功能損傷有重要意義。近年來，尋找更為有效的實(shí)驗(yàn)室生物學(xué)標(biāo)志物來提高早期糖尿病腎病診斷準(zhǔn)確率，已成為醫(yī)學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)問題。血清肌酐(SCr)和血尿素(Sur)是臨床評(píng)價(jià)腎功能常規(guī)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，其中SCr還被KDIGO推薦，但在早期腎功能損傷時(shí)SCr水平變化并不明顯，診斷靈敏度較低[2]。近年來，包括血清胱抑素C(CysC)、中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)及C1q在內(nèi)的多種新型實(shí)驗(yàn)室生物學(xué)標(biāo)志物被廣泛應(yīng)用于慢性腎臟病的診斷中，其中CysC較SCr能更靈敏、特異地反映腎小球的濾過功能[3]；C1q已被證實(shí)與2型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，同時(shí)其水平在多種腎臟病變中可見明顯變化[4]；NGAL則是最具潛能的急性腎損傷標(biāo)志物[5]。盡管以上指標(biāo)在理論上均能夠用于早期糖尿病腎病的輔助診斷，但國內(nèi)有關(guān)多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用的報(bào)道仍相對(duì)較少[5]。本研究旨在探討SCr、Sur、CysC、NGAL及C1q聯(lián)合檢測應(yīng)用于早期糖尿病腎病輔助診斷的臨床價(jià)值，為提高我國早期糖尿病腎病診斷的準(zhǔn)確率探索新方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取十堰市太和醫(yī)院2018年收治的單純糖尿病患者50例作為單純糖尿病組、早期糖尿病腎病患者65例作為早期糖尿病腎病組及健康體檢者150例作為健康對(duì)照組，其中早期糖尿病腎病診斷標(biāo)準(zhǔn)為尿微量清蛋白與尿肌酐比值(UACR)≥30但<300；單純糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)為UACR<30且腎小球?yàn)V過率(eGFR)≥30 mL/(min·1.73 m2)；以上兩組患者均符合美國糖尿病學(xué)會(huì)2017版糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)排除合并急慢性感染性疾病、急性腦梗死、心肌梗死、急慢性腎炎及免疫系統(tǒng)疾病者。入選者均簽署知情同意書，且本研究經(jīng)十堰市太和醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集處理方法 (1)血液標(biāo)本：清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集靜脈血5 mL，放入含分離膠/纖維蛋白酶促凝劑真空管內(nèi)顛倒混勻，靜置30 min左右，離心(轉(zhuǎn)速3 600 r/min，離心時(shí)間15 min)分離血清；對(duì)于未能及時(shí)檢測的標(biāo)本放于-20 ℃冰箱內(nèi)保存。(2)尿液標(biāo)本：留取中段尿10 mL左右，離心(轉(zhuǎn)速1 500 r/min，離心時(shí)間10 min)取上清液，2 h內(nèi)完成尿肌酐和尿清蛋白檢測，計(jì)算UACR。

1.2.2標(biāo)本檢測方法 采用羅氏Cobas C700型全自動(dòng)生化分析儀檢測Sur、SCr、CysC、C1q及NGAL水平，其中C1q、CysC及NGAL檢測采用免疫透射比濁法，Sur檢測采用尿素酶-谷氨酸脫氫酶法，SCr檢測采用肌氨酸氧化酶法；采用百普賽斯A30型全自動(dòng)特定蛋白分析儀檢測尿肌酐和尿清蛋白水平，分別采用肌氨酸氧化酶法和免疫透射比濁法。

2 結(jié) 果

2.13組研究對(duì)象一般資料和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平比較 見表1。健康對(duì)照組150例，男60例(40.00%)，單純糖尿病組50例，男24例(48.00%)，早期糖尿病腎病組65例，男40例(61.54%)。早期糖尿病腎病組男性比例、年齡、Sur水平、SCr水平、CysC水平、UACR水平、C1q水平及NGAL水平均明顯高于單純糖尿病組和健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；早期糖尿病腎病組eGFR明顯低于單純糖尿病組和健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 3組研究對(duì)象一般資料和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平比較

組別neGFR[mL/(min·1.73m2)]UACRC1q(mg/L)NGAL(μg/L)健康對(duì)照組150110.61±13.049.49±3.22160.45±16.87101.41±13.60單純糖尿病組50105.94±12.1011.70±3.03176.20±19.33*115.95±16.79*早期糖尿病腎病組6577.92±8.14*△56.84±17.80*△187.08±23.02*△143.04±20.99*△

注：與健康對(duì)照組比較，*P<0.05；與單純糖尿病組比較，△P<0.05。

圖1 相關(guān)指標(biāo)單項(xiàng)檢測的ROC曲線

圖2 相關(guān)指標(biāo)2項(xiàng)聯(lián)合檢測的ROC曲線

2.2SCr、Sur、CysC、NGAL及C1q單項(xiàng)及聯(lián)合檢測應(yīng)用于早期糖尿病腎病診斷的效能比較 見表2。相關(guān)指標(biāo)單項(xiàng)檢測時(shí)，CysC診斷效能最高，Sur最低，CysC診斷效能均明顯高于C1q、NGAL、SCr及Sur，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，診斷臨界值取約登指數(shù)最大處相對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)。相關(guān)指標(biāo)2項(xiàng)聯(lián)合檢測時(shí)，C1q+CysC診斷效能最高，SCr+NGAL最低,C1q+CysC診斷效能明顯高于其他組合,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而CysC+NGAL、SCr+C1q及C1q+NGAL均明顯高于SCr+NGAL、SCr+CysC，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。相關(guān)指標(biāo)3項(xiàng)聯(lián)合檢測時(shí)，C1q+CysC+NGAL診斷效能最高，SCr+NGAL+CysC最低；C1q+CysC+NGAL、C1q+CysC+SCr及C1q+SCr+NGAL診斷效能明顯高于SCr+NGAL+CysC，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C1q+NGAL+CysC+SCr 4項(xiàng)聯(lián)合檢測較其他組合診斷效能最高,但C1q+NGAL+CysC+SCr、C1q+CysC+NGAL、SCr+C1q+CysC及CysC+C1q診斷效能組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且CysC+C1q診斷特異度較C1q+NGAL+CysC+SCr更高。見圖1～4。

表2 SCr、Sur、CysC、NGAL及C1q單項(xiàng)及聯(lián)合檢測應(yīng)用于早期糖尿病腎病診斷的效能比較

注：-表示無數(shù)據(jù)。

圖3 相關(guān)指標(biāo)3項(xiàng)聯(lián)合檢測的ROC曲線

圖4 相關(guān)指標(biāo)4項(xiàng)聯(lián)合檢測的ROC曲線

3 討 論

國際糖尿病聯(lián)盟研究顯示，目前世界范圍內(nèi)糖尿病患者人數(shù)接近4.3億，而在2050年將達(dá)6.5億[6]；我國成年人群糖尿病患病率接近11%，已成為影響中老年人生活質(zhì)量的主要慢性疾病之一。糖尿病腎病是糖尿病患者常見的微血管并發(fā)癥之一，目前國內(nèi)外指南認(rèn)為，早期診斷及干預(yù)是改善糖尿病腎病患者病情進(jìn)展及提高生存質(zhì)量的關(guān)鍵[7]，而這需要尋找更靈敏、特異的實(shí)驗(yàn)室生物學(xué)標(biāo)志物檢測方案，以準(zhǔn)確診斷早期糖尿病腎病。

UACR是糖尿病腎病早期診斷靈敏的生物學(xué)標(biāo)志物之一，但患者腎臟結(jié)構(gòu)損傷可能發(fā)生于蛋白尿之前，故其往往無法實(shí)現(xiàn)最早期診斷，且特異性相對(duì)較差[8]。近年來，多種腎損傷標(biāo)志物相繼應(yīng)用于臨床診斷中，其中CysC已被KDIGO指南推薦，而C1q和NGAL的價(jià)值亦獲得醫(yī)學(xué)界的認(rèn)可[9-10]，但以上指標(biāo)單項(xiàng)及聯(lián)合檢測應(yīng)用于早期糖尿病腎病的輔助診斷價(jià)值如何仍無明確定論。

C1q是與人體免疫系統(tǒng)功能及免疫相關(guān)疾病密切相關(guān)的一種補(bǔ)體成分，但最新研究證實(shí)其在多種腎病輔助診斷及治療監(jiān)測方面具有臨床應(yīng)用價(jià)值[11]；1項(xiàng)免疫組化試驗(yàn)研究提示，糖尿病患者胰腺組織內(nèi)存在C1q大量沉積，間接說明血清C1q水平異?？赡芘c2型糖尿病病情發(fā)生和發(fā)展相關(guān)[12]。NGAL屬于小分子分泌性蛋白，其在人體代謝異常組織細(xì)胞中呈高表達(dá)狀態(tài)；在腎損傷發(fā)生時(shí)，血清NGAL水平往往迅速上升，靈敏度優(yōu)于SCr和Sur等傳統(tǒng)腎損傷標(biāo)志物[13-14]。CysC對(duì)于腎功能評(píng)價(jià)不受年齡、性別、體質(zhì)量及炎性反應(yīng)等多種因素影響，臨床應(yīng)用亦越來越廣泛[15-17]。

本研究中單純糖尿病和早期糖尿病腎病患者CysC、C1q及NGAL水平均明顯高于健康體檢者，同時(shí)早期糖尿病腎病患者又高于單純糖尿病患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示血清C1q、NGAL及CysC水平檢測可應(yīng)用于糖尿病腎病的早期診斷；而ROC曲線分析提示，相關(guān)指標(biāo)單項(xiàng)檢測時(shí)，CysC診斷效能最高，Sur最低，CysC、C1q及NGAL診斷效能均優(yōu)于SCr，但需要注意的是，盡管SCr檢測的AUC較低，但特異度相對(duì)較高，故其應(yīng)用于腎功能評(píng)價(jià)仍然具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

考慮到單一實(shí)驗(yàn)室生物學(xué)標(biāo)志物診斷效能較差及臨床醫(yī)生檢查習(xí)慣，本研究分析了2項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測應(yīng)用于早期糖尿病腎病的診斷效能，C1q+CysC診斷效能最高，SCr+NGAL最低，且C1q+CysC診斷效能明顯高于其他組合，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且特異度較高，由此表明，在采用兩種實(shí)驗(yàn)室生物學(xué)標(biāo)志物指標(biāo)聯(lián)合檢測時(shí)應(yīng)優(yōu)先選擇C1q+CysC。同時(shí)作者觀察到CysC+C1q+NGAL和CysC+C1q+NGAL+SCr檢測盡管診斷靈敏度更佳，但診斷效能較CysC+C1q并未顯現(xiàn)出明顯優(yōu)勢；同時(shí)從檢測成本、速度、影響因素及診斷特異度等多方面考慮，臨床采用C1q+CysC聯(lián)合檢測應(yīng)用于早期糖尿病腎病診斷可能最佳。

綜上所述，C1q、CysC及NGAL應(yīng)用于早期糖尿病腎病輔助診斷價(jià)值優(yōu)于SCr、Sur，且C1q聯(lián)合CysC檢測診斷效能更佳。