慢性丙型肝炎患者血清丙型肝炎病毒載量與肝纖維化的相關(guān)性研究

邵林楠 張樹(shù)婷 周世航 王 霓 潘凌子▲ 劉 銘

1.大連市血液中心，遼寧大連 116001；2.大連醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)教研室，遼寧大連 116044

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是單股正鏈核糖核酸（RNA）病毒，HCV RNA 是HCV 的遺傳物質(zhì)，其載量是表示體內(nèi)HCV 含量的直接指標(biāo)，含有9 個(gè)基因區(qū)，全長(zhǎng)約9.6 kb[1]。HCV RNA 載量可提示體內(nèi)病毒復(fù)制的能力，在HCV 感染和致病機(jī)制中有重要的地位。一般感染HCV 后發(fā)病隱匿，不易引起患者的重視，因而慢性率高，易發(fā)展成肝纖維化進(jìn)而轉(zhuǎn)變?yōu)楦斡不蚋渭?xì)胞癌[2]。肝纖維化是由于構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的各種成分過(guò)量沉積導(dǎo)致的正常肝細(xì)胞功能喪失[3]。肝活檢被公認(rèn)為肝纖維化診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，用于纖維化嚴(yán)重程度的評(píng)估[4]。但肝活檢具有創(chuàng)傷性，而且技術(shù)要求較高，導(dǎo)致諸多患者接受度不佳，因此為患者找到一種血清學(xué)或影像學(xué)檢查手段極為關(guān)鍵。非侵入性血清生物標(biāo)志物：膠原Ⅳ（Collagen Ⅳ，C-Ⅳ），層粘連蛋白（Laminin，LN），Ⅲ型氨基末端前肽膠原蛋白（type-Ⅲ pro-collagen，P ⅢNP）和透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）被作為慢性肝炎肝纖維化程度的4 項(xiàng)指標(biāo)在臨床上應(yīng)用廣泛[5]。同時(shí)，一種建立在超聲基礎(chǔ)上的FibroScan 瞬時(shí)彈性診斷技術(shù)與肝臟纖維化程度之間有很好的相關(guān)性，被認(rèn)為是診斷肝臟纖維化的可靠手段[6-8]。近年來(lái)，多位學(xué)者試圖闡述血清中HCV RNA載量與肝纖維化的關(guān)系，但是得到的結(jié)論尚存爭(zhēng)議。Shahid 等[9]發(fā)現(xiàn)在HCV 患者中HCV RNA 載量與肝纖維化顯著相關(guān)。而梁勇彪等[10]發(fā)現(xiàn)HCV RNA 載量只與肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)中的1 項(xiàng)HA 相關(guān)，與其他3 項(xiàng)指標(biāo)無(wú)關(guān)。而多數(shù)學(xué)者認(rèn)為HCV RNA 載量與肝纖維化不相關(guān)[11-14]。本研究利用血清肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)及瞬時(shí)彈性檢測(cè)指標(biāo)來(lái)探討HCV RNA 載量與肝纖維化的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015 年4～12 月就診于大連市第六人民醫(yī)院的162 例慢性HCV 感染患者，均符合原衛(wèi)生部2008 年頒布的丙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[14]（WS213-2008）：血清HCV-RNA 陽(yáng)性+慢性臨床表現(xiàn)/組織病理檢查/影像學(xué)檢查，且無(wú)其他肝臟疾病。男84 例，女78 例；年齡（54±14）歲。為了研究HCV RNA 病毒載量與肝纖維化的相關(guān)性，根據(jù)HCV RNA 病毒載量結(jié)果將HCV 患者分為3 組：lg（HCV RNA）≤5 組（21 例，其中男11 例，女10 例），5＜lg（HCV RNA）≤7 組（66 例，其中男31 例，女35 例）和lg（HCV RNA）＞7 組（75 例，其中男42 例，女33 例）。162 例患者全部收集到肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù)，其中僅有54 例患者進(jìn)行了FibroScan 瞬時(shí)彈性檢測(cè)。

1.2 主要試劑及儀器

血清HA、PⅢNP、LN、C-Ⅳ試劑盒（批號(hào)分別為20080111、20080310、20080213、20080201）由上海 海軍醫(yī)學(xué)研究所提供。全自動(dòng)核酸分離純化及檢測(cè)系統(tǒng)COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan 及其配套試劑購(gòu)自Roche 公司。FibroScan 502 儀器購(gòu)自法國(guó)ECHOSENS 公司。

1.3 血清HA、PⅢNP、LN、C-Ⅳ檢測(cè)

血清HA、PⅢNP、LN、C-Ⅳ含量均用放射免疫法檢測(cè)，嚴(yán)格按照廠家使用說(shuō)明書(shū)操作。

1.4 HCV RNA 病毒載量檢測(cè)

HCV RNA 病毒載量采用全自動(dòng)核酸分離純化及檢測(cè)系統(tǒng)COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan 及其配套試檢測(cè)，每組檢測(cè)均有陰性、弱陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照，具體操作和結(jié)果判定嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。用以10 為底的對(duì)數(shù)形式表示。

1.5 FibroScan 瞬時(shí)彈性檢測(cè)

FibroScan 502 儀器按照操作規(guī)范嚴(yán)格操作，探頭選擇右側(cè)腋前線至腋中線7、8 肋間或8、9 肋間，連續(xù)有效檢測(cè)10 次，最終結(jié)果取中位數(shù)，單位為kPa。檢測(cè)數(shù)據(jù)的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)要求：四分位間距小于中位數(shù)的1/3，成功率>60%結(jié)果才可靠。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料不符合正態(tài)分布，以中位數(shù)（四分位數(shù)）[M（P25，P75）]表示，多組間變量差異采用Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)方法分析；相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)分析。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCV RNA 病毒載量與肝纖維化

162 例慢性HCV 患者在不同病毒載量組別間肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)分布情況見(jiàn)表1。肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)在不同HCV RNA 病毒載量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。

2.2 HCV RNA 病毒載量與FibroScan 瞬時(shí)彈性檢測(cè)

54 例慢性HCV 患者在不同病毒載量組別間Fi-broScan 瞬時(shí)彈性檢測(cè)指標(biāo)分布情況，瞬時(shí)彈性檢測(cè)結(jié)果在不同HCV RNA 病毒載量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。見(jiàn)表2。

表1 162 名慢性HCV 患者在不同病毒載量組別間肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)分布情況[μg/L，M（P25，P75）]

表2 54 例慢性HCV 患者在不同病毒載量組別間FibroScan 檢測(cè)結(jié)果[kPa，M（P25，P75）]

2.3 各指標(biāo)間相關(guān)性分析

FibroScan 瞬時(shí)彈性檢測(cè)值與肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)C-Ⅳ、LN、PⅢNP 及HA 均呈正相關(guān)（r=0.530、0.340、0.289、0.438，P=0.000、0.007、0.023、0.000），HCV RNA病毒載量與肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)及FibroScan 瞬時(shí)彈性檢測(cè)值均無(wú)相關(guān)性（P=0.571、0.067、0.232、0.865、0.327）。

3 討論

經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析得出，中國(guó)大陸地區(qū)根據(jù)地理位置不同，抗HCV 抗體流行率也是不同的，流行率范圍為0.32%～6.51%，平均水平為0.91%，而遼寧省抗HCV抗體流行率僅次于最高的省份湖北（6.51%）位居第二（2.88%）[13]，遠(yuǎn)高出平均水平，形式嚴(yán)峻不容樂(lè)觀。因此必須提高對(duì)HCV 感染患者的臨床特征及發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)，對(duì)于在2030 年前消除病毒性肝炎的全球衛(wèi)生部門(mén)戰(zhàn)略目標(biāo)具有十分重要的意義[15]。肝纖維化是慢性肝病演變?yōu)楦斡不闹虚g必經(jīng)階段，是疾病演變中一個(gè)連續(xù)進(jìn)展的過(guò)程[16]。HA、PⅢNP、LN 及C-Ⅳ四項(xiàng)指標(biāo)均屬于細(xì)胞外基質(zhì)，在臨床上應(yīng)用比較廣泛，在肝纖維化的形成及發(fā)展的不同時(shí)期，血清中濃度也不相同[17]。FibroScan 瞬時(shí)彈性診斷技術(shù)基于肝臟纖維化與肝臟彈性之間的關(guān)聯(lián)性，利用切變彈性探測(cè)儀對(duì)纖維化程度進(jìn)行瞬時(shí)測(cè)定[18]。

根據(jù)本研究中各指標(biāo)間相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)瞬時(shí)彈性檢測(cè)結(jié)果與肝纖維化四項(xiàng)指標(biāo)均有良好的相關(guān)性，說(shuō)明瞬時(shí)彈性檢測(cè)結(jié)果可以作為肝纖維化的預(yù)測(cè)因子[19]，而且，美國(guó)胃腸病學(xué)會(huì)臨床指南建議用瞬時(shí)彈性檢測(cè)結(jié)果來(lái)評(píng)估HCV 患者的纖維化程度[20]。本研究利用血清肝纖維化4 項(xiàng)參數(shù)及FibroScan 瞬時(shí)彈性檢測(cè)兩種手段來(lái)評(píng)估HCV 患者肝纖維化程度，進(jìn)而探討HCV RNA 載量與肝纖維化的相關(guān)性。結(jié)果顯示，HCV RNA 載量與肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)及FibroScan瞬時(shí)彈性檢測(cè)結(jié)果均不相關(guān)。為了進(jìn)一步研究HCV RNA 病毒載量與肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)及瞬時(shí)彈性檢測(cè)結(jié)果之間的關(guān)系，本研究對(duì)樣本進(jìn)行分組，在不同病毒載量組別間肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)及瞬時(shí)彈性檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05），由以上結(jié)果得出結(jié)論，HCV 患者血清中RNA 病毒載量與肝纖維化不相關(guān)。本研究的結(jié)論與多數(shù)學(xué)者觀點(diǎn)一致[11-13]。原因可以分為以下幾點(diǎn)：血清中HCV RNA載量不是一個(gè)穩(wěn)定的參數(shù)而是波動(dòng)的；HCV 也可在肝臟以外部位復(fù)制，大量的循環(huán)HCV 并不總是意味著在肝臟中病毒復(fù)制處于更活躍的狀態(tài)；肝纖維化是由于構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的各種成分過(guò)量沉積所導(dǎo)致，與血清中HCV RNA 載量關(guān)系不密切。

本研究既有優(yōu)點(diǎn)也存在不足之處，優(yōu)點(diǎn)是學(xué)者們多是通過(guò)血清學(xué)肝纖維化4 項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果來(lái)判斷與HCV RNA 載量的相關(guān)性[11-13]，而本研究除了上述4 項(xiàng)指標(biāo)外還通過(guò)超聲成像系統(tǒng)分析了肝纖維化與血清中HCV RNA 載量的相關(guān)性，使結(jié)果更加可靠。不足之處是未對(duì)患者進(jìn)行HCV 分型，但是有研究表明不同基因型與血清中HCV RNA 載量并不相關(guān)[21]。

綜上所述，本研究通過(guò)對(duì)慢性HCV 患者血清中HCV RNA 載量與HA、PⅢNP、LN 及C-Ⅳ及瞬時(shí)彈性檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)血清中HCV RNA 病毒載量與以上參數(shù)均不相關(guān)，即血清中HCV RNA 病毒載量不能反映肝臟纖維化程度。