血清TSH、TSGF與p185蛋白聯(lián)合診斷乳腺癌的臨床意義

張克明，祁應(yīng)才，屈凱強(qiáng)，戴丹菁2，張建文

(1.應(yīng)城市人民醫(yī)院胃腸甲乳外科，湖北 應(yīng)城 432400；2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院漢川醫(yī)院腫瘤科，湖北 漢川 431600)

乳腺癌發(fā)病率居惡性腫瘤的榜首[1]。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示，2015年中國(guó)乳腺癌發(fā)病病例約有26.9萬(wàn)，死亡病例7.0萬(wàn)，分別占女性腫瘤發(fā)病的15%和死亡的7%，嚴(yán)重威脅著女性的健康[2]。城市女性乳腺癌發(fā)病率高于農(nóng)村地區(qū)，且乳腺癌的發(fā)病呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)[3]。目前認(rèn)為，乳腺癌的危險(xiǎn)因素主要包括家族史、遺傳、生殖因素、不良生活習(xí)慣以及乳腺增生性疾病[4]。有研究認(rèn)為，乳腺和甲狀腺均屬于激素應(yīng)答器官，內(nèi)分泌功能的紊亂與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5]。測(cè)定促甲狀腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)水平，分析甲狀腺水平，對(duì)于乳腺癌的診斷具有一定的價(jià)值；腫瘤特異性生長(zhǎng)因子(tumor specific growth factor,TSGF)是臨床腫瘤診斷的重要依據(jù)；p185蛋白具有酪氨酸激酶活性，由于C-erbB-2基因的擴(kuò)展，其在乳腺癌患者的表達(dá)可高達(dá)95%，是乳腺癌的重要診斷依據(jù)[6]。本研究通過(guò)探討TSH、TSGF、p185蛋白表達(dá)水平與乳腺癌疾病的相關(guān)性，以期為臨床診斷及預(yù)后評(píng)估提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2016年8月至2018年10月應(yīng)城市人民醫(yī)院收治的60例女性乳腺癌患者作為研究對(duì)象，年齡35～45歲，平均(42.88±2.33)歲；BMI平均(23.69±2.95)kg/m2。按照TNM分期分為Ⅰ-Ⅱ組(Ⅰ-Ⅱ期患者)和Ⅲ-Ⅳ組(Ⅲ-Ⅳ期患者)。Ⅰ-Ⅱ組36例患者，年齡平均(42.48±2.59)歲，BMI平均(24.06±2.76)kg/m2；Ⅲ-Ⅳ組24例患者，年齡平均(42.37±2.46)歲，BMI平均(23.91±2.48)kg/m2。另選取我院同期體檢健康人群60例作為對(duì)照組，年齡平均(42.39±2.37)歲，BMI平均(23.39±3.08)kg/m2。3組患者年齡和BMI比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性(表1)。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)論證通過(guò)，所有患者和健康體檢人群均簽署知情同意書(shū)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①乳腺癌患者經(jīng)過(guò)病理診斷，均符合中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2015版)[7]中關(guān)于乳腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，為首次發(fā)??；②對(duì)照組患者的血細(xì)胞計(jì)數(shù)、肝腎功能、血脂等均正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①?gòu)?fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者；②乳腺急性炎癥期患者；③具有精神疾病或存在認(rèn)知功能障礙者；④合并其他類(lèi)型腫瘤者。

1.2 方法

3組患者入組后第2天均進(jìn)行肘靜脈采集血液4 mL，4 ℃靜置20 min，5 000 r/min離心20 min，離心半徑為20 cm，取上清液，置于-80 ℃下保存，血清TSH采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)進(jìn)行檢測(cè)，以酶作為標(biāo)記物，使用非競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)模式，通過(guò)酶催化底物顯色。TSGF檢測(cè)在酸性環(huán)境中進(jìn)行，標(biāo)本中的TSGF可與試劑中的顯色劑反應(yīng)，測(cè)定470 nm處的吸光度，可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算出相應(yīng)吸光度的TSGF含量，p185蛋白采用免疫組化，LSAB法(抗生蛋白鏈菌素-生物素標(biāo)記法)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

分別對(duì)不同病變性質(zhì)以及對(duì)照組人群的血清TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率進(jìn)行對(duì)比觀察；對(duì)不同腫瘤直徑、組織分級(jí)、分子分型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的乳腺癌患者的TSH、TSGF水平與p185蛋白陽(yáng)性率進(jìn)行對(duì)比觀察；對(duì)以上差異性指標(biāo)與患者的TSH、TSGF、p185蛋白陽(yáng)性率進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析；對(duì)不同病理分級(jí)乳腺癌患者的TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率進(jìn)行Logistic多因素分析；TSH>1.0 mIU/L為陽(yáng)性結(jié)果，TSGF>22.0 U/mL為陽(yáng)性結(jié)果，p185蛋白抗體陽(yáng)性視為陽(yáng)性結(jié)果；使用ROC曲線對(duì)TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率的單獨(dú)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)診斷效能進(jìn)行對(duì)比觀察，聯(lián)合診斷以TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率的串聯(lián)診斷作為依據(jù)，計(jì)算指標(biāo)包括：靈敏度=真陽(yáng)例數(shù)/(真陽(yáng)例數(shù)+假陰例數(shù))×100%，特異度=真陰例數(shù)/(假陽(yáng)例數(shù)+真陰例數(shù))×100%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)例數(shù)/(真陽(yáng)例數(shù)+假陽(yáng)例數(shù))×100%，陰性預(yù)測(cè)值=真陰例數(shù)/(假陰例數(shù)+真陰例數(shù))×100%，準(zhǔn)確度=(真陽(yáng)例數(shù)+真陰例數(shù))/(真陽(yáng)例數(shù)+真陰例數(shù)+假陰例數(shù)+假陽(yáng)例數(shù))×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 3組血清TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率比較

3組患者血清TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；經(jīng)兩兩比較，Ⅰ-Ⅱ組和Ⅲ-Ⅳ組患者的血清TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組，Ⅰ-Ⅱ組與Ⅲ-Ⅳ組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組患者血清TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率比較

LSD-t1：Ⅰ-Ⅱ組與Ⅲ-Ⅳ組比較；LSD-t2：Ⅰ-Ⅱ組與對(duì)照組比較；LSD-t3：Ⅰ-Ⅱ組與Ⅲ-Ⅳ組與對(duì)照組比較

2.2 不同病理特征乳腺癌患者血清TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率比較

不同組織分級(jí)、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況乳腺癌患者的TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而不同腫瘤直徑和分子分型的乳腺癌患者的TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同病理特征乳腺癌患者血清TSH、TSGF、p185蛋白陽(yáng)性率比較

病理特征nTSH(mIU/L)TSGF(U/mL)p185陽(yáng)性[例(%)]腫瘤直徑≥3cm281.14±0.1142.44±1.2714(42.86)<3cm321.16±0.1442.25±1.1115(46.88)t/χ20.6090.6180.058P0.5450.5390.809組織分級(jí)G1+G2330.92±0.2832.13±1.4510(30.30)G3271.18±0.2453.75±1.1719(70.37)t/χ23.81262.5589.552P0.0000.0000.002分子分型Luminal311.15±0.1642.12±1.3413(41.94)HER2291.14±0.1242.22±1.0816(55.17)t/χ20.2720.3171.052P0.7860.7520.305TNM分期Ⅰ+Ⅱ331.05±0.3633.12±1.6411(41.94)Ⅲ+Ⅳ271.24±0.2251.22±1.2818(55.17)t/χ22.39846.8306.607P0.0200.0000.010淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)370.99±0.1732.22±1.0209(24.32)有231.27±0.1653.75±1.1920(86.96)t/χ26.34274.55222.281P0.00000.00000.000

2.3 病理特征與乳腺癌患者TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率的相關(guān)性分析

通過(guò)Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，組織分級(jí)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理狀態(tài)與乳腺癌患者的TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率呈顯著相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 病理特征與乳腺癌患者TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率的相關(guān)性

病理特征TSHTSGFp185組織分級(jí)r0.3520.6990.756P0.0350.0020.002TNM分期r0.1650.3560.465P0.0450.0030.002淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移r0.2630.3620.175P0.0120.0220.002

2.4 Logistic多因素分析

通過(guò)多因素分析，血清TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率為乳腺癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 乳腺癌的多因素分析

2.5 單獨(dú)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌的診斷效能對(duì)比

通過(guò)對(duì)乳腺癌患者血清TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率單獨(dú)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)，采用聯(lián)合檢測(cè)患者的ROC曲線下面積高于單獨(dú)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖1、表5。

圖1 單獨(dú)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)ROC曲線分析

表5 單獨(dú)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌診斷效能比較

3 討論

乳腺癌患者的臨床分型主要包括團(tuán)塊型、結(jié)節(jié)型、導(dǎo)管型、囊腫型、彌漫型等[8]。乳腺癌早期癥狀不典型，當(dāng)患者因臨床癥狀就診時(shí)，多數(shù)已經(jīng)失去最佳治療機(jī)會(huì)，所以對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行早期識(shí)別、干預(yù)、治療具有積極的意義[9-10]。有學(xué)者認(rèn)為，早期對(duì)乳腺癌進(jìn)行識(shí)別干預(yù)，對(duì)于提升患者的生命質(zhì)量具有積極的影響，能顯著降低50～69歲女性患者的病死率[11-14]。因此，提高篩查診斷方法的特異度與敏感度對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)、及時(shí)采取干預(yù)措施具較高的臨床價(jià)值。有學(xué)者認(rèn)為，檢測(cè)患者的腫瘤標(biāo)記物以及特異性癌變基因?qū)τ谠缙诓∽兊陌l(fā)現(xiàn)具有重要意義[15]。

原癌基因HER-2是乳腺癌發(fā)病的關(guān)鍵表達(dá)基因，該基因與p185蛋白表達(dá)高度相關(guān)，因此p185蛋白與乳腺癌的關(guān)系受到廣泛關(guān)注[16]。有研究認(rèn)為，在對(duì)乳腺癌患者的治療過(guò)程中，隨著乳腺癌患者的預(yù)后轉(zhuǎn)變，p185蛋白表達(dá)含量呈現(xiàn)一定的相關(guān)性變化[17]。p185蛋白水平的過(guò)度表達(dá)，預(yù)示著患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)顯著升高。孫峰等[18]研究發(fā)現(xiàn)，75%的p185蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者隨訪期間出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，25.6%的p185蛋白陰性患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移；41.7%的乳腺癌患者p185蛋白陽(yáng)性，而在對(duì)照組陽(yáng)性率為0，說(shuō)明p185對(duì)乳腺癌的診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)均有良好的應(yīng)用價(jià)值。本研究中，相比正常人群，乳腺癌患者的血清p185蛋白陽(yáng)性率顯著升高，且隨著患者的病理分期進(jìn)展，其呈顯著上升趨勢(shì)。同時(shí)，針對(duì)患者的病理狀態(tài)分析，p185蛋白陽(yáng)性率含量水平與患者的組織分級(jí)、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，提示在未來(lái)的診斷及治療效果分析中，可將p185蛋白陽(yáng)性率作為患者的指示性標(biāo)準(zhǔn)。許蓓妮等[19]通過(guò)對(duì)乳腺癌患者的p185蛋白陽(yáng)性率進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，患者的血清p185蛋白陽(yáng)性率與腫瘤臨床分期顯著相關(guān)，本研究與其相互印證。

在乳腺癌患者的腫瘤增殖過(guò)程中，周邊的毛細(xì)血管大量增殖，且此類(lèi)毛細(xì)血管與正常組織的毛細(xì)血管相比，畸形率較高，導(dǎo)致患者的血清TSGF含量顯著升高。本研究中，相比健康人群，乳腺癌患者的TSGF水平顯著升高，且隨著疾病的不斷進(jìn)展，TSGF水平呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。本研究發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及病理分期與乳腺癌患者的TSGF水平呈顯著相關(guān)性。黃遠(yuǎn)生等[20]在對(duì)乳腺癌的診斷中，使用TSGF作為診斷指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)其對(duì)乳腺癌患者具有較高的診斷靈敏度，本研究與其相互印證。

人體的乳腺和甲狀腺同屬于激素應(yīng)答類(lèi)器官，內(nèi)分泌功能的改變會(huì)導(dǎo)致患者的相關(guān)器官出現(xiàn)相應(yīng)的變化。在腫瘤患者中，甲狀腺激素對(duì)于患者的局部病灶組織的新陳代謝水平具有一定的指示性作用，通過(guò)檢測(cè)患者的TSH水平，可在一定程度上反映腫瘤患者的疾病活動(dòng)情況，對(duì)于腫瘤細(xì)胞的增殖過(guò)程有一定的監(jiān)控作用。本研究中，隨著患者腫瘤程度的進(jìn)展，患者的TSH水平呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì)。曾斌等[21]通過(guò)對(duì)患者的甲狀腺激素以及乳腺癌的相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)患者的甲狀腺激素水平與乳腺癌的病理程度顯著相關(guān)，本研究結(jié)果與之一致。

另外，通過(guò)對(duì)患者的聯(lián)合檢測(cè)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其ROC曲線下面積顯著高于單獨(dú)檢測(cè)TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率的診斷效能，尤其診斷靈敏度及陽(yáng)性預(yù)測(cè)值提高，提示在臨床中，三者的聯(lián)合檢測(cè)可為乳腺癌的篩查提供可靠的依據(jù)。國(guó)外有研究報(bào)道指出，通過(guò)對(duì)患者的核酸物質(zhì)以及特異性蛋白水平進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)乳腺癌患者的診斷具有積極的意義[12]。

乳腺癌患者的血清TSH、TSGF水平及p185蛋白陽(yáng)性率與病理分期顯著相關(guān)，未來(lái)有望作為診斷的依據(jù),但總體而言本研究中的血清指標(biāo)對(duì)乳腺癌的診斷特異度偏低，限制了其在臨床使用過(guò)程中的確診功能。由于本研究樣本量較少，且為單中心數(shù)據(jù)，未對(duì)血清指標(biāo)進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，限制了本研究結(jié)果的實(shí)際使用價(jià)值，但本研究為將來(lái)大樣本前瞻性研究作了鋪墊，為臨床診斷提供了科學(xué)依據(jù)。