假蒟化學(xué)成分的研究

李 清，瞿發(fā)林*，譚興起，周偉杰，樓欣譽(yù)

（1.中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第904 醫(yī)院，江蘇常州 213003； 2.南京中醫(yī)藥大學(xué)翰林學(xué)院，江蘇泰州 225300； 3.常州衛(wèi)生高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校，江蘇常州 213003）

假蒟Piper sarmentosumRoxb.為胡椒科胡椒屬多年生草本植物，又名蛤蒟、假蔞、蛤蔞、蓽拔子，廣泛分布于我國(guó)廣西、廣東、云南、海南等省，資源非常豐富，全年可采收，其味辛，性溫，歸胃、大腸經(jīng)，具有祛風(fēng)散寒、行氣止痛、活絡(luò)、消腫等功效，常用于風(fēng)寒咳嗽、脘腹脹滿、泄瀉痢疾、產(chǎn)后腳腫、跌打損傷等［1］，具有多種藥理活性，如抗動(dòng)脈粥樣硬化［2］、抗骨質(zhì)疏松［3］、抗氧化［4］、抗菌［5］、殺蟲［6］等。課題組前期發(fā)現(xiàn)，假蒟提取物具有顯著的抗抑郁作用，其乙酸乙酯萃取物是活性部位［7］，為進(jìn)一步研究其物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)從中分離得到8 個(gè)化合物，其中5 個(gè)為生物堿類，1 個(gè)為木脂素類，1 個(gè)為甾醇類，1 個(gè)為萘甲酸類，5、7～8 為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)。

1 材料

1.1 藥材 假蒟于2016 年4 月采自廣西貴港，經(jīng)第904 醫(yī)院瞿發(fā)林主任藥師鑒定為胡椒科假蒟Piper sarmentosumRoxb.的干燥莖、葉，憑證標(biāo)本（標(biāo)本號(hào)2016-PS-0403） 保存于第904 醫(yī)院制劑中心。

1.2 儀器 XS105 電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；RE-52C 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、BSZ-100 電子鐘控自動(dòng)部分收集器 （上海青浦滬西儀器廠）；SHZ-D（Ⅲ） 循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；ZF-20D 暗箱式紫外分析儀（鞏義市英峪予華儀器廠）；DHG-9240 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司）；KH2200DB 超聲波清洗器（昆山木創(chuàng)超聲儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）；APEX7.0 Tesla 型超高分辨四極桿串聯(lián)傅立葉變換質(zhì)譜儀、DRX-600型核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker 公司）。

1.3 試劑 甲醇、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮（分析純或色譜純，江蘇彤晟化學(xué)試劑有限公司）；乙醇（山東利爾康醫(yī)療科技股份有限公司）；純化水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

2 提取與分離

取假蒟100 kg，干燥粉碎后過(guò)40 目篩。用12倍體積80%乙醇加熱回流提取3 次，每次1 h，收集提取液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓干燥，得浸膏15.6 kg，取部分用2 L 水配成混懸液，再用等體積石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，收集乙酸乙酯萃取液，濃縮干燥得相應(yīng)部位（153 g）。

取上述部位100 g，用100～200 目硅膠拌樣后進(jìn)行硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇（50∶1～0∶1）梯度洗脫，TLC 檢查后合并得12 個(gè)餾分（Fr.A～L）。Fr.A 通過(guò)硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇（80∶1～1∶1） 洗脫，得到Fr.A1和Fr.A2，F(xiàn)r.A1通過(guò)厚制備硅膠板純化，得到化合物1 （4.4 mg）。Fr.B 經(jīng)硅膠柱，用二氯甲烷-甲醇（50∶1～1∶1）梯度洗脫，得Fr.B1、Fr.B2、Fr.B3，F(xiàn)r.B2通過(guò)硅膠柱，用石油醚-乙酸乙酯（10∶1～1∶1） 洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20 層析（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得到化合物2 （3.9 mg）。Fr.C 通過(guò)硅膠柱，用二氯甲烷-甲醇（60∶1～1∶1） 梯度洗脫，得Fr.C1、Fr.C2，F(xiàn)r.C1經(jīng)Sephadex LH-20 層析（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得到化合物3 （10.2 mg）。Fr.D 經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇（80∶1～10∶1） 梯度洗脫，得Fr.D1、Fr.D2、Fr.D3，F(xiàn)r.D2、Fr.D3再經(jīng)Sephadex LH-20 層析（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得到化合物4 （7.4 mg）、5 （9.1 mg）。Fr.E 經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯（10∶1～0∶1） 梯度洗脫，得到Fr.E1、Fr.E2，F(xiàn)r.E2經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇（20∶1～2∶1） 洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20 層析（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），最后通過(guò)厚制備硅膠板純化，得到化合物6（39.4 mg）。Fr.F 經(jīng)硅膠柱層析，通過(guò)二氯甲烷-甲醇（50∶ 1～1∶1） 梯度洗脫，得到Fr.F1、Fr.F2，F(xiàn)r.F1經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇（30∶1～1∶1） 洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20 （二氯甲烷-甲醇＝1∶1） 純化，得到化合物7 （6 mg）。Fr.G 經(jīng)Sephadex LH-20 層析 （二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得到Fr.G1、Fr.G2，F(xiàn)r.G2再經(jīng)厚制備硅膠板，得到化合物8 （6.6 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無(wú)色針狀晶體，HR-ESI-MSm／z：354 ［M］＋，分子式C20H18O6。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：6.86 （2H，d，J＝1.3 Hz，H-2′，2″），6.81 （2H，dd，J＝7.9，1.5 Hz，H-6′，6″），6.79 （2H，d，J＝ 7.9 Hz，H-5′，5″），5.96（4H，s，-OCH2O×2），4.72 （2H，d，J＝4.5 Hz，H-2β，6β），4.24 （2H，dd，J＝9.4，6.8 Hz，H-4α，8α），3.88 （2H，dd，J＝9.4，3.7 Hz，H-4β，8β），3.06 （2H，m，H-1α，5α）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：148.0 （C-3′，3″），147.1（C-4′，4″），135.0 （C-1′，1″），119.3 （C-6′，6″），108.2 （C-5′，5″），106.5 （C-2′，2″），101.1 （-OCH2O），85.8 （C-2，6），71.7 （C-4，8），54.3 （C-1，5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］基本一致，故鑒定為sesamin。

化合物2：無(wú)色針狀晶體，HR-ESI-MSm／z：224 ［M ＋H］＋，分子式C14H25NO。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：7.10 （1H，dd，J＝15.1，10.8 Hz，H-2），6.19 （1H，dd，J＝15.3，10.8 Hz，H-5），6.08 （1H，dd，J＝14.7，7.0 Hz，H-5），5.94 （1H，d，J＝15.1 Hz，H-3），3.05 （2H，d，H-1′），2.17 （2H，dd，J＝7.3，7.9 Hz，H-6），1.79 （2H，dt，J＝13.5，6.7 Hz，H-7），1.43（1H，m，H-2′），1.31 （2H，m，H-8），1.31（2H，m，H-9），0.91 （6H，d，H-3′，4′），0.89（3H，s，H-10）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：169.2 （C-1），143.9 （C-4），142.1 （C-2），129.8 （C-5），123.1 （C-3），48.0 （C-1′），33.9（C-6），32.5 （C-8），29.7 （C-7），29.7 （C-2′），23.5 （C-9），20.5 （C-3′ and C-5′），14.3 （C-10）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為pellitorine。

化合物3：白色粉末，HR-ESI-MSm／z：225［M＋H］＋，分子式C10H12N2O4。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：10.32 （1H，s，H-CN），7.33 （1H，s，H-6），6.50 （1H，s，H-3），3.98 （3H，s，H-4-OCH3），3.93 （3H，s，H-2-OCH3），3.88（3H，s，H-5-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：188.0 （-CHN-），158.6 （C-2），155.8 （C-4），143.6 （C-5），117.4 （C-1），109.1 （C-6），96.0（C-3），56.3 （4-OCH3），56.2 （2-OCH3），56.2（5-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為1-nitrosoimino-2，4，5-trimethoxybenzene。

化合物4：淡黃色固體，HR-ESI-MSm／z：200［M＋H］＋，分子式C13H13NO。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：7.33 （2H，m，H-5，9），7.33 （3H，m，H-6，H-7，9），7.24 （2H，m，H-1′，4′），6.30 （2H，t，J＝2.6 Hz，H-2′，3′），3.16 （2H，t，H-2），3.12 （2H，t，H-3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：169.7 （C-1），140.2 （C-4），128.6 （C-5，9），128.4 （C-6，8），126.5 （C-7），118.9 （C-1′，4′），113.1 （C-2′，3′），36.4（C-3），30.4 （C-2）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為N-（3-phenylpropanoyl） pyrrole。

化合物5：黃色晶體，HR-ESI-MSm／z：230［M＋H］＋，分子式C14H15NO2。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：7.32 （2H，brs，H-1″，4″），7.18（2H，d，H-2′，6′），6.87 （2H，d，H-3′，5′），6.30 （2H，t，H-2″，3″），3.81 （3H，s，-OCH3）3.13 （2H，m，H-2），3.06 （2H，m，H-3）；13CNMR （150 MHz，CDCl3）δ：169.8 （C-1），158.2（C-4′），132.2（C-1′），129.4（C-2′，6′），118.9（C-1″，4″），114.1 （C-3′，5′），113.1 （C-2″，3″），55.3 （-OCH3），36.7 （C-2），29.5 （C-3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為3-（4′-methoxyphenyl） propanoyl pyrrole。

化合物6：白色結(jié)晶狀固體，HR-ESI-MSm／z：414 ［M］＋，分子式C29H50O。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：5.37 （1H，m，H-6），3.53 （1H，m，H-3），1.02 （3H，s，H-19），0.94 （3H，d，J＝6.4 Hz，H-21），0.84 （3H，d，J＝7.3 Hz，H-26），0.82 （3H，t，J＝6.8 Hz，H-29），0.80（3H，d，J＝6.8 Hz，H-27），0.68 （3H，s，H-18）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：37.4 （C-1），31.8 （C-2），72.0 （C-3），42.4 （C-4），140.8 （C-5），121.9 （C-6），32.2 （C-7，8），50.3 （C-9），36.7 （C-10），21.1 （C-11），39.9（C-12），42.4 （C-13），56.9 （C-14），24.5 （C-15），28.4 （C-16），56.2 （C-17），12.0 （C-18），19.7 （C-19），36.3 （C-20），18.9 （C-21），34.1（C-22），26.2 （C-23），46.0 （C-24），29.2 （C-25），20.0 （C-26），19.2 （C-27），23.1 （C-28），12.0 （C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為β-sitosterol。

化合物7：淡黃色粉末，HR-ESI-MSm／z：296［M＋H］＋，分子式C17H13NO4。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：10.90 （1H，s，H-N-OH ），9.25（1H，dd，J＝6.3 Hz，H-7），7.85 （1H，dd，J＝6.3 Hz，H-10），7.83 （1H，s，H-2），7.58（1H，m，H-8），7.58 （1H，m，H-9），7.09（1H，s，H-12），4.14 （3H，s，3-OCH3），4.09（3H，s，4-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：169.2 （C-15），154.5 （C-3），151.6 （C-4），134.7 （C-11），133.9 （C-13），129.0 （C-10），127.6 （C-9），127.6 （C-8），127.0 （C-6），126.0 （C-7），124.4 （C-14），121.1 （C-1），121.1 （C-5），109.6 （C-2），105.7 （C-12），60.4 （4-OCH3），56.9 （3-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為piperumbellactam A。

化合物8：白色針狀固體，HR-ESI-MSm／z：249［M＋H］＋，分子式C13H12O5。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：12.38 （1H，brs，-COOH ），9.78（1H，brs，-OH），7.36 （1H，dd，J＝8.5 Hz，H-2），7.35 （1H，s，H-6），7.12 （1H，s，H-9），6.75 （1H，dd，J＝8.5 Hz，H-3），3.72 （3H，s，C7-OCH3），3.72 （3H，s，C8-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：167.6 （-COOH），151.5（C-4），147.8 （C-7），147.6 （C-8），140.6 （C-1），123.9 （C-2），122.0 （C-5），120.8 （C-10），115.4 （C-3），113.1 （C-9），107.3 （C-6），56.4（C7-OCH3），56.0 （C8-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為6，7-dimethoxy-4-hydroxy-1-naphthoic acid。

4 討論

胡椒屬植物主要分布在熱帶地區(qū)，全世界范圍內(nèi)有2 000 余種，其中在我國(guó)有60 余種。近年來(lái)，有研究報(bào)道卡瓦胡椒［16］、大葉蒟［17］、光軸苧葉蒟［18］等該屬植物，以及大葉蒟中大葉蒟素［19］、光軸苧葉蒟中N-（2′-羥基-乙基） -N-甲基-3，4-亞甲二氧基-苯基［20］等酰胺類生物堿成分具有抗抑郁作用。課題組前期證實(shí)，假蒟具有顯著的抗抑郁作用，其活性部位是乙酸乙酯提取物［21］，在此基礎(chǔ)上本實(shí)驗(yàn)從中分離得到8 個(gè)化合物，其中有4 個(gè)（2、4～5、7） 為酰胺類生物堿，該植物相關(guān)作用是否也與上述成分有關(guān)值得進(jìn)一步研究。