大落新婦根中三萜類成分的研究

何 康，伍天苔，范琳琳，申琳燕，徐 宏，鄒 娟

（貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州貴陽(yáng) 550025）

虎耳草科落新婦屬植物在全世界約有18 種，我國(guó)產(chǎn)7 種，大部分地區(qū)均有分布［1］。貴州黔東南一帶苗族地區(qū)以落新婦和大落新婦最常用，主要治療跌打損傷，骨疼痛、關(guān)節(jié)疼痛、風(fēng)濕病、腰腿痛等，在抗炎、消腫、止痛、活血化瘀方面功效顯著。

現(xiàn)代研究表明，落新婦屬植物中主要化學(xué)成分為三萜、香豆素、黃酮，在鎮(zhèn)痛消炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)咳平喘、抗菌、抗病毒、治療燒燙傷等方面有廣泛的生物活性［2-12］。其所含三萜是一種少見(jiàn)的羧基從C17位遷移到C14位的烏蘇烷型和齊墩果烷型，在抗腫瘤、抗真菌、平喘等方面有很好的作用［3，13］。

目前，尚未見(jiàn)對(duì)大落新婦化學(xué)成分的研究。基于大落新婦的豐富資源、廣泛使用和顯著療效，以及具有潛在生物活性的特征三萜類，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其根進(jìn)行研究，從中分離得到9 個(gè)化合物，均為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)。

1 材料

Q-TOF 質(zhì)譜儀（德國(guó)布魯克公司）；Inova-400 MHz 核磁共振儀（美國(guó)瓦里安公司）；R215 實(shí)驗(yàn)室規(guī)模旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士步琪公司）；FZ102 微型植物粉碎機(jī)（上海書(shū)培實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；電子天平（瑞士Metter-Toledo 公司）；Sephadex LH-20（美國(guó)通用電氣醫(yī)療集團(tuán)）；GF254制備薄層板及200～300 目柱色譜用硅膠（青島海洋化工有限公司）。所用試劑均為分析純。

藥材于2013 年8 月采自六盤(pán)水市鐘山區(qū)石龍村，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)趙俊華教授鑒定為虎耳草科落新婦屬植物大落新婦Astilbe grandisStapf ex Wils.，標(biāo)本存放于貴州中醫(yī)藥大學(xué)苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，標(biāo)本號(hào)為20130814201。

2 提取與分離

將自然風(fēng)干的14 kg 大落新婦根粉碎，加甲醇冷浸提取4 次，每次3 d，過(guò)濾提取液，減壓回收甲醇后得浸膏1.1 kg，蒸餾水溶解后經(jīng)D101 大孔樹(shù)脂柱，分別用水、50% 乙醇、90% 乙醇梯度洗脫，得到90%乙醇部分（518 g），進(jìn)行硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇（100∶1～8∶2） 梯度洗脫，得到3 個(gè)組分Fr.A～C。Fr.B 經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯（100∶1～1∶1） 梯度洗脫，得到5個(gè)組分Fr.B1～Fr.B5。Fr.B2 經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-乙酸乙酯 （100∶1～8∶2） 反復(fù)柱層析，Sephadex LH-20 純化，得到化合物3 （26 mg）、4（6 mg）、7 （101 mg）；Fr.B3 經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-乙酸乙酯（8∶2） 系統(tǒng)洗脫，析出白色粉末，過(guò)濾得到化合物8 （900 mg），母液部分再經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯（8∶2） 反復(fù)柱層析，Sephadex LH-20 純化，得到化合物1 （6 mg）、2（11 mg）；Fr.B4 經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇（100∶1～9∶1） 反復(fù)柱層析，Sephadex LH-20 純化，得到化合物5 （20 mg）、6 （38 mg）、9 （20 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末；易溶于二甲基亞砜，5% 硫酸-乙醇溶液顯色為紫紅色。ESI-MSm／z：479.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ：5.51 （1H，t，J＝4.5 Hz，H-12），3.17 （1H，dd，J＝14.0，4.9 Hz，H-3），0.94 （3H，s，H-26），0.88（3H，s，H-23），0.86 （3H，s，H-25），0.82 （3H，s，H-28），0.81 （3H，s，H-30），0.80 （3H，s，H-29），0.66 （3H，s，H-24）；13C-NMR （100 MHz，DMSO-d6）δ：178.8 （C-27），137.3 （C-13），125.8（C-12），78.3 （C-3），55.1 （C-14），55.1 （C-5），48.7 （C-18），46.5 （C-9），43.5 （C-19），39.1 （C-8），38.9 （C-4），38.5 （C-1），38.4 （C-10），36.4（C-21），36.2 （C-7），34.1 （C-22），33.1 （C-29），32.3 （C-17），31.0 （C-20），28.1 （C-28），28.0（C-23），27.6 （C-2），27.4 （C-16），24.0 （C-30），23.5 （C-11），22.4 （C-15），18.1 （C-6），18.0 （C-26），16.3 （C-25），16.0 （C-24）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為3β-hydroxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物2：白色粉末；易溶于氯仿，5%硫酸-乙醇溶液顯色為紫紅色。ESI-MSm／z：479.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：5.70 （1H，t，J＝4.5 Hz，H-12），3.44 （1H，brs，H-3），1.05（3H，s，H-26），1.02 （3H，s，H-23），1.00 （3H，s，H-25），1.00 （3H，s，H-24），0.98 （3H，s，H-28），0.94 （3H，s，H-29），0.82 （3H，s，H-30）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：178.2 （C-27），138.2 （C-13），126.5 （C-12），76.4 （C-3），56.2（C-14），49.1 （C-5），48.8 （C-9），47.5 （C-18），44.5 （C-19），40.1 （C-4），37.5 （C-8），37.3 （C-1），36.8 （C-10），36.2 （C-22），34.5 （C-29），33.4 （C-21），33.3 （C-7），33.0 （C-17），31.3 （C-20），29.8 （C-28），28.4 （C-16），27.8 （C-23），27.7 （C-2），23.8 （C-11），23.1 （C-30），22.4 （C-15），22.3 （C-24），18.3 （C-26），18.1 （C-6），16.2 （C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為3α-hydroxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物3：白色粉末；易溶于氯仿，5%硫酸-乙醇溶液顯色為紫紅色。ESI-MSm／z：521.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：5.71 （1H，dd，J＝11.2，2.5 Hz，H-12），4.59 （1H，brs，H-3），2.03 （3H，s，H-1′），1.03 （3H，s，H-26），0.97 （3H，s，H-25），0.87 （3H，s，H-23），0.85（3H，s，H-24），0.83 （3H，s，H-28），0.82 （3H，s，H-30），0.79 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：182.2 （C-27），170.7 （C-2′），137.6 （C-13），126.4 （C-12），78.2 （C-3），55.9（C-14），49.9 （C-5），49.3 （C-9），46.8 （C-18），44.2 （C-19），40.4 （C-4），36.9 （C-1），36.6 （C-8），36.5 （C-22），36.4 （C-10），34.3 （C-21），33.8 （C-29），33.3 （C-7），32.9 （C-17），31.1 （C-20），28.3 （C-28），27.8 （C-23），27.5 （C-2），23.6 （C-16），23.3 （C-11），22.6 （C-30），22.0（C-24），21.7 （C-15），21.1 （C-1′），18.2 （C-26），18.2 （C-6），16.2 （C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為3α-acetoxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物4：白色粉末；易溶于乙酸乙酯、氯仿，5% 硫酸-乙醇溶液顯色為紫紅色。ESI-MSm／z：521.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：5.67 （1H，dd，J＝11.2，2.5 Hz，H-12），4.50（1H，dd，J＝14.2，5.5 Hz，H-3），2.07 （3H，s，H-1′），1.05 （3H，s，H-26），1.00 （3H，s，H-25），0.86 （3H，s，H-23），0.86 （3H，s，H-24），0.84（3H，s，H-28），0.84 （3H，s，H-30），0.83 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：180.9（C-27），171.3 （C-2′），137.4 （C-13），126.1 （C-12），80.8 （C-3），55.8 （C-14），55.1 （C-5），49.2（C-18），46.9 （C-9），43.8 （C-19），39.1 （C-8），38.1 （C-1），37.7 （C-4），37.0 （C-10），36.6 （C-22），36.4 （C-7），34.3 （C-21），33.4 （C-29），32.9 （C-17），31.1 （C-20），28.3 （C-28），28.2（C-23），27.6 （C-16），23.6 （C-30），23.6 （C-2），22.7 （C-11），22.3 （C-15），21.4 （C-1′），18.2（C-6），18.1 （C-26），16.8 （C-25），16.5 （C-24）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為3βacetoxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物5：白色粉末；易溶于乙酸乙酯、甲醇，5% 硫酸-乙醇溶液顯色為紫紅色。ESI-MSm／z：495.4 ［M ＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CH3OD）δ：5.59 （1H，t，J＝2.7 Hz，H-12），4.07，3.39 （1H，d，J＝11.1 Hz，H-24），3.28（1H，dd，J＝11.5，4.5 Hz，H-3），2.18 （1H，dd，J＝11.2，5.7 Hz，H-9），1.16 （3H，s，H-23），1.02 （3H，s，H-26），0.97 （3H，s，H-28），0.87（3H，s，H-25），0.86 （3H，s，H-30），0.84 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CH3OD）δ：179.9（C-27），138.9 （C-13），126.7 （C-12），81.1 （C-3），65.3 （C-24），57.2 （C-14），57.1 （C-5），50.7（C-18），48.8 （C-9），45.4 （C-19），43.5 （C-4），40.7 （C-8），39.8 （C-1），38.2 （C-7），37.9 （C-10），37.8 （C-22），35.6 （C-21），34.0 （C-29），33.9 （C-17），32.0 （C-20），28.9 （C-28），28.9（C-2），28.4 （C-16），24.1 （C-30），24.1 （C-11），23.4 （C-23），23.2 （C-15），19.8 （C-6），18.6 （C-26），17.2 （C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］基本一致，故鑒定為3β，24-dihydroxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物6：白色粉末；易溶于氯仿，5%硫酸-乙醇溶液顯色為紫紅色。ESI-MSm／z：495.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：5.65 （1H，brs，H-12），3.86 （1H，brs，H-3），3.71，3.50（1H，d，J＝11.2 Hz，H-24），2.12 （1H，dd，J＝11.4，5.1 Hz，H-9），1.06 （3H，s，H-26），0.99（3H，s，H-25），0.93 （3H，s，H-28），0.84 （3H，s，H-29），0.84 （3H，s，H-30），0.84 （3H，s，H-23）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：178.3 （C-27），138.1 （C-13），126.1 （C-12），70.9 （C-3），66.7 （C-24），56.1 （C-14），49.6 （C-5），49.2 （C-18），47.6 （C-9），44.4 （C-4），42.9 （C-19），40.0（C-10），37.0 （C-22），36.8 （C-1），36.7 （C-8），34.5 （C-21），33.7 （C-20），33.4 （C-29），33.0（C-7），31.3 （C-17），28.4 （C-28），27.7 （C-2），25.1 （C-16），23.8 （C-23），23.2 （C-30），22.3（C-11），22.0 （C-15），18.6 （C-26），18.0 （C-6），16.9 （C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］基本一致，故鑒定為3α，24-dihydroxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物7：白色粉末；易溶于氯仿，5%硫酸-乙醇溶液顯色為紫紅色。ESI-MSm／z：513.4 ［M＋H］＋。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：5.68 （1H，dd，J＝11.1，2.6 Hz，H-12），4.48 （1H，brs，H-3），3.48 （3H，s，-OCH3），2.04 （3H，s，H-1′），1.02 （3H，s，H-26），0.98 （3H，s，H-25），0.87（3H，s，H-23），0.85 （3H，s，H-24），0.84 （3H，s，H-28），0.82 （3H，s，H-30），0.80 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：178.4 （C-27），171.1 （C-2′），138.1 （C-13），126.4 （C-12），78.9 （C-3），56.1 （C-14），51.6 （-OCH3），51.0（C-5），49.2 （C-9），47.4 （C-18），44.2 （C-19），40.0 （C-4），37.8 （C-1），37.2 （C-10），36.7 （C-22），36.4 （C-8），34.4 （C-21），33.4 （C-29），33.0 （C-7），31.3 （C-17），29.8 （C-20），28.4 （C-28），28.2 （C-2），27.6 （C-23），23.8 （C-16），23.7 （C-30），23.0 （C-11），22.4 （C-15），22.4（C-24），21.5 （C-1′），18.2 （C-6），18.1 （C-26），16.4 （C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為methyl 3α-acetoxyolean-12-en-27-oate。

化合物8：白色粉末；易溶于氯仿，5%硫酸-乙醇溶液顯色為紫紅色。ESI-MSm／z：495.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CH3OD）δ：5.62 （1H，dd，J＝4.8，2.4 Hz，H-12），3.05 （1H，dd，J＝13.8，4.5 Hz，H-3），1.34 （3H，s，H-24），1.28（3H，s，H-25），1.14 （3H，s，H-26），1.01 （3H，s，H-23），0.88 （3H，s，H-28），0.87 （3H，s，H-30），0.85 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CH3OD）δ：178.6 （C-27），138.4 （C-13），127.1（C-12），80.0 （C-3），68.3 （C-6），57.5 （C-14），56.8 （C-5），50.7 （C-18），49.6 （C-9），45.4 （C-7），45.0 （C-19），42.1 （C-1），40.6 （C-4），40.0（C-8），37.8 （C-10），37.8 （C-22），35.6 （C-21），34.0 （C-17），33.9 （C-29），32.0 （C-20），29.0（C-23），28.9 （C-2），28.4 （C-16），28.1 （C-28），24.1 （C-30），24.0 （C-11），23.4 （C-15），20.2（C-26），17.9 （C-24），17.5 （C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［13］基本一致，故鑒定為3β，6β-dihydroxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物9：白色粉末；易溶于甲醇，5%硫酸-乙醇溶液顯色為紫紅色。ESI-MSm／z：511.3 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CH3OD）δ：5.65 （1H，brs，H-12），3.51，4.13 （2H，d，J＝11.2 Hz，H-24），3.15 （1H，dd，J＝11.8，4.4 Hz，H-3），1.38（3H，s，H-25），1.31 （3H，s，H-26），1.17 （3H，s，H-23），0.91 （3H，s，H-28），0.90 （3H，s，H-30），0.85 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CH3OD）δ：180.1 （C-27），138.3 （C-13），127.1（C-12），80.0 （C-3），68.3 （C-6），64.3 （C-24），57.5 （C-5），56.8 （C-14），50.7 （C-18），50.7 （C-9），45.4 （C-4），45.0 （C-19），42.1 （C-7），41.9（C-1），40.2 （C-8），37.8 （C-22），37.8 （C-10），35.6 （C-21），34.0 （C-17），33.9 （C-29），32.0（C-20），29.0 （C-16），29.0 （C-28），28.4 （C-2），24.1 （C-30），24.0 （C-11），23.4 （C-15），22.5（C-23），20.2 （C-26），17.9 （C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］基本一致，故鑒定為3β，6β，24-trihydroxyolean-12-en-27-oic acid。

4 討論

本研究首次從大落新婦中分離得到羧基從C17位遷移到C14位的齊墩果烷型三萜，初步探明其主要成分類型，豐富了落新婦屬植物相關(guān)化合物的數(shù)量。下一步，將繼續(xù)對(duì)所得三萜進(jìn)行生物活性考察，以期探明其作用機(jī)制，為后續(xù)研究提供依據(jù)。