小白薇根化學(xué)成分的研究

林玉萍，李欣坪，付勝男，周正兵，華 燕

（1.西南林業(yè)大學(xué)，西南山地森林資源保育與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650224；2.云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，云南 昆明 650500）

小白薇彝藥名阿科牛，漢藥名老君須，來源于蘿摩科娃兒藤屬植物云南娃兒藤Tylophora yunnanensisSchltr 的根，其生長于海拔2 000 m 以下山坡、向陽曠野及草地上，主產(chǎn)于云南、貴州等地，資源豐富［1-2］。小白薇味苦、性寒，歸肝、脾、胃路，具有清火利濕、解毒消癰等功效，民間常用于治療肝炎（腮哈佐）、腎炎、痢疾等，在《中國彝藥學(xué)》《云南中草藥》《全國中草藥匯編》等均有記載［3-5］。國內(nèi)外學(xué)者先后對其同屬植物卵葉娃兒藤、七層樓進(jìn)行化學(xué)成分的研究，發(fā)現(xiàn)娃兒藤屬植物主要含有生物堿［6-8］、三萜［7-9］、多酚類成分［7-9］。陳珠等［10］研究發(fā)現(xiàn)云南娃兒藤醇提物具有顯著的抗炎活性；楊超燕等［11］研究發(fā)現(xiàn)光葉娃兒藤水提物具有鎮(zhèn)痛抗炎作用；甄月英等［6］、張成剛等［12］、王遠(yuǎn)興等［13］研究發(fā)現(xiàn)卵葉娃兒藤總生物堿具有顯著的抗腫瘤活性。為進(jìn)一步探索其藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)和開發(fā)利用民族藥用資源，本研究對小白薇根的化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離鑒定了11 個單體化合物，且所有化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 材料

AM-400 型核磁共振波譜儀（TMS 為內(nèi)標(biāo)，德國Bruker 公司）；Autospec-3000 型質(zhì)譜儀（美國Beckman 公司）；Yanaco-24l 型顯微熔點(diǎn)儀測定（溫度未校正，日本Yanaco 公司）；柱色譜所用硅膠G（100～200、200～300 目）、薄層色譜硅膠G板（青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20 凝膠（瑞士Pharmacia 公司）。所用試劑為工業(yè)純（云南汕滇藥業(yè)）或分析純（中國天津市化學(xué)試劑一廠）；核磁氘代試劑（美國CIL 公司）。

小白薇藥材2018 年采自云南昆明，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)張潔副教授鑒定為蘿摩科植物云南娃兒藤Tylophora yunnanensisSchltr 的根。

2 提取與分離

小白薇根粗粉（9.7 kg），用90%乙醇加熱回流提取3 次，每次4 h，合并提取液濃縮得浸膏（2.4 kg），加入適量水混懸至懸浮液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑，得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物。

取乙酸乙酯萃取物（389.6 g）經(jīng)硅膠柱（100～200 目），以石油醚-丙酮（100∶1～5∶1），氯仿-甲醇（50∶1～1∶1）梯度洗脫，經(jīng)TLC 檢查合并，劃分為20 個組分A-1～A-20。其中A-1 組分經(jīng)硅膠柱（200～300 目），石油醚-丙酮（50∶1～1∶1），氯仿-甲醇（50∶1～10∶1）梯度洗脫，得7 個組分，組分2 經(jīng)硅膠柱（200～300 目），石油醚-丙酮（50∶1）洗脫，分離得化合物9（100 mg）；其中A-3 組分經(jīng)硅膠柱色譜（200～300 目），石油醚-丙酮（10∶1～1∶1），氯仿-甲醇（50∶1～10∶1）梯度洗脫，合并得6 個組分，組分3 經(jīng)硅膠柱（200～300目），氯仿-甲醇（20∶1）洗脫，分離得到化合物1（200 mg）；組分5 經(jīng)硅膠柱（200～300 目），石油醚-丙酮（5∶1）洗脫，Sephadex LH-20 反復(fù)純化，分離得化合物2（23 mg）；組分6 經(jīng)硅膠柱色譜（200～300 目），石油醚-丙酮（3∶1）洗脫，Sephadex LH-20 純化（丙酮）后，再經(jīng)硅膠柱（200～300 目），石油醚-乙酸乙酯（5∶1）洗脫，分離得化合物3（26 mg）。其中A-7 組分經(jīng)硅膠柱（200～300 目），氯仿-甲醇（20∶1～10∶1）梯度洗脫，合并得8 個組分，組分2 經(jīng)硅膠柱（200～300目），石油醚-丙酮（10∶1）洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿-甲醇＝3∶2）譜純化，分離得化合物4（24 mg）；組分5 經(jīng)Sephadex LH-20 純化后，再經(jīng)硅膠柱（200～300目），氯仿-甲醇（20∶1）洗脫純化，分離得化合物6（14.2 mg）；組分7 經(jīng)硅膠柱（200～300目），石油醚-乙酸乙酯（10∶1）洗脫，分離得化合物10（200 mg）。其中A-9 組分經(jīng)硅膠柱（200～300 目），氯仿-甲醇（30∶1～10∶1）梯度洗脫，得5 個組分，組分2 經(jīng)硅膠柱（200～300 目），石油醚-乙酸乙酯（20∶1）洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20 純化，分離得化合物7（25.3 mg）；組分3 經(jīng)硅膠柱（200～300 目），石油醚-乙酸乙酯（10∶1）洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20（丙酮）純化，分離得化合物5（46 mg）；組分3 經(jīng)硅膠柱（200～300 目），石油醚-丙酮（10∶1）洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿-甲醇＝3∶2）純化，分離得化合物8（38 mg）。其中A-18 組分經(jīng)硅膠柱（200～300 目），氯仿-甲醇（10∶1～5∶1）梯度洗脫，合并得到4 個組分，組分3 經(jīng)硅膠柱（200～300 目），氯仿-甲醇（10∶1）洗脫，再經(jīng)重結(jié)晶，分離得化合物11（50 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色結(jié)晶（甲醇），mp 106～109 ℃；FeCl3反應(yīng)呈陽性。根據(jù)EI-MSm/z：137.2［M+H］+，推測分子式C8H8O2。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.88（2H，d，J＝8.4 Hz，H-2，6），6.84（2H，d，J＝8.4 Hz，H-3，5），2.52（3H，s，H-2′）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：129.7（C-1），131.2（C-2，6），163.4（C-4），115.9（C-3，5），199.0（C-1′），25.8（C-2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為對羥基苯乙酮。

化合物2：白色粉末（氯仿-甲醇），mp 142～144 ℃；FeCl3反應(yīng)呈陽性。根據(jù)EI-MSm/z：153.2［M+H］+，推測分子式為C8H8O3。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.66（1H，d，J＝7.2，H-6），6.34（1H，dd，J＝7.2，2.0，H-5），6.23（1H，d，J＝2.0 Hz，H-3），2.48（3H，s，H-2′）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：113.4（C-1），164.2（C-2），104.7（C-3），163.8（C-4），109.2（C-5），130.6（C-6），198.8（C-1′），26.1（C-2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為2，4-二羥基苯乙酮。

化合物3：白色粉末（甲醇），mp 112～113 ℃；FeCl3反應(yīng)呈陽性。根據(jù)EI-MSm/z：153.2［M+H］+，推測分子式C8H8O3。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.20（1H，d，J＝2.4 Hz，H-2），6.98（1H，dd，J＝7.1，3.0 Hz，H-6），6.76（1H，d，J＝7.1 Hz，H-5），2.56（3H，s，H-2′）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：125.9（C-1），119.6（C-2），150.6（C-3），156.5（C-4），116.4（C-5），120.7（C-6），206.0（C-1′），27.0（C-2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］基本一致，故鑒定為3，4-二羥基苯乙酮。

化合物4：無色針狀結(jié)晶（丙酮），mp 168～170 ℃；FeCl3反應(yīng)呈陽性。根據(jù)EI-MSm/z：167.2［M+H］+，推測分子式C9H10O3。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.24（1H，d，J＝1.5 Hz，H-2），6.93（1H，dd，J＝8.6，1.5 Hz，H-6），6.76（1H，d，J＝8.6 Hz，H-5），3.79（3H，s，4-OCH3），2.34（3H，s，H-2′）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：129.5（C-1），116.2（C-2），148.7（C-3），155.4（C-4），114.3（C-5），121.8（C-6），203.5（C-1′），26.8（C-2′），58.4（6-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］基本一致，故鑒定為3-羥基-4-甲氧基苯乙酮。

化合物5：白色粉末（氯仿），mp 190～194 ℃；Liebermann-Burchard 反應(yīng)呈紅色。根據(jù)EI-MSm/z：426.7［M］+，推測分子式C30H50O。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.32（1H，m，H-11），3.23（1H，m，3-OH），1.02，0.98，0.92，0.81，0.75，0.72，0.78，0.76（18H，s，6×CH3），0.90（3H，d，J＝4.6 Hz，H-29），0.88（3H，d，J＝4.6 Hz，H-30）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：35.9（C-1），27.9（C-2），79.0（C-3），39.1（C-4），52.6（C-5），21.7（C-6），27.2（C-7），42.2（C-8），148.3（C-9），39.5（C-10），113.8（C-11），37.0（C-12），37.1（C-13），37.4（C-14），28.0（C-15），32.6（C-16），41.2（C-17），54.3（C-18），49.6（C-19），36.0（C-20），28.9（C-21），38.6（C-22），28.2（C-23），15.6（C-24），21.8（C-25），15.7（C-26），16.0（C-27），32.3（C-28），22.3（C-29），23.4（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］基本一致，故鑒定為新白前醇。

化合物6：白色粉末（氯仿），mp 241～243 ℃；Liebermann-Burchard 反應(yīng)呈紅色。根據(jù)EI-MSm/z：424.7［M］+，推測分子式C30H48O。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.31（1H，m，H-12），1.21，1.08，1.06，0.92，0.78，0.76（18H，s，6×CH3），0.89（3H，d，J＝5 Hz，H-29），0.86（3H，d，J＝5 Hz，H-30）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：36.6（C-1），34.9（C-2），217.1（C-3），47.7（C-4），53.5（C-5），22.8（C-6），26.3（C-7），42.4（C-8），146.9（C-9），39.2（C-10），115.1（C-11），36.6（C-12），37.1（C-13），37.4（C-14），28.1（C-15），32.3（C-16），41.2（C-17），54.3（C-18），49.6（C-19），36.4（C-20），29.2（C-21），38.6（C-22），25.6（C-23），22.1（C-24），21.6（C-25），16.4（C-26），15.7（C-27），32.6（C-28），22.3（C-29），23.4（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］基本一致，故鑒定為新白前酮。

化合物7：白色粉末（甲醇），mp 155～157 ℃；Liebermann-Burchard 反應(yīng)呈紅色。根據(jù)EI-MSm/z：426.7［M］+，推測分子式C30H50O。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ：5.13（1H，t，H-12），3.44（1H，t，J＝7.9 Hz，H-3），1.24，1.21，1.03，1.02，0.99，0.94，0.88（21H，s，7×CH3）；13CNMR（100 MHz，C5D5N）δ：39.0（C-1），28.3（C-2），79.2（C-3），38.8（C-4），55.5（C-5），18.6（C-6），35.0（C-7），40.0（C-8），47.5（C-9），37.2（C-10），26.2（C-11），122.0（C-12），145.4（C-13），42.0（C-14），28.6（C-15），27.6（C-16），32.7（C-17），47.5（C-18），47.1（C-19），31.7（C-20），35.0（C-21），32.9（C-22），28.3（C-23），15.7（C-24），15.7（C-25），17.0（C-26），26.2（C-27），27.4（C-28），35.0（C-29），23.9（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］基本一致，故鑒定為β-香樹脂醇。

化合物8：白色針狀結(jié)晶（氯仿），mp 178～179 ℃；Liebermann-Burchard 反應(yīng)呈紅色。根據(jù)EI-MSm/z：426.7［M］+，推測分子式C30H50O。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.55（1H，m，H-11），3.47（1H，m，H-3 ），1.13，1.04，0.93，0.88，0.87，0.80（18H，s，6×CH3），0.88（3H，d，J＝5.6 Hz，H-29），0.89（3H，d，J＝5.6 Hz，H-30）；13C-NMR（100 MHz，C5D5N）δ：35.9（C-1），28.3（C-2），76.8（C-3），41.3（C-4），54.5（C-5），21.2（C-6），28.7（C-7），44.7（C-8），140.7（C-9），33.4（C-10），121.5（C-11），39.3（C-12），42.5（C-13），37.3（C-14），29.5（C-15），39.7（C-16），33.4（C-17），48.3（C-18），29.5（C-19），36.4（C-20），30.7（C-21），40.0（C-22），25.3（C-23），23.4（C-24），20.6（C-25），16.6（C-26），15.4（C-27），30.8（C-28），27.3（C-29），27.8（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為娃兒藤乙素。

化合物9：C18H36O2，白色粉末（丙酮）。EIMSm/z：284.5［M］+，241.4，185.3，129.2，73.1，60.6，43.0。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：2.22（2H，t，J＝7.5 Hz，H-2），1.53（2H，m，H-17），1.18（28H，brs，H-3～16），0.83（3H，t，J＝6.8 Hz，H-18）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：177.5（C-1），34.2（C-2），24.9（C-3），29.1～29.7（C-4～15），32.4（C-16），22.7（C-17），14.1（C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［20］基本一致，故鑒定為硬脂酸。

化合物 10：無色針狀晶體（丙酮），Liebermann-Burchard 反應(yīng)先呈紫紅色漸變?yōu)槲劬G色，mp 135～137 ℃。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：5.34（1H，d，J＝5.2 Hz），3.50（1H，m），1.15（3H，d，J＝7.2 Hz），0.94（3H，d，J＝6.5 Hz），0.86（3H，d，J＝7.5 Hz），0.83（3H，t，J＝2.5，9.5 Hz），0.82（3H，s），0.67（3H，s）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：37.5（C-1），31.8（C-2），72.1（C-3），45.9（C-4），140.7（C-5），121.8（C-6），33.7（C-7），31.9（C-8），50.2（C-9），36.8（C-10），21.2（C-11），39.7（C-12），42.3（C-13），56.5（C-14），24.5（C-15），28.4（C-16），56.3（C-17），11.8（C-18），19.6（C-19），36.4（C-20），18.7（C-21），31.8（C-22），23.3（C-23），30.3（C-24），29.5（C-25），19.9（C-26），18.6（C-27），26.3（C-28），11.6（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［21］基本一致，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物11：白色針狀結(jié)晶（丙酮），乙酸酐-濃硫酸反應(yīng)先紫紅色漸變?yōu)槲劬G色。與胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行TLC 對照，多種展開系統(tǒng)下Rf 值均一致，故鑒定為胡蘿卜苷。

4 討論

本研究從小白薇根中分離得到11 個化合物，主要是三萜和多酚類，其中化合物9 為娃兒藤屬植物中已報(bào)道的化合物。研究表明，化合物1、3 具有降血脂作用［22-23］、化合物4 具有降低肺動脈高壓作用［24］、化合物6～7 具有抗炎作用［25-26］、化合物8 具有抗腫瘤作用［27］。化合物6～7 與民間常用小白薇治療肝炎、腎炎等密切相關(guān)；化合物8 與小白薇具有清火利濕、解毒消癰等有關(guān)。三萜和多酚類是彝藥小白薇的活性物質(zhì)基礎(chǔ)，將進(jìn)一步進(jìn)行化學(xué)成分和藥理活性研究，以期有助于佐證彝藥小白薇的民間應(yīng)用，并為彝藥小白薇植物資源的深入開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。