采用超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法準(zhǔn)確測定辣條中是否含有5種罌粟堿

容歐

辣條是利用面粉添加各種調(diào)味料制作而成的，其消費(fèi)群體主要是青少年和兒童，因此，關(guān)于辣條的食品安全必須受到相關(guān)部門的監(jiān)督。隨著人們對辣條喜愛程度和安全意識的提高，其是否含有罌粟堿已成為消費(fèi)者關(guān)注的重點(diǎn)。但辣條是一種調(diào)味面粉制品，其中添加了多種調(diào)味料、色素等，對檢測結(jié)構(gòu)造成很大干擾。因此，建立有效的罌粟堿檢測方法成為辣條食品檢測的重點(diǎn)。本文采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）而建立了辣條中罌粟堿含量的分析方法，以期為相關(guān)監(jiān)管部門提供參考。

一、前期處理

辣條是一種含有不同香料、色素、動植物油的調(diào)味品。罌粟堿、可待因、蒂巴因、那可丁和嗎啡是基本的有機(jī)化合物，與酸反應(yīng)生成水溶性鹽，與堿結(jié)合溶解有機(jī)試劑。因此，本文在相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和不同的萃取劑條件下，研究了同一基體熱軋板中5種目標(biāo)化合物的回收率。試劑共分為兩組，第一組用20ml的0.1mol/L HCT溶液、乙腈-HCI（1︰1）和乙腈-水（1︰1）作為提取液，第二組用20ml的2.5%氨化甲醇、5%氨化甲醇和10%氨化甲醇作為提取液。用同一種辣條加標(biāo)作為平行試樣，以上述兩組試劑為萃取液，第一組萃取液提取后通過固相萃取柱進(jìn)行純化，再用有機(jī)溶劑洗脫；第二組萃取液提取后，氨化甲醇通過正乙烷濃縮會去除油脂。表1顯示了注射檢測后尖端區(qū)域之間的面積對比。

由表1可知，當(dāng)采用0.1mol/L的HCI溶液作為提取液時，第一組所有目標(biāo)物質(zhì)的響應(yīng)峰面積最大；當(dāng)采用以5%氨化甲醇作為提取液時，第二組所有目標(biāo)物質(zhì)的響應(yīng)峰面積最大。而第一組與第二組的定量比較表明，5種目標(biāo)物質(zhì)在酸性條件下的響應(yīng)峰較高，這可能是因?yàn)槟繕?biāo)化合物是堿性物質(zhì)，在酸性水溶液中易形成水溶性鹽，萃取效率高，故選用稀鹽酸溶液（0.1mol/L）作為萃取溶劑。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.提取。在稱取樣品的時候，要精確到0.01g，確保樣品均質(zhì)達(dá)到2g。再將樣品分別放置到聚四氟乙烯離心管中，加入10ml濃度為0.1mol/L的鹽酸，搖勻后采用超聲提取器進(jìn)行10分鐘，然后采用5000r/min離心器進(jìn)行5分鐘。將離心后得到的上清液放到另外的導(dǎo)管之中，再加入10ml濃度為0.1mol/L的鹽酸，重復(fù)上面的步驟，再提取出上清液。在經(jīng)過兩次離心提出的上清液中放入10ml的正己烷，經(jīng)過30s的渦旋之后靜置5分鐘，然后利用5000r/min的離心器去除上層的己烷層。

2.凈化。罌粟堿的主要凈化方法有液體萃取法、QEChERS法和塊狀法相位提取。其中，液體萃取過程中會消耗大量有機(jī)溶劑，并不適合數(shù)量較多的測定；QEChERS法操作簡單，但凈化效果不佳，回收率偏低；而塊狀法相位提取是依據(jù)生物堿在酸浸提液中的陽離子狀態(tài)，采用稀鹽酸萃取，添加和純化5種生物堿的3種SPE-列，經(jīng)過McX、WCX、HLB柱進(jìn)行萃取。結(jié)果表明，塊狀法相位提取的固相萃取柱對5種生物堿的回收率均有影響，McX柱具有較高的凈化估計(jì)率。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇塊狀法相位提取固定相的McX柱作為SPE凈化柱。用5ml甲醇和5ml水活化SPE-列，并加注到McX柱中，然后用5ml水和50%（V/V）洗滌和洗脫甲醇，洗滌速度為2-3mL/min，待流出液全部流出后，進(jìn)行5分鐘以上的減壓抽干。將收集到的洗脫液置于15ml離心管中，使用氮?dú)膺M(jìn)行干燥之后，放置到含有甲醇的溶液之中，然后通過0.22μm濾膜后得到體積為1ml的固體，放置等待測量。

三、結(jié)果與討論

用空白基質(zhì)提取物制備工作曲線。將化合物峰面積作為縱坐標(biāo)，參比濃度（μg/L）作為橫坐標(biāo)，采用表2中的線性方程式進(jìn)行計(jì)算，可以得出樣品中待測物質(zhì)的濃度。根據(jù)線性比（RSN=3）的原理，可以得出5種檢測物的檢出限，并依據(jù)（RSN=10）的原理得出5種檢測物的定量限。具體如表2所示。

本文通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS）來測定辣條中嗎啡、可待因、那可丁、罌粟堿和蒂巴因5種罌粟堿的含量，主要是采用超聲提取、固相萃取、固相純化、基質(zhì)外標(biāo)的方法，利用線性比相關(guān)方法檢測出5種罌粟堿的檢出限與定量限，從而對待檢測物質(zhì)的濃度與性質(zhì)進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)共采用30批不同品牌的辣條進(jìn)行檢測，平均回收率達(dá)到70.2%-103.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%-8.5%。結(jié)果表明，30批辣條均未檢測出以上5種罌粟堿成分，說明生產(chǎn)企業(yè)并未在辣條中添加有害罌粟堿。不過，監(jiān)管部門仍然需要加強(qiáng)監(jiān)管，促進(jìn)行業(yè)健康發(fā)展。