復方中藥燈銀腦通提取工藝的正交試驗研究

孫潤 段月娟 龔云麒 劉軍鋒 楊兆祥

摘要：目的 優(yōu)選復方中藥制劑燈銀腦通膠囊的提取工藝。方法 對水提取過程中的加水量、提取次數(shù)、提取時間因素進行單因素實驗、正交試驗考察，以出膏率和野黃芩苷含量為衡量指標優(yōu)選出最佳提取工藝，并放大處方驗證優(yōu)選工藝的穩(wěn)定性。結果 優(yōu)選出的最佳提取工藝為：加水量10倍，提取3次，每次2h。結論 綜合考慮生產(chǎn)需求優(yōu)選的工藝，驗證試驗證明工藝可靠穩(wěn)定，重復性 較好，適合于大生產(chǎn)。

關鍵詞：燈銀腦通;出膏率;含量;正交試驗;提取工藝

中圖分類號：R927.11?? 文獻標志碼：A?? 文章編號：1007-2349（2020）12-0068-04

燈銀腦通膠囊，為傳統(tǒng)彝族藥“腦癱愈”改良而來，本品由燈盞細辛、三七、銀杏葉、滿山香四味藥材組成，具有行氣活血，散瘀通絡的功效，用于中風中經(jīng)絡，瘀血阻絡證。目前對燈銀腦通膠囊研究主要是藥理學方面研究，如燈銀腦通膠囊聯(lián)合其他相關藥物對治療腦梗死、血管性癡呆（VD）、后循環(huán)缺血性眩暈、改善腦微循環(huán)和認知障礙均具有較好的臨床療效，有較高的安全性和一定的臨床應用價值[1-4]。藥物質(zhì)量方面的研究較少，主要涉及藥物中指標化合物的含量測定，且趨勢為利用一種色譜條件同時測定多種指標化合物的含量[5-6]。尚未見對燈銀腦通膠囊提取工藝研究的報道，且現(xiàn)存工藝較為簡單，故對燈銀腦通膠囊的提取工藝研究對其深入發(fā)展具有重要意義。經(jīng)研究表明，燈盞花素可抑制脂質(zhì)過氧化反應，抗超氧化自由基，減少腦組織缺血及再灌注損傷，改善血管性認知功能障礙臨床癥狀[7-8]。燈盞花乙素（野黃芩苷）即是在燈盞細辛藥材中提取所得，故本文采用野黃芩苷含量作為提取工藝研究中的一個衡量指標。本實驗選用燈盞花、三七、銀杏葉、滿山香為主要原料，采用傳統(tǒng)的水提法進行提取，通過單因素實驗法與正交實驗相結合的方式，以出膏率和野黃芩苷含量為指標，優(yōu)選提取工藝，得到最適宜的提取工藝。

1 材料與儀器

1.1 儀器設備 1100 Agilent高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）、電子分析天平（梅特勒-托利多公司，XSE205DU）、旋轉蒸發(fā)器（瑞士Buchi，R-3）、超聲波清洗儀（鞏義市予華儀器有限公司）、循環(huán)水真空泵（鞏義市予華儀器有限公司）、真空干燥箱（鞏義市予華儀器有限責任公司）

1.2 原料及對照品 燈盞花、三七、銀杏葉、滿山香藥材均購于亳州千草藥業(yè)有限公司，經(jīng)鑒定分別為菊科植物短葶飛蓬Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.的干燥全草;五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen的干燥根和根莖;銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.的干燥葉;滿山香Schisandra propinqua（Wall.）Baill.為木蘭科五味子屬植物合蕊五味子的干燥根和莖;野黃芩苷標準品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110842-201709）。

2 實驗方法

2.1.1 對照品溶液配制 取野黃芩苷對照品，精密稱定，加甲醇制成1 mL含40ug的溶液，搖勻，即得。

2.1.2 供試品溶液的配制 取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，研細，取0.065 g（折合提取物0.02675 g），精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理（功率160KW，頻率50kHZ）10 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 色譜條件 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑：以0.3%磷酸水為流動相A，以乙腈為流動相B，按以下梯度洗脫，流速為0.8 mL/min，柱溫45℃，檢測波長為335nm，進樣體積10ul。理論塔板數(shù)按野黃芩苷峰計算應不低于10000。

2.2 提取物的提取工藝單因素實驗法考查

2.2.1 加水體積對出膏率和野黃芩苷含量的影響 稱取燈盞花、銀杏葉、滿山香藥材粗粉各50 g，三七藥材粗粉20 g，稱取5份，5份藥材在提取過程中的加水體積分別為 4、6、8、10、12BV，加熱回流提取3次，每次 2 h，合并3次提取液，減壓過濾棄渣，濃縮至一定相對密度（1.10～1.20/60℃），加乙醇調(diào)至含醇量70%，靜置24h，過濾，濾液蒸發(fā)濃縮，真空干燥，備用。

2.2.2 提取時間對出膏率和野黃芩苷含量的影響 稱取燈盞花、銀杏葉、滿山香藥材粗粉各50 g，三七藥材粗粉20 g，稱取5份，加入10BV水，加熱回流提取3次，5份藥材在提取過程中分別提取 1、2、3、4、5h，合并3次提取液，減壓過濾棄渣，濃縮至一定相對密度（1.10～1.20/60℃），加乙醇調(diào)至含醇量70%，靜置24h，過濾，濾液蒸發(fā)濃縮，真空干燥，備用。

2.2.3 提取次數(shù)對出膏率和野黃芩苷含量的影響 稱取燈盞花、銀杏葉、滿山香藥材粗粉各50 g，三七藥材粗粉20 g，稱取5份，加入10BV水，5份藥材在提取過程中分別加熱回流提取1、2、3、4、5次，提取 2 h，合并3次提取液，減壓過濾棄渣，濃縮至一定相對密度（1.10～1.20/60℃），加乙醇調(diào)至含醇量70%，靜置24h，過濾，濾液蒸發(fā)濃縮，真空干燥，備用。

2.3 提取物的提取工藝正交試驗 以出膏率和野黃芩苷含量為指標，采用水回流提取法，分別對加水體積（A）、提取時間（B）、以及提取次數(shù)（C）這3個因素進行分別考查，根據(jù)單因素實驗結果，每因素選取3個水平，按 L9（33）進行正交試驗，因素影響水平見表 1。

3 結果

3.1 加水體積對出膏率和野黃芩苷含量的影響 測定不同加水體積對出膏率和野黃芩苷含量的影響，結果見圖1。

從圖1可知，隨著加水體積的增加出膏率和野黃芩苷含量越來越高，當加水體積為10BV是時，出膏率和野黃芩苷含量都基本達到最高值，隨后斜率增長緩慢，從經(jīng)濟性方面考慮，加水體積為10BV是最合理的選擇，既能達到最好出膏率和野黃芩苷含量也能降低生產(chǎn)的經(jīng)濟成本。

3.2 提取時間對出膏率和野黃芩苷含量的影響 測定提取時間對出膏率和野黃芩苷含量的影響，結果見圖2。

從圖2可知，隨著提取時間的增加野黃芩苷含量增加，當提取時間為 2h時，出野黃芩苷含量達到較高值;而出膏率僅是稍微上升、波動，說明提取時間對其影響較小，綜合考慮生產(chǎn)需求與操作，因此提取時間應選擇2h。

3.3 提取次數(shù)對出膏率和野黃芩苷含量的影響 測定不同提取次數(shù)對出膏率和野黃芩苷含量的影響，結果見圖3。

從圖3可以看出，隨著提取次數(shù)的增加，出膏率逐漸增加，而野黃芩苷含量在提取次數(shù)為3次時基本達到最大值;綜合考慮生產(chǎn)需求，提取次數(shù)為3次是提取的最佳工藝。

3.4 正交試驗結果與分析 以出膏率和野黃芩苷含量為指標，通過極差 R 和均值 K 的比較，優(yōu)化燈銀腦通提取物的最佳提取工藝，結果見表 2。

從表 2 的正交試驗結果可知，以出膏率為指標，極差最大的是11.23，可以看出提取工藝主要的影響因素是提取次數(shù)（C），各因素影響順序為 C>A>B，對均值分析可知，最佳提取工藝為A3B3C3。即加水體積12BV，提取時間為3h，提取次數(shù)為3次時，出膏率最高。以野黃芩苷含量為指標，極差最大的是0.87，?可以看出提取工藝主要的影響因素是提取次數(shù)（C），各因素影響順序為 C>B>A，對均值分析可知，最佳提取工藝為A2B2C3。即加水體積10BV，提取時間為2h，提取次數(shù)為3次時，野黃芩苷含量最高，野黃芩苷含量測定HPLC圖譜見圖4、圖5。

4 驗證試驗

稱取燈盞花、銀杏葉、滿山香藥材粗粉各5000 g，三七藥材粗粉2000 g，稱取3份，加入10BV水，加熱回流提取3次，提取2 h，合并3次提取液，減壓過濾棄渣，濃縮至一定相對密度（1.10～1.20/60℃），加乙醇調(diào)至含醇量70%，靜置24h，過濾，濾液蒸發(fā)濃縮，真空干燥，備用。結果見表3。

通過平行 3 次驗證試驗，出膏率、野黃芩苷含量的結果，其 RSD 值均小于2%，表明工藝穩(wěn)定、合理。

5 討論

本實驗以燈盞花、三七、銀杏葉、滿山香為主要原料，研究了水提法提取燈銀腦通提取物的提取工藝。分析出膏率的極差 R 和均值 K，提取次數(shù)、加水量對出膏率的影響較顯著，提取時間對出膏率影響不顯著。對野黃芩苷含量的極差 R 和均值 K分析后發(fā)現(xiàn)，提取次數(shù)，提取時間、加水量對野黃芩苷含量影響均較為顯著，綜合考慮生產(chǎn)需要、實際提取過程中的成本和能耗，因此在實際的生產(chǎn)過程中，采用加水量 10 倍，提取3次，每次 2h。驗證試驗結果可見小試最佳的工藝一定程度適合于生產(chǎn)工藝，為中試提供了相應的數(shù)據(jù)支持，該提取工藝為后續(xù)的生產(chǎn)及中藥材的開發(fā)利用提供了一定的借鑒意義。

參考文獻：

[1]陳付艷，田忠惠.燈銀腦通膠囊聯(lián)合腦心通膠囊治療腦梗死恢復期的療效觀察[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2017，32（1）：38-41.

[2]蔡洪，楊德錢.燈銀腦通膠囊輔治腦梗死急性期臨床觀察[J].實用中醫(yī)藥雜志，2018，34（8）：941-942.

[3]曲艷津，蘇自青，李正蓉，等.燈銀腦通膠囊聯(lián)合奧拉西坦對血管性癡呆患者療效及腦微循環(huán)和認知障礙的影響[J].微循環(huán)學雜志，2019，29（2）：19-23.

[4]王煥程，劉佳.燈銀腦通膠囊聯(lián)合倍他司汀治療后循環(huán)缺血性眩暈的療效觀察[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2019，34（8）：2338-2342.

[5]宋金玉.燈銀腦通膠囊質(zhì)量控制方法與野黃芩苷藥動學研究[D].沈陽：沈陽藥科大學，2008.

[6]李愛國，李光河.液質(zhì)聯(lián)用法測定燈銀腦通膠囊中6種有效成分的含量[J].中國藥學雜志，2017，52（9）：772-776.

[7]陳維，劉福友，呼興華，等.從肝郁血瘀論治血管性癡呆[J].遼寧中醫(yī)雜志，2010，37（8）：1462-1463.

[8]王佳.燈銀腦通膠囊治療呆病氣滯血瘀證（血管性認知功能障礙）的臨床研究[D].昆明：云南中醫(yī)學院，2012.

（收稿日期：2020-07-06）

基金項目：云南省科技廳重大科技專項（2015ZJ007）

作者簡介：孫潤（1996-），男，在讀碩士，研究方向：天然產(chǎn)物方向。

通信作者：楊兆祥，E-mail：yangzxky@163.com