建立Wistar大鼠全厚植皮模型的實驗方法

周錦烽 郝 超 鄒忠桃

(南京醫(yī)科大學附屬南京醫(yī)院，南京 210006)

許多研究需要建立植皮動物模型,目前常用的建模動物為大鼠、兔子與豬。大鼠因價格低廉，實驗用抗體種類齊全等優(yōu)點而被許多研究者采用[1-2]。筆者在進行課題預實驗時選擇Wistar大鼠建立全厚植皮模型，實驗前查閱文獻，但未見大鼠植皮手術圍手術期相關處理方法的詳細報道。通過不斷的總結經驗并改進方法，筆者掌握了可靠的Wistar大鼠全厚植皮模型制作方法，現(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級Wistar大鼠12只，雄性，3月齡，體質量300～330 g，由揚州大學比較醫(yī)學中心提供，許可證號SCXK(蘇)2017-0007;飼養(yǎng)溫度20～25 ℃，濕度65%；使用許可證號SYXK(蘇)2016-0006。

1.2 實驗方法

1.2.1稱重與麻醉:大鼠稱質量，抓取大鼠，使用0.3%戊巴比妥鈉進行腹腔麻醉，進針點位于臍旁1～1.5 cm處，刺入腹腔，回抽無空氣或血液時推藥，麻醉藥劑量為1 mL/100 g體質量，如麻醉效果欠佳可追加注射，每次0.2 mL，追加注射間隔不少于5 min。夾趾反射消失視為麻醉成功標志。

1.2.2備皮與標記:以電動剃毛機剔除大鼠背部及側胸部毛發(fā)，記號筆標記背部中線及擬取皮的范圍(取皮部位在側胸壁，兩片皮膚與背部中線的距離相等)(見圖1)。

圖1 側胸部對稱位置標記取皮范圍Fig.1 Symmetrical position of side chest to mark the range of skin

1.2.3大鼠固定與消毒:將麻醉好的大鼠放置于鼠板上，可適當固定，0.5%碘伏溶液消毒術區(qū)。

1.2.4全厚皮片切取與修剪:用手術刀片于擬取皮部位的邊緣切開，直達皮下，切口長度約0.6 cm，血管鉗夾住皮膚深面肌肉組織，輕提血管鉗，以組織剪于皮下疏松筋膜組織內鈍性分離，將取皮的部位與皮下組織層完全分離，再以組織剪沿標記線將擬切取的皮膚剪下。將剪下的皮膚其中一塊放入生理鹽水紗布中暫時保存。另一塊皮膚翻轉后置于手術臺上，血管鉗夾住皮膚深面的肌肉組織，以組織剪修除緊貼皮膚深面的肌肉組織，使其成全厚皮片，修剪完成后將皮片放入生理鹽水紗布中備用，以同樣的方法將另一塊皮膚修剪成全厚皮片(見圖2,3)。

圖2 沿標記線切取全層皮膚Fig.2 Cut the whole layer of skin along the labelled line

圖3 修剪皮片(左側為修剪前,右側為修剪后)Fig.3 Trim the skin (left before pruning, right after pruning)

1.2.5全厚皮片回植:將修剪好的全厚皮片原位回植，3-0絲線間斷縫合固定(直徑2 cm的創(chuàng)面，縫合8針即可)，將2塊全厚皮片全部縫合完畢后以0.5%碘伏溶液沖洗傷口，皮片外覆蓋碘伏紗布及少量棉花，打包加壓包扎。為避免包堆被污染，并給予包堆適當?shù)耐庠趬毫?，包堆外再以彈性繃帶適度加壓包扎(見圖4，5)。

圖4 將全厚皮片回植Fig.4 Replant full thickness skin

圖5 植皮部位打包加壓包扎Fig.5 Pressurized packing of skin grafting parts

1.2.6避免大鼠啃咬及撓抓的措施:術后以自制的伊麗莎白圈固定于大鼠頸部，該伊麗莎白圈用廢棄膠片制作，呈弧形，寬度約3.5 cm，內圈長度約12 cm，套于大鼠頸部后注意調節(jié)松緊度，切勿過緊而影響大鼠呼吸與進食，其后于頸部背側與腹側各縫合2～3針，固定此伊麗莎白圈。于大鼠后肢膝關節(jié)處纏繞多層紗布及膠帶，并于膝關節(jié)處縫合1針，固定此處的輔料(見圖6)。

圖6 頸部固定自制的伊麗莎白圈,后肢纏繞敷料Fig.6 The neck is fixed with a self-made Elizabeth circle， and twining dressings of the hind limbs

1.2.7拆線:術后1周再次行戊巴比妥鈉腹腔麻醉，拆除大鼠側胸壁創(chuàng)面縫線。頸部伊麗莎白圈及后肢敷料繼續(xù)保留。

2 結果

本組12只Wistar大鼠側胸部植皮片全部成活，無一例發(fā)生皮片感染及壞死。術后大鼠進食正常，可自由活動，飼養(yǎng)1～2月，無大鼠發(fā)生非正常死亡(見圖7,8)。

圖7 術后一周拆線,皮片全部成活Fig.7 One week after the operation,all the skin-grafts were alive

圖8 大鼠可自由活動,但無法啃咬、撓抓傷口Fig.8 The rats can move freely,but can not bite or scratch

3 討論

大鼠全厚植皮模型是動物實驗研究常用的模型,可用于燒傷與創(chuàng)傷修復、植皮片術后攣縮防治等方面的研究。該模型看似制作簡單，但是如果細節(jié)處理不好，也是極易制作失敗的。筆者總結經驗，改進方法，摸索出了一套較為可靠的實驗方法。總結如下：

(1)麻醉 戊巴比妥鈉是常用于大鼠腹腔麻醉的麻醉藥物，常用的濃度為3%、1%及0.3%等[3]。0.3%戊巴比妥鈉的安全范圍較大[4]，故選用該濃度的戊巴比妥鈉來進行麻醉，劑量為1 mL/100 g。實驗過程中，發(fā)現(xiàn)該劑量安全性好，麻醉誘導時間約10～12 min，維持時間1.5～2 h，滿足實驗需求，如偶有麻醉效果不佳的情況，可再每次追加0.2 mL，麻醉總劑量仍較為安全，只要注射方法得當，大鼠死亡率極低。本組大鼠采用該麻醉劑量，術中及術后均未發(fā)生非正常死亡。此外，在麻醉注射過程中也需注意，進針點選擇在臍旁1～1.5 cm處較為適宜，刺入腹腔后，推藥前必須回抽，無空氣或血液才能推藥。進針點過高則易刺入肝臟，甚至是心肺。麻醉劑注入胸腹腔臟器內均可致大鼠迅速死亡。因此，為了避免不必要的動物損耗，掌握正確的麻醉方法很重要。

(2)全厚皮片的切取與修剪 Wistar大鼠側胸部皮膚的深面有一薄層肌肉組織，該層肌肉組織與皮膚粘連緊密，不易分離，而該層肌肉與更深層的肌肉之間有一層疏松的筋膜組織，在此間隙內可容易游離擬取皮的區(qū)域，游離后再以剪刀沿標記線剪下皮膚較為方便。筆者曾嘗試全程用刀片取皮，發(fā)現(xiàn)不如上述方法方便。皮膚切取后需將深面的薄層肌肉組織全部去除，使其成為全厚皮片。

(3)植皮術后包扎 植皮術后包扎是否完善是影響皮片成活的重要因素，大鼠植皮后常用的包扎方法為彈性繃帶加壓包扎與打包加壓包扎。實驗初期采用的是彈性繃帶加壓包扎方法，但效果不佳，原因可能為：在麻醉狀態(tài)下包扎，加壓力度不易掌控，加壓過緊則抑制大鼠呼吸，導致其死亡，加壓過松則起不到可靠包扎固定的目的。故改用打包加壓包扎的方法，該方法包扎固定可靠，不影響麻醉狀態(tài)下大鼠的呼吸。同時，為避免包堆被污染，并給予包堆適當?shù)耐庠趬毫Γ淹庠僖詮椥钥噹нm度加壓包扎，注意切勿加壓過緊。

(4)術后是否需要使用抗生素 有文獻報道稱大鼠植皮術后需使用抗生素以防止感染[1]，本實驗過程中從未使用過抗生素，只是在術前及打包前用0.5%碘伏溶液消毒術區(qū)，未發(fā)現(xiàn)因傷口感染而致植皮失敗的情況。

(5)避免大鼠啃咬及撓抓的措施 大鼠是喜啃咬及撓抓傷口的動物。如何防止大鼠啃咬及撓抓傷口是試驗成功的關鍵因素。筆者曾試過替大鼠剪趾甲、加厚傷口外層敷料并縫針固定等方法，但效果不好，傷口敷料甚至是植皮片均很快被大鼠撕扯掉。要限制大鼠回頭啃咬及后肢撓抓才能解決這一問題。為限制大鼠回頭啃咬敷料及傷口，可在頸部固定自制的伊麗莎白圈，該伊麗莎白圈以廢棄膠片制作，呈弧形，內圈長約12 cm，寬度約4 cm(寬度過窄起不到作用，過寬則會影響大鼠進食)。伊麗莎白圈套于大鼠頸部后，應注意調節(jié)松緊度，切勿過緊，然后于頸部背側及腹側各縫合2～3針，固定伊麗莎白圈。為防止大鼠后肢撓抓傷口，采用的辦法是在膝關節(jié)處纏繞多層紗布及膠帶，并于膝關節(jié)處縫合一針，固定此處的敷料。需要注意的是，纏繞在后肢膝關節(jié)處的紗布與膠帶不要過緊，以免使后肢高度腫脹，甚至發(fā)生壞死。后肢膝關節(jié)處纏繞足夠厚的敷料即可限制其屈曲，防止其向前撓抓傷口，同時又不會影響大鼠正常的活動。采用上述方法后植皮手術成功率顯著提高，本組12只大鼠植皮全部成功,大鼠能長期存活，后續(xù)的研究內容也可順利進行。

綜上所述，本實驗建立的實驗方法簡單有效，為相關的研究提供了具體的實驗方法。