蒲滑散對實驗大鼠慢性腎衰的作用研究*

徐為公 徐 鵬 周立冬

(1.原中國人民武裝警察部隊醫(yī)學院，現(xiàn)天津市陽權(quán)醫(yī)療器械有限公司，天津 300050)(2.天津市疾病預防控制中心，天津 300011)(3.天津市陽權(quán)醫(yī)療器械有限公司，天津 300050)

慢性腎功能衰竭(CRF)是指各種腎臟病導致腎臟功能漸進性不可逆性減退，直至功能喪失所出現(xiàn)的一系列癥狀和代謝紊亂所組成的臨床綜合征，簡稱慢性腎衰。CRF的終末期即為人們常說的尿毒癥。它是國內(nèi)外目前常見的一種難治的自身中毒性疾病。病人患病后若不積極治療，存活期很少超過兩年以上。尤其當發(fā)生在青壯年中，其進展速度更快，更易惡化致死，故又稱為第二癌癥。治療CRF,可采用腎移植、血液透析(人工腎)、腹膜透析等。做腎移植手術，由于目前我國腎源嚴重不足，而且要求技術亦高、移植腎成活時間短、耗資高；采用透析(血液、腹膜)療法，技術設備復雜，有一定的禁忌癥、并發(fā)癥。治療CRF由于設備限制，耗資大，必須到醫(yī)院進行治療，給患者帶來痛苦和不便。

蒲滑散是一組：由蒲灰、滑石等經(jīng)生物工程方法制成的中藥制劑。該組制劑來源于張仲景《傷寒論》中的蒲灰散和滑石白魚散，在此基礎上經(jīng)過創(chuàng)新實踐而形成的科學組方制劑。從《傷寒論》和《金匱要略》來看，通過腸道吸附，將有毒物質(zhì)和水分排出體外，是我國古代醫(yī)學的常用治法。

本實驗采用Platt法誘發(fā)慢性腎衰大鼠模型，觀察蒲滑散對血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血鈣(Ca)、血磷(P)、甲狀旁腺素(PTH)、中分子物質(zhì)(MMS)的作用，結(jié)果提示蒲滑散可明顯改善腎功能，糾正高磷低鈣血癥，抑制PTH和MMS，說明蒲滑散是治療尿毒癥的有效方藥之一，其改善患者的臨床癥狀與降低慢性腎功能衰竭(CRF)毒素潴留有關。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選用健康SD雄性大白鼠，體質(zhì)量200 g左右,購自天津裕達實驗動物養(yǎng)殖有限公司。實驗動物生產(chǎn)合格證：SCXK(津)2016-0001。飼喂市售固體飼料，飲用水為自來水，自由飲水及攝食。

1.2 動物模型

動物模型制作：采用Platt法切除SD系雄性大白鼠5/6腎組織以制作腎衰模型，造模1周后抽血，根據(jù)血肌酐和尿素氮值分為模型組、蒲滑散組，每組大鼠8只。二組治療前比較差異無顯著性(P>0.05),以避免影響療效的觀察。

1.3 治療方法

治療方法：正常組、模型組以等體積自來水灌胃每天1次，蒲滑散組給藥按5 g/kg體質(zhì)量給藥,約為人體的kg體質(zhì)量20倍，溶于4 mL自來水制成混懸液灌胃，每日1次，共灌胃2個月。

1.4 觀察及檢測指標

造模后的大鼠于治療前1 d，治療后30 d各采血1次，測Scr、BUN，到第60天全部處死，取血清或血漿作Hb、RBC、Scr、BUN、Ca、P、PTH和MMS的測定，取腎臟進行蘇木精-伊紅(HE)染色及碘酸雪夫(PAS)染色,在200倍光鏡下觀察病理學變化。

1.5 統(tǒng)計方法

2 結(jié)果

2.1 蒲滑散對大鼠血Scr、BUN的影響

治療前模型組與正常組相比，血Scr、BUN明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，說明CRF模型制作成功，第30天時蒲滑散顯著降低血Scr，但對BUN療效不明顯，第60天時蒲滑散組與模型組相比血Scr、BUN顯著降低,統(tǒng)計學上有顯著性差異，見表1。

表1 蒲滑散治療前后血Scr、BUN的變化CRF的療效結(jié)果Table 1 The changes of Scr and BUN after treatment

注：與同組模型組相比aP>0.05,bP<0.05,cP<0.01
Note:Compared with the same model group of each indicatoraP>0.05,bP<0.05,cP<0.01

2.2 蒲滑散對大鼠PTH、Ca、P、MMS的影響

正常組正常值：PTH:(0.154±0.013)ng/L,Ca:(2.78±0.086)mmol/L，P:(2.288±0.27)mmol/L,MMS:(132.5±5.56)μg/L。蒲滑散組與模型組相比，各項指標均有明顯好轉(zhuǎn)，兩組比較差異有顯著性，見表2。

表2 蒲滑散治療前后對大鼠PTH、Ca、P、MMS的作用變化Table 2 The changes of PTH、Ca、P and MMS after treatment of

注：與模型組相比aP<0.05,bP<0.01
Note:Compared with the same model group of every indicatoraP<0.05,bP<0.01

2.3 蒲滑散對大鼠Hb、RBC的影響

蒲滑散組與模型組相比，兩組比較差異有顯著性，蒲滑散對大鼠的Hb、RBC有明顯的改善作用(P<0.05)，見表3。

表3 蒲滑散治療前后蒲滑散對大鼠升高大鼠Hb、RBC的實驗結(jié)果變化Table 3 The changes of Hb and RBC after

注：與模型組相比aP<0.05
Note:Compared with the same model group of each indicatoraP<0.05

2.4 蒲滑散對大鼠腎組織病理學的影響

在光鏡下，應用HE染色[蘇木精—伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining)，簡稱HE染色法]和PAS染色法[PAS染色法(Periodic Acid-Schiff stain)在組織學上，主要用來檢測組織中的糖類。過碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基，再用Schiff試劑和醛基反應使呈現(xiàn)紫紅色]。

觀察：模型組殘腎肉眼體積明顯增大、腫脹，鏡檢腎小球21個，呈代償性肥大10個(50%)，病變16個(80%)，其中局灶階段性硬化8個(40%)，硬化區(qū)超過1/2界限4個(20%)，新月體形成6個(30%)；腎小球基底膜明顯增厚，腎小球囊腔明顯擴張，囊壁增厚，曲管管徑明顯增大，管壁變性，有大量蛋白管型形成，間質(zhì)增寬，纖維增生，有大量炎癥細胞浸潤。而蒲滑散組殘腎病變較模型組明顯減輕，鏡檢腎小球20個，呈代償性肥大8個(40%)，病變11個(50%)，其中局灶節(jié)段性硬化5個(25%)，硬化區(qū)超過1/2界限2個(20%)，新月體形成2個(10%)；腎小球基底膜增厚明顯減輕，腎小球囊腔擴張不明顯，囊壁變薄，曲管管徑稍增大，管壁變性不明顯，無管型可見，間質(zhì)稍增寬，纖維輕度增生，可見有少量炎癥細胞浸潤。

圖1 正常大鼠腎臟Fig.1 Normal rat kidney

圖2 模型組大鼠腎臟Fig.2 Kidney of model groups

圖3 蒲滑散組大鼠腎臟Fig.3 Kidney of Puhuasan group

3 討論

從中西醫(yī)結(jié)合的角度分析，慢性腎功能衰竭一般被認為是機體免疫功能紊亂、血色素、血紅細胞明顯下降，這些均屬于血氣“虛衰”的表現(xiàn)，而機體代謝產(chǎn)物(尿毒癥毒素)蓄積等均隸屬中醫(yī)“實”的范疇。本實驗結(jié)果表明，表3中蒲滑散能顯著提高大白鼠血Hb、RBC，可以推測其補益脾腎，調(diào)補氣血，確實可促進慢性腎功能衰竭動物血色素，紅細胞的提高。與此同時，蒲滑散還能顯著降低Scr、BUN的含量。

慢性腎功能衰竭進行性發(fā)展的原因是多方面的，如有效腎單位學說、腎小球高濾過率學說以及腎小管高代謝學說等[1-3]。但是無論何種原因引起的終末期腎臟疾病的，其腎組織改變常具有某些共性，其基本形態(tài)學特點主要有兩大類：其一，腎小球毛細血管由于系膜區(qū)增寬而受壓閉塞。系膜區(qū)增寬包括系膜細胞增生、細胞外基質(zhì)堆積和單核細胞積聚。其二，腎小管間質(zhì)病變也同樣包括間質(zhì)纖維化、細胞外基質(zhì)堆積和單核、淋巴細胞浸潤三個環(huán)節(jié)。本動物實驗顯示模型組腎小球數(shù)量明顯減少，有效腎單位減少，腎小囊壁層基底膜增厚，以致腎小球濾過率降低。用蒲滑散治療的動物的腎小球數(shù)量較造型組明顯增多，接近正常，腎小囊壁層基底膜增厚減輕，由于有效腎單位數(shù)量增多，提高了腎小球濾過率從而使血中各種代謝產(chǎn)物、毒性物質(zhì)得以排出。腎近曲小管刷狀緣能重吸收全部葡萄糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素等。吸收絕大部分鉀離子、鈣離子和無機磷。模型組腎小管細胞對PAS反應降低，說明腎小管的刷狀緣受到嚴重破壞，從而影響腎小管的重吸收功能。蒲滑散組的腎小管細胞對PAS反應明顯增強，說明腎小管的刷狀緣功能良好，使各種營養(yǎng)成分不致丟失，而起到“扶正”的作用。

PTH是尿毒癥最重要的大分子毒素物質(zhì)之一。據(jù)報道，PTH過高可引起骨性營養(yǎng)不良、皮膚瘙癢、貧血、蛋白消耗及腎小管損害等一系列癥狀。目前國內(nèi)外以控制蛋白攝入及低磷飲食療法研究報道甚多。腎小球濾過率下降，使血磷上升，Ca、P沉積于腎組織，進一步使得腎小球濾過率下降，形成了新的循環(huán)，為了阻止這一惡性循環(huán)，限制磷的攝入是十分關鍵的，目的是降低血磷。筆者應用蒲滑散治療后，能明顯降低血清PTH及血磷，并明顯升高血鈣，清除MMS，對延緩腎功能惡化有重要作用，其作用機理可能是通過減輕MMS、PTH毒性作用，它是否進一步減輕各組織中鈣含量、調(diào)整細胞內(nèi)外鈣比例、恢復細胞膜通透性和細胞功能，尚待進一步研究。