靜脈血細(xì)胞懸液放置時(shí)間對(duì)小鼠血常規(guī)測(cè)定的影響

康愛(ài)君 劉君芳 李雨薇 胡建國(guó) 王學(xué)文 鄭振輝

(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，北京 100191)

血常規(guī)是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中衡量動(dòng)物生理狀態(tài)、判定及評(píng)價(jià)疾病動(dòng)物模型的重要指標(biāo)之一[1-2]。應(yīng)用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定血常規(guī)時(shí)有兩種測(cè)定方法可供選擇：靜脈血測(cè)定法和微量血測(cè)定法。靜脈血測(cè)定法需要的血量較大，且需要配制抗凝劑或準(zhǔn)備抗凝管；微量血測(cè)定法需要的血量少，只需將20 μL或10 μL全血加到定量的血細(xì)胞分析用稀釋液中制成血細(xì)胞懸液上機(jī)測(cè)定即可。小鼠體型小、血量少，且動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中大多需要多次采集血液樣本，考慮到動(dòng)物的健康和繼續(xù)生存的要求，每次的采血量受到限制，這就無(wú)法應(yīng)用靜脈血測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè)，只能選擇微量血測(cè)定法。血常規(guī)測(cè)定的影響因素多且復(fù)雜，其中血液樣本放置時(shí)間是比較重要的影響因素[3-6]。關(guān)于靜脈血(全血)放置時(shí)間對(duì)血常規(guī)指標(biāo)的影響，在臨床診斷以及動(dòng)物試驗(yàn)中已有相關(guān)報(bào)道[7-9].應(yīng)用微量血測(cè)定時(shí)，將微量靜脈血加入分析用稀釋液制成靜脈血細(xì)胞懸液的放置時(shí)間對(duì)小鼠血常規(guī)測(cè)定的影響還未見(jiàn)報(bào)道.檢測(cè)過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)樣本量大或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室與檢測(cè)室距離較遠(yuǎn)時(shí)會(huì)造成送檢血樣不及時(shí)、放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)現(xiàn)象，從而影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，本文選擇了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的兩個(gè)小鼠品種(系)ICR小鼠和C57BL/6 J小鼠，旨在觀察稀釋后的靜脈血細(xì)胞懸液分別放置15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)的變化，為科研人員在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中血常規(guī)測(cè)定方面提供技術(shù)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SPF級(jí)ICR小鼠和C57BL/6 J小鼠各20只，共40只，雄性，8周齡，20～22 g，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0010。飼養(yǎng)環(huán)境為屏障環(huán)境，使用許可證號(hào)：SYXK(京)2016-0041，溫度為(24±2)℃，相對(duì)濕度為(50±10)%，并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道關(guān)懷。

1.2 儀器和試劑

MEK-6410C全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，日本光電工業(yè)株式會(huì)社生產(chǎn)。血細(xì)胞分析用稀釋液和清洗液由上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司生產(chǎn)。

1.3 血常規(guī)測(cè)定

血常規(guī)測(cè)定前做好室內(nèi)質(zhì)控、空白計(jì)數(shù)，確保儀器符合檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。采集靜脈血液80 μL加到定量血細(xì)胞分析用稀釋液中混勻，制成靜脈血細(xì)胞懸液，密封備用，于0 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h在MEK-6410C全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上應(yīng)用微量血測(cè)定法測(cè)定血常規(guī)。包括白細(xì)胞總數(shù)(white blood cell count，WBC)、紅細(xì)胞總數(shù)red blood cell count，RBC)、血小板(platelet，PLT)、血紅蛋白濃度(hemoglobin，HGB)、紅細(xì)胞壓積(hematocrit，HCT)、紅細(xì)胞平均體積(mean corpuscular volume，MCV)、平均血紅蛋白量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)、平均血紅蛋白濃度(mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC)、紅細(xì)胞分布幅度(red blood cell distribution width,RDW)、血小板分布幅度(platelet distribution width,PDW)、平均血小板體積(mean platelet volume,MPV)和血小板壓積(thrombocytocrit,PCT)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 ICR小鼠靜脈血細(xì)胞懸液放置不同時(shí)間血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)的變化

與0 min相比，RBC在2 h、4 h、6 h和8 h均顯著降低(P<0.01)，PLT在4 h、6 h和8 h均顯著升高(P<0.01)，PCT在2 h、4 h、6 h和8 h均顯著升高(P<0.01)，MPV在2 h、4 h、6 h和8 h均顯著升高(P<0.01)，MCV在4 h顯著降低(P<0.05)、在6 h和8 h也均顯著降低(P<0.01)，MCHC在30 min、1 h、2 h、4 h、6 h和8 h均顯著升高(P<0.01)，MCH在1 h、2 h、4 h、6 h和8 h均顯著升高(P<0.01)，HCT在1 h、2 h、4 h、6 h和8 h均顯著降低(P<0.01)，WBC、RDW、PDW和HGB無(wú)顯著變化(P>0.05),詳見(jiàn)表1。

表1 ICR小鼠靜脈血細(xì)胞懸液放置不同時(shí)間血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)的變化Table 1 Changes of blood routine indexes in venous haematocyte suspension of ICR mice at different

注：與0 min比較，*P<0.05,**P<0.01
Note:Compare with 0 min,*P<0.05,**P<0.01

2.2 C57BL/6 J小鼠靜脈血細(xì)胞懸液放置不同時(shí)間血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)的變化

與0 min相比，RBC在2 h顯著降低(P<0.05)、在4 h、6 h和8 h也均顯著降低(P<0.01)，PLT在4 h、6 h和8 h均顯著升高(P<0.01)，PCT在4 h、6 h和8 h均顯著升高(P<0.01)，MPV在2 h顯著升高(P<0.05)、在4 h、6 h和8 h也均顯著升高(P<0.01)，MCV在1 h、2 h、4 h、6 h和8 h均顯著降低(P<0.01)，MCHC在30 min、1 h、2 h、4 h、6 h和8 h均顯著升高(P<0.01)，MCH在2 h、4 h、6 h和8 h均顯著升高(P<0.01)，HCT在1 h、2 h、4 h、6 h和8 h均顯著降低(P<0.01)，WBC、RDW、PDW和HGB無(wú)顯著變化(P>0.05),詳見(jiàn)表2。

表2 C57BL/6 J小鼠靜脈血細(xì)胞懸液放置不同時(shí)間血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)的變化Table 2 Changes of blood routine indexes in venous haematocyte suspension of C57BL/6 J mice at different

注：與0 min比較，*P<0.05,**P<0.01
Note:Compare with 0 min,*P<0.05,**P<0.01

3 討論

研究結(jié)果表明，應(yīng)用微量血測(cè)定法檢測(cè)血常規(guī)時(shí)檢測(cè)數(shù)據(jù)會(huì)因靜脈血細(xì)胞懸液放置時(shí)間不同而發(fā)生改變。變化的原因是血細(xì)胞懸液在放置過(guò)程中血細(xì)胞的代謝反應(yīng)、水分的蒸發(fā)作用、化學(xué)反應(yīng)等多方面的作用[10]。血樣采集人員應(yīng)安排專業(yè)人員盡快將制備好的血細(xì)胞懸液送達(dá)檢驗(yàn)室，盡量縮短運(yùn)送時(shí)間，檢驗(yàn)人員收到血細(xì)胞懸液后也應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，減少因放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)對(duì)血樣帶來(lái)的不利影響，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確。

本研究采用微量血測(cè)定法測(cè)定小鼠血常規(guī)。臨床上大都通過(guò)皮膚采集末梢血，皮膚采集血液時(shí)，雖然能采到血液標(biāo)本，但經(jīng)皮膚采集的末梢血容易溶血、凝血，還容易混入組織液，影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性[11]。另外，有研究證明，血常規(guī)檢測(cè)中靜脈血比末梢血檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確可靠，且靜脈血采集較少受人為因素影響[11-15]，所以本研究采血部位選擇靜脈，取微量靜脈血加入血細(xì)胞分析用稀釋液中制成靜脈血細(xì)胞懸液密封后放置不同時(shí)間備用。

研究結(jié)果顯示，靜脈血細(xì)胞懸液放置2 h后RBC總數(shù)顯著降低，與之相關(guān)的MCV和HCT在放置1 h后顯著降低；放置4 h后PLT顯著升高，與之相關(guān)的MPV和PCT在放置2 h后顯著升高；放置8 h后WBC總數(shù)和HGB含量變化不明顯。由研究結(jié)果分析，當(dāng)應(yīng)用微量血測(cè)定法測(cè)定血常規(guī)時(shí)，制備好的靜脈血細(xì)胞懸液測(cè)定RBC時(shí)需要在1 h內(nèi)完成，測(cè)定與RBC相關(guān)的MCV和HCT則需在30 min內(nèi)進(jìn)行；測(cè)定PLT需在2 h內(nèi)完成，與PLT相關(guān)的PCT和MPV需在1 h內(nèi)進(jìn)行；測(cè)定WBC總數(shù)和HGB含量需在8 h內(nèi)完成即可。綜上所述，研究人員需根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康乃P(guān)注的具體指標(biāo)在一定時(shí)間段內(nèi)完成檢測(cè)，若同時(shí)關(guān)注RBC總數(shù)、WBC總數(shù)、PLT以及HGB含量等主要指標(biāo)，則需在1 h內(nèi)檢測(cè)，若主要檢測(cè)MCV和HCT兩個(gè)指標(biāo)，則需要在30 min內(nèi)完成，這對(duì)血液樣本采集人員和檢測(cè)人員都提出了更高的要求，需要事先溝通協(xié)調(diào)，盡可能減少放置時(shí)間對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)的影響。

總之，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，血常?guī)測(cè)定指標(biāo)不同，血細(xì)胞懸液可放置時(shí)間不同，送檢人員應(yīng)根據(jù)所測(cè)指標(biāo)及時(shí)送檢，同時(shí)，檢測(cè)人員也應(yīng)該對(duì)送檢血樣及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，縮短血樣放置時(shí)間，為血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性提供保障。此外，血液采集部位、血樣是否溶血、凝血、動(dòng)物生理狀態(tài)和生活環(huán)境、人員操作是否規(guī)范以及儀器校準(zhǔn)情況等[16-19]也都是影響血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果的重要因素，這些影響因素對(duì)動(dòng)物血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果的影響我們將繼續(xù)關(guān)注。