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    姜黃素對力竭運(yùn)動大鼠心肌細(xì)胞損傷保護(hù)機(jī)制研究

    2019-12-26 07:35:00李臻
    智富時(shí)代 2019年11期
    關(guān)鍵詞:姜黃素心肌細(xì)胞自由基

    【摘 要】姜黃素是姜黃中提取的酚類物質(zhì),除了可以作為色素添加劑以外,其藥理作用還與其抗氧化性及自由基清除作用有關(guān)。機(jī)體在進(jìn)行高強(qiáng)度運(yùn)動以后會產(chǎn)生過量的自由基,對機(jī)體心肌細(xì)胞等組織造成傷害,姜黃素對于過量自由基的清除具有一定的作用,文章主要對姜黃素對力竭運(yùn)動大鼠心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性研究。

    【關(guān)鍵詞】姜黃素;自由基;心肌細(xì)胞

    一、實(shí)驗(yàn)材料與方法

    SD雄性大鼠30只,建立大鼠大強(qiáng)度跑臺訓(xùn)練模型,將大鼠隨機(jī)分為安靜組(A),運(yùn)動對照組(B)和運(yùn)動+姜黃素組(C)。動物飼養(yǎng)室內(nèi)溫度20℃ ~ 26℃ ,濕度為43%~ 71% ;光照隨同自然變化。各組自由攝食飲水;c組每天灌服姜黃素1次,劑量和b組灌服等量生理鹽水。 b、c組于跑臺上進(jìn)行5周的適應(yīng)性訓(xùn)練,強(qiáng)度每周遞增,訓(xùn)練量20 min/d。第6、7周的強(qiáng)度為35 m/min,訓(xùn)練量30 min/d。第8周第1天力竭運(yùn)動后稱重、麻醉處死、取材。力竭判斷的標(biāo)準(zhǔn)為:大鼠爬臥跑臺,10 s內(nèi)無法完成翻正反射。股動脈取血室溫下凝固,凝固后用竹簽沿試管壁四周輕輕剝離血塊,使血清盡快析出。然后置離心機(jī)2號角轉(zhuǎn)2 500~ 3 000 rpm/min離心15 min,測SGOT、SGPT。稱取適量肝組織和心肌組織,制備10%勻漿液,于低溫離心機(jī)離心15 min,6 000 r/min,取上清液測SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量。

    (一)紅細(xì)胞膜的制備

    抗凝血2 000 r/min,4℃下離心5 min,除去血漿和灰白色的白細(xì)胞層,按1: 2左右的比例加入150 mmol/l NaCl、10mmol/l Tris-HCl配置成的pH為7.4~ 7.5的緩沖液,將沉淀的紅細(xì)胞懸浮,繼而以2 000 r/min離心5 min,除去上清液。如此重復(fù)洗滌3次。沉積的紅細(xì)胞按1 /10(V /V)加入預(yù)冷的雙蒸水,均勻攪拌2 min,待完全溶血后,以8 000~1 000 r/min 4℃離心20 min,將沉淀重復(fù)上法再洗滌3次,得到沉淀的乳白色的紅細(xì)胞膜。

    (二)抗氧化酶的活性及MDA含量的測定

    大鼠血清肌酸激酶(CK)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(SGOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)、乳酸脫氫酶(LDH)的活性測定采用ACE全自動生化分析儀(美國)。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)、細(xì)胞膜Na+ -K+ -ATP酶活性測定、MDA含量測定采用南京建成生物研究所產(chǎn)的試劑盒。

    (三)統(tǒng)計(jì)處理

    用Excel軟件對所測數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。

    二、研究結(jié)果

    (一)心肌組織抗氧化酶活性和MDA含量的比較

    運(yùn)動組較安靜組大鼠心肌組織的總SOD活性顯著升高(P <0.05),GSH-Px活性顯著下降(P <0.01),MDA含量顯著下降(P <0.05),CAT活性變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。運(yùn)動+ Cur組較運(yùn)動組SOD、CAT和GSH-Px活性都顯著升高(P <0.05)

    (二)紅細(xì)胞膜MDA含量,Na+ ,K+ -ATP酶活性及膜流動性的比較

    B組較A組MDA含量升高18.92% (P <0.05),Na+ ,K+ -AT酶活性下降26.28% (P <0.05),熒光偏振度升高20.85% (P <0.05)。C組較B組MDA含量顯著下降8.26%(P <0.05),Na+ ,K+ -AT酶活性升高21.76% (P <0.05),熒光偏振度降低11.99% (P <0.05)。相關(guān)分析表明,紅細(xì)胞膜MDA含量與熒光偏振度p也呈顯著正相關(guān)(r= 0.3625,P <0.05),即紅細(xì)胞膜MDA含量越大,紅細(xì)胞膜的流動性越小。

    三、分析討論

    運(yùn)動訓(xùn)練使自由基產(chǎn)生增多,而自由基又與一系列病理損傷有關(guān),是誘發(fā)疲勞的原因之一。自由基誘發(fā)組織細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng),產(chǎn)生過氧化脂質(zhì)(LPO),其分解產(chǎn)物丙二醛(MDA)。SOD、CAT和GSH-Px是機(jī)體組織和細(xì)胞中重要的抗氧化酶,在一定程度上阻斷了自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng),從而防止自由基進(jìn)一步對細(xì)胞及亞細(xì)胞器的損傷。但不同的運(yùn)動方式對酶的影響不同。大鼠心肌、紅細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛含量較安靜組顯著升高。說明疲勞運(yùn)動引發(fā)上述組織發(fā)生了明顯的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。血清酶活性高低能反映機(jī)體相應(yīng)組織損傷的情況。運(yùn)動組較安靜組血清CK、SGOT、SGPT和LDH活性都呈顯著性下降,表明由于疲勞運(yùn)動導(dǎo)致大鼠心肌發(fā)生了明顯的損傷,組織酶大量滲出,導(dǎo)致血清酶活性升高。

    從抗氧化酶變化情況來看,各組織SOD活性較安靜組都有不同程度的升高,而各組織CAT和GSH-Px活性都有不同程度的降低。一般認(rèn)為,適量運(yùn)動能使體內(nèi)抗氧化酶活性普遍增加,疲勞運(yùn)動會使其活性下降,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能與實(shí)驗(yàn)?zāi)P图斑\(yùn)動方式有關(guān)。運(yùn)動組較安靜組膜Na+ ,K+ -AT酶活性下降26.28% (P <0.05),熒光偏振度升高20.85% (P<0.05),說明大鼠紅細(xì)胞膜在過量自由基攻擊下受到了嚴(yán)重的脂質(zhì)過氧化損傷,膜的流動性下降。紅細(xì)胞膜脂的流動性是決定紅細(xì)胞變形性的一個(gè)重要因素,紅細(xì)胞膜脂流動性的下降導(dǎo)致運(yùn)動能力下降,其原因可能是自由基反應(yīng)可直接作用于膜蛋白,造成膚鏈斷裂或交聯(lián),而且,丙二醛也可交蛋白,使蛋白變性,導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)和功能異常。

    從抗自由基氧化的角度進(jìn)行抗疲勞藥物篩選的方法已得到公認(rèn),而姜黃素作為天然的、高效的抗氧化物質(zhì)已進(jìn)行了深入研究。姜黃素分子結(jié)構(gòu)中具有酚和β-二酮功能基團(tuán)。它通過消除活性自由基、含氧化合物和螯合金屬離子來表現(xiàn)其優(yōu)良的抗氧化性,可以看出,服用姜黃素運(yùn)動組較運(yùn)動對照組大鼠心肌、紅細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛含量都顯著降低,血清CK、SGOT、SGPT和LDH活性也都有顯著的降低。同時(shí),各組織SOD活性、CAT活性和GSH-Px活性都有不同程度的升高,其中,姜黃素對上述組織CAT活性和GSH-Px活性有顯著性升高,對心肌組織SOD活性有顯著性升高。總體結(jié)果表明,姜黃素具有升高機(jī)體組織抗氧化酶活性及降低組織脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的作用,從而降低了大鼠心肌損傷。姜黃素+運(yùn)動組大鼠紅細(xì)胞膜Na+ ,K+ -AT酶活性升高21.76% (P <0.05),熒光偏振度降低11.99% (P <0.05),說明姜黃素提高了紅細(xì)胞膜離子泵活性和膜脂流動性,保護(hù)了紅細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。

    綜上所述,大強(qiáng)度疲勞運(yùn)動導(dǎo)致機(jī)體組織發(fā)生明顯脂質(zhì)過氧化反應(yīng),組織嚴(yán)重受損,服用一定劑量姜黃素后,這種損傷程度明顯減輕。姜黃素抗疲勞作用的機(jī)制與其抗氧化性及清除自由基有關(guān)。許多研究證明,姜黃素氧化性比α-生育酚高,而且,其毒性極低,來源廣、價(jià)格低廉,作為運(yùn)動保健食品或添加劑都具有理想的開發(fā)前景。

    【參考文獻(xiàn)】

    [1]姜黃素對耐力訓(xùn)練大鼠心肌、肝臟自由基代謝影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 趙亮,劉永濤,惠飛虎.北京體育大學(xué)學(xué)報(bào). 2007(09)

    [2]姜黃素對運(yùn)動大鼠血液、肝和心肌組織部分生化指標(biāo)的影響[J]. 徐明生,池愛平,陳錦屏.食品科學(xué). 2006(01)

    作者簡介:李臻(1984—),女,河南洛陽人,河南大學(xué)民生學(xué)院副教授。

    項(xiàng)目來源:2019年度河南省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目,項(xiàng)目名稱:姜黃素用于緩解力竭運(yùn)動對心肌細(xì)胞損傷研究,項(xiàng)目編號:19A310008

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