黔產(chǎn)天冬飲片切制工藝研究

劉亮陳東林萬路平丁麗娜馮華

【摘要】目的：優(yōu)選天冬飲片的最佳切制工藝，并為其他飲片的切制工藝提供參考。方法：采用單因素及正交試驗(yàn)法，以飲片中總皂苷的得率為主要考察指標(biāo)，選擇軟化方法、切片厚度及干燥方法為考察因素，優(yōu)化飲片的炮制工藝。結(jié)果：優(yōu)選出的炮制工藝為： 天冬藥材水蒸氣蒸3min后，橫切1mm薄片，60℃烘12h。結(jié)論：本法操作簡便，優(yōu)選出的炮制工藝穩(wěn)定可行，重現(xiàn)性好。

【關(guān)鍵詞】天冬；切制；工藝研究

【中圖分類號】R282.4【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）21-0014-03

天冬為百合科多年生攀援草本植物天門冬Asparagus cochinchinensis（Lour.）Merr.的塊根，具有養(yǎng)陰清熱，潤肺滋腎的功效，是一種臨床常用中藥。天冬是貴州省內(nèi)的大宗藥材，種植面積較大，僅在遵義市鳳岡縣就有近3000畝的種植基地。天冬主要含有糖類、氨基酸、皂苷類等成分[1]，具有抗氧化、抗衰老、抗菌等生理作用[2]。萬路平等[3]采用正交試驗(yàn)優(yōu)化了天冬的滲漉工藝；杜芳權(quán)和劉亮等[4-5]對天冬多糖和總皂苷超聲提取工藝進(jìn)行了研究，但尚未見天冬飲片炮制工藝研究的報(bào)道?！吨袊幍洹罚?015年版）對天冬的描述也僅是“除去雜質(zhì)，迅速洗凈，切薄片，干燥”，沒有具體的炮制工藝參數(shù)。本研究對天冬飲片的炮制工藝進(jìn)行了優(yōu)化，旨在為建立天冬質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1儀器與材料

1.1儀器UV2501紫外分光光度計(jì)（日本島津）；Aquelix 5型試驗(yàn)室高純水系統(tǒng)（重慶市金富科技發(fā)展有限公司）；DHG 90AOA型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（寧波江南儀器廠）；Senco R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申生科技有限公司）；DKS-26型電熱恒溫水浴鍋（寧波江南儀器廠）；FA2004B型電子天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司）。

1.2材料菝葜皂苷元對照品（批號：126-19-2，上海圻明生物科技有限公司）；天冬藥材于2016年6月收集于貴州遵義，經(jīng)張學(xué)愈副教授鑒定為百合科植物天門冬Asparagus cochinchinensis（Lour.）Merr.的塊根；所用水為純化水，試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1單因素試驗(yàn)

2.1.1軟化方法考察①烘軟：取質(zhì)地堅(jiān)硬的天冬藥材，置于烘箱中，分別考察60℃、80℃、100℃烘5min后，每隔5min用彎曲法和切制法進(jìn)行檢查，結(jié)果60℃、80℃均在20min時(shí)全部軟化，100℃因溫度過高未出現(xiàn)全部軟化現(xiàn)象，故烘軟確定為60℃烘20min。②潤軟：取質(zhì)地堅(jiān)硬的天冬藥材，分別采用搶水洗及適量水浸泡5min后，均用濕紗布蓋潤，每隔30min觀察一次軟化情況，結(jié)果搶水洗后潤及浸泡后潤均在4h時(shí)全部軟化，考慮泡法易損失有效成分，故潤軟選擇為搶水洗后濕紗布蓋潤4h。③蒸軟：取質(zhì)地堅(jiān)硬的天冬藥材，用水蒸氣蒸1min后，每隔1min觀察一次，結(jié)果3min時(shí)可全部軟化。

2.1.2干燥方法考察取質(zhì)地堅(jiān)硬的天冬藥材，搶水洗后，用濕紗布蓋潤4h，切制成2mm的片，進(jìn)行以下三種干燥方法試驗(yàn)：①烘干：將天冬片放入烘箱中，60℃加熱干燥，每隔2h觀察一次，結(jié)果12h后，全部硬化，干燥完成。②曬干：將天冬片置于陽光下照射，每隔2h觀察一次，結(jié)果28h后，全部干燥。③陰干：將天冬片置于陰涼處，每隔12h觀察一次，結(jié)果96h后，全部干燥。

2.1.3切片厚度考察《中國藥典》（2015年版）對飲片厚度要求主要有三種，極薄片（0.5mm以下），薄片（1～2mm），厚片（2～4mm）。綜合考慮切制的難易程度，確定1mm、2mm、4mm作為正交試驗(yàn)中天冬切片厚度的三個(gè)水平。

2.2正交試驗(yàn)

2.2.1因素水平設(shè)計(jì)試驗(yàn)以天冬中總皂苷的得率為主要考察指標(biāo)，選擇軟化方法、切片厚度、干燥方法三因素為考察因素[6-11]，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行試驗(yàn)。正交因素水平表見表1。

2.2.2樣品溶液的制備稱取各試驗(yàn)號中干燥后的天冬片2g，置于100mL具塞錐形瓶中，分別加入12倍量的水，在恒溫水浴鍋中70℃提取兩次，每次1h，過濾，濾液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中加水稀釋至刻度，搖勻。用移液管精密移取10mL于分液漏斗中，用正丁醇（水飽合）15mL萃取，共3次，合并3次正丁醇萃取液，再用水（正丁醇飽和）20mL反萃，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收正丁醇，最后成分用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25mL無色容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻后作為樣品溶液。

2.2.3標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備準(zhǔn)確稱量菝葜皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品7.8mg，用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25mL棕色容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別用移液管精密移取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于具塞試管中，水浴80℃揮干溶劑，再精密移取5%的香草醛-冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，加入具塞試管中，密塞，搖勻，置于60℃恒溫水浴鍋中反應(yīng)15min后，快速放入冰水中降溫5min，從而停止反應(yīng)，再吸取5mL乙酸混合，搖勻后，等待10min，在UV2501紫外分光光度計(jì)上調(diào)整吸收波長為455nm，依次測量A值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的取樣量及最終測量時(shí)的體積，計(jì)算出六份標(biāo)準(zhǔn)測量液的濃度（C值，單位：μg/mL），再由A值與C值兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸方程計(jì)算，得到回歸方程是A=0.01169C+0.03056，r=0.9994。

2.2.5樣品溶液的測定分別用移液管準(zhǔn)確吸取0.4mL樣品液，按2.2.4中的步驟進(jìn)行吸光度測定，由回歸方程計(jì)算出總皂苷的濃度Cx，得率計(jì)算公式如下：

總皂苷得率（%）=CX×V×Km （Cx為總皂苷的濃度，V為樣品溶液初始體積，K為樣品溶液的稀釋倍數(shù)，m為天冬取樣量）。直觀分析結(jié)果見表2，顯著性分析結(jié)果見表3。

2.2.6試驗(yàn)結(jié)果分析由表2可知，最好的切制工藝應(yīng)是A1B1C1。分析表3可知，三個(gè)因素對炮制工藝的影響順序?yàn)榍衅穸醛兏稍锓椒ī儩欆浄椒?，即切片厚度影響最大，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而干燥方法和潤軟方法沒有差異性。考慮切制工藝操作的時(shí)間以及切片難易程度等其它指標(biāo)，切制工藝修改為A3B1C1。

2.2.7工藝驗(yàn)證為驗(yàn)證該工藝的穩(wěn)定性，按優(yōu)選出的最佳工藝進(jìn)行3批驗(yàn)證性試驗(yàn)，結(jié)果3批天冬飲片中總皂苷得率分別為2.22%、2.16%、2.17%，平均得率為2.18%，RSD值為1.53%，表明優(yōu)選出的炮制工藝穩(wěn)定、可行。

3討論

試驗(yàn)之初進(jìn)行了水提取工藝的優(yōu)選，選擇提取溫度（70℃、80℃、90℃）、提取時(shí)間（1h、1.5h、2h）、液料比（8倍、10倍、12倍）、提取次數(shù)（1次、2次、3次）四因素為考察因素，經(jīng)過正交試驗(yàn)確定最佳水提取工藝為70℃溫度，12倍量水，提取2次，每次1h，從而確定了炮制工藝中提取的操作。

炮制工藝研究經(jīng)方差分析可以得出，只有切片厚度有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），故切片厚度確定為1mm。軟化方法中，考慮烘軟法有時(shí)會(huì)出現(xiàn)軟化度不夠，切片困難，洗后潤軟法天冬外層松泡，切片易碎，且時(shí)間較長，故軟化方法確定為蒸軟法。干燥方法中，考慮操作時(shí)間及干燥后成色等情況，確定為烘干法。故試驗(yàn)的最佳切制工藝為天冬藥材經(jīng)水蒸氣蒸3min后，橫切1mm薄片，60℃烘12h。

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（編輯：陶希睿）