反相HPLC測定精制馬拉硫磷溶液方法探討

陳向丹 王峻 胡深 萬珊 董書香

摘要：建立了精制馬拉硫磷溶液中馬拉硫磷含量的反相HPLC測定方法。采用C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），檢測波長225 nm，流動相為甲醇∶水（60∶40），流速1.0 mL/min。結(jié)果表明，馬拉硫磷在0.050～1.500 mg/mL與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 8，平均回收率為101.6%，RSD為0.9%。該方法簡便、準確、快速、重現(xiàn)性好，可用于該制劑的含量測定。

關(guān)鍵詞：馬拉硫磷;反相HPLC法;含量測定

中圖分類號：O657.7+2? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）21-0170-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.21.037

Abstract： To establish a method for the determination of malathion content in malathion solution? by RP- HPLC. The C18 chromatographic column （4.6 mm×150 mm，5 μm） was used to detect the wavelength 225 nm， the mobile phase was methanol water （60∶40）， and the flow rate was 1.0 mL/min. The results showed that malathion in the range of 0.050～1.500 mg/mL， there was a good linear relationship between concentration and peak area， the correlation coefficient was 0.999 8（n=6）， the average recovery rate was 101.6%， RSD was 0.9%; the method is simple， accurate， rapid and reproducible， and can be used for determination of the content of this preparation.

Key words： purified malathion; RP-HPLC; determination of content

馬拉硫磷（Malathion）是一種農(nóng)業(yè)上廣泛應用的高效、低毒、接觸性有機磷類殺蟲劑[1]， 對人畜毒性較低， 在高等動物體內(nèi)代謝速度快、代謝毒性小、殘效期短并具有觸殺、胃毒、熏蒸等作用， 是一種較早應用的有機磷殺蟲劑。馬拉硫磷微溶于水，室溫下溶解度為145 mg/L，易溶于丙酮、三氯甲烷等有機溶劑。在微酸性介質(zhì)中較穩(wěn)定，在堿性介質(zhì)中易分解，不能與堿性農(nóng)藥混用，對鐵有腐蝕性[2]。獸用馬拉硫磷原藥及制劑測定方法為氣相色譜[3，4]。但由于氣相色譜法測定馬拉硫磷含量的方法受很多條件影響，如方法中對照品及內(nèi)標物質(zhì)的使用量很大，特別是內(nèi)標物丙體六六六[5]不易獲得，給檢驗工作帶來了諸多麻煩。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量[6]，本研究建立了以反相高效液相法測定精制馬拉硫磷溶液中馬拉硫磷的含量，為該藥的質(zhì)量控制提供了一種新方法。

1? 材料與方法

1.1? 儀器與試劑

島津20AD高效液相色譜儀，配紫外檢測器;Agilent Eclipse Plus C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）;Mettler AE240電子天平;MILIPORE超純水處理器。馬拉硫磷對照品（①含量為99.5%，來源于國家標準物質(zhì)，批號70542;②純度≥99.5%，來源于Dr.Ehrenstorfer GmbH，批號C14710000）;甲醇，色譜純，美國TEDIA公司;水為二次純化水。馬拉硫磷原料、輔料，精制馬拉硫磷溶液樣品（批號為170316、170317、170318）均由武漢某已獲獸藥GMP認證的公司提供。

1.2? 樣品準備與處理

取適量精制馬拉硫磷溶液，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜過濾，作為供試品溶液;另精密稱取馬拉硫磷對照品25 mg同上操作，作為對照品溶液。

1.3? 色譜條件

色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑;流動相為甲醇∶水（60∶40）;流速1.0 mL/min;檢測波長225 nm;進樣量10 μL。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 檢驗波長的選擇

精制馬拉硫磷溶液分別在200～400 nm進行紫外掃描，馬拉硫磷在波長為（225±2） nm處有最大吸收，分別選定了225、230和245 nm在相同試驗條件下測定。結(jié)果顯示，在波長為225 nm時干擾最少，且在此波長下可以得到較好的峰形，故選用225 nm作為檢測波長。

2.2? 色譜條件的選擇

本試驗選擇反相HPLC法測定精制馬拉硫磷溶液中馬拉硫磷的含量，儀器及試劑普適性更強。試驗發(fā)現(xiàn)，流動相比例影響出峰時間和馬拉硫磷與輔料雜質(zhì)之間的分離度，甲醇大于75%時分離度不能滿足《中國獸藥典》的規(guī)定，降低甲醇比例可改善分離度，但保留時間會延長，且不同色譜柱分離效果不同，本試驗選擇的色譜柱及色譜條件經(jīng)驗證適用于樣品含量測定，在此色譜條件下，馬拉硫磷的保留時間為11.106 min，分離效果較好（圖1）。

2.3? 方法評價

2.3.1? 線性試驗? 稱取馬拉硫磷對照品250 mg，置于50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，作為貯備液。分別精密量取貯備液適量，用甲醇分別稀釋至馬拉硫磷濃度為0.050、0.125、0.25、0.500、1.000、1.500 mg/mL，各取10 μL進樣，記錄色譜圖，以濃度（mg/mL）為橫坐標，峰面積（mV）為縱坐標進行線性回歸（圖2），得回歸方程：y=4 373.4x-47 977，r=0.999 8，可見在此色譜條件下馬拉硫磷在0.050～1.500 mg/mL線性關(guān)系良好。

2.3.2? 專屬性試驗? 在“1.3”色譜條件下，馬拉硫磷與雜峰分離效果好，含量測定不受其他雜質(zhì)峰的干擾（圖3、圖4）。

2.3.3? 回收率試驗? 按處方比例配制成45%的馬拉硫磷溶液，按“1.3”色譜條件進行測定，按外標法計算馬拉硫磷的含量及回收率（表1）。由表1可知，精制馬拉硫磷溶液的平均回收率為101.6%，RSD為0.9%。

2.3.4? 精密度試驗? 取對照品溶液（馬拉硫磷500 μg/mL），按“1.3”色譜條件進行測定，連續(xù)進樣6次，測得馬拉硫磷峰面積平均值為2 175 165，RSD為0.3%。

2.3.5? 穩(wěn)定性試驗? 取對照品溶液（馬拉硫磷500 μg/mL），按“1.3”色譜條件進行測定，室溫下，在不同時間（0、2、4、6、8、10、12、24 h）分別進行測定，測得馬拉硫磷峰面積平均值為2 185 441，RSD為0.8%，表明供對照品溶液在室溫下放置24 h穩(wěn)定。

2.3.6? 樣品的測定? 分別取同一廠家不同批號的樣品，采用“1.2”樣品處理及“1.3”色譜條件進行測定，試驗結(jié)果見表2。從表2中可以看出，兩種方法測定出的含量結(jié)果基本一致，反相HPLC法可作為精制馬拉硫磷溶液中主藥的含量測定的參考方法。

3? 結(jié)論

反相HPLC法測定精制馬拉硫磷溶液中馬拉硫磷含量時，操作簡單、快速，結(jié)果準確可靠，可作為該制劑的含量測定方法，特別是對獸藥企業(yè)的內(nèi)部質(zhì)量控制方面有一定的指導作用。

參考文獻：

[1] 楊? 彬，王洪成，陳? 明.馬拉硫磷原藥中馬拉硫磷含量的高效液相色譜法分析[J].精細化工中間體，2007，37（5）：70-72.

[2] 蘇加強.高效液相色譜法測定農(nóng)藥中的馬拉硫磷[J].今日科苑，2012（20）：115.

[3] 獸藥國家標準（化學藥品、中藥卷）第一冊[M].北京：化學工業(yè)出版社，2013.

[4] 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2016.

[5] 獸藥質(zhì)量標準2017年版化學藥品卷[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2017.

[6] 文? 娜.超高效液相色譜法代替氣相色譜法測定氟樂靈含量[J].中國化工貿(mào)易，2013，1（1）：149.