馬拉硫磷對(duì)照品的制備

溫芳，張秀英，郭桂芳，陸連壽，萬(wàn)仁玲，郝利華，鞏忠福

(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

馬拉硫磷是一種較早應(yīng)用的有機(jī)磷殺蟲劑,主要以觸殺、胃毒合熏蒸毒殺滅害蟲，具有廣譜、低毒、使用安全等特點(diǎn)。我國(guó)、美國(guó)及歐盟等均批準(zhǔn)其作為獸藥使用，美國(guó)[1]和歐盟[2]已將馬拉硫磷及其制劑收錄入藥典中，并可提供馬拉硫磷及其雜質(zhì)的對(duì)照品，我國(guó)已將精制馬拉硫磷原料及制劑收錄入2017年版《獸藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》[3](化學(xué)藥品卷)中，但還未提供相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

為控制馬拉硫磷產(chǎn)品質(zhì)量，滿足獸藥產(chǎn)品檢驗(yàn)需求，本研究參照美國(guó)藥典、歐洲藥典以及我國(guó)2017年版《獸藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》(化學(xué)藥品卷)擬定了馬拉硫磷對(duì)照品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)馬拉硫磷對(duì)照品候選物進(jìn)行了全面質(zhì)量控制，并以美國(guó)藥典委員會(huì)提供馬拉硫磷對(duì)照品作為溯源對(duì)照品，通過(guò)協(xié)作標(biāo)定方法對(duì)馬拉硫磷對(duì)照品候選物進(jìn)行定值，經(jīng)專家組審查，現(xiàn)已入庫(kù)發(fā)放，填補(bǔ)了我國(guó)獸藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制的一項(xiàng)空白。

1 材料與方法

1.1 材料 馬拉硫磷對(duì)照品(批號(hào)：1374408，含量99.2%)和異馬拉硫磷對(duì)照品(批號(hào)：1349604，含量97%)，美國(guó)藥典委員會(huì)提供；馬拉硫磷對(duì)照品候選物(純度99.2%)，山東省化學(xué)農(nóng)藥及中間體產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站提供；甲醇、丙酮，色譜純；水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水；高效液相色譜儀e2695，美國(guó)waters公司提供；氣相色譜儀7890A，Agellent公司提供；XP105天平，METTLER公司提供；787KFTitrino水分測(cè)定儀，瑞士萬(wàn)通公司提供。

1.2 方法

1.2.1 相對(duì)密度 按《中國(guó)獸藥典》(2015版)一部[4]相對(duì)密度測(cè)定方法中的比重瓶法測(cè)定。

1.2.2 鑒別

1.2.2.1 取本品 2 mL，加甲醇2 mL，搖勻，加1 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL，搖勻，靜置2 min，再加0.5 mol/L硫酸溶液數(shù)滴，使溶液呈無(wú)色，加醋酸銅試液2 mL，生成深黃色沉淀；

1.2.2.2 高效液相方法 在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，馬拉硫磷對(duì)照品候選物溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與馬拉硫磷對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。

1.2.3 檢查

1.2.3.1 游離酸 取本品約2 g，精密稱定，加無(wú)水乙醇20 mL和溴酚藍(lán)指示液數(shù)滴，搖勻，用氫氧化鈉滴定液(0.02 mol/L)滴定至溶液為藍(lán)色，同時(shí)以空白試驗(yàn)校正。

1.2.3.2 異馬拉硫磷[1-2]色譜條件：照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，異馬拉硫磷和馬拉硫磷的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.5和1.0。

測(cè)定法：精密稱取異馬拉硫磷對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg的異馬拉硫磷對(duì)照品溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取馬拉硫磷對(duì)照品候選物適量，用甲醇溶解并稀釋制成每1 mL中約含20 mg的馬拉硫磷溶液，同法測(cè)定。平行測(cè)定2份異馬拉硫磷對(duì)照品和2份馬拉硫磷對(duì)照品候選物，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算馬拉硫磷對(duì)照品候選物中異馬拉硫磷含量。

1.2.3.3 水分測(cè)定方法 按照《中國(guó)獸藥典》(2015版)一部[4]水分測(cè)定法第一法費(fèi)休氏法進(jìn)行。

1.2.4 含量測(cè)定方法 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：用高效液相方法測(cè)定[1-3]。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(30 cm×3.9 mm,10 μm)；以甲醇-水(50∶30)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；流速1.0 mL/min。理論板數(shù)按馬拉硫磷峰計(jì)算不低于2500，與相鄰峰的分離度應(yīng)符合要求。

測(cè)定法：精密稱取馬拉硫磷對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋制成每1 mL中約含10 mg馬拉硫磷對(duì)照品溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；精密稱取馬拉硫磷對(duì)照品候選物適量，同法配制并測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算馬拉硫磷對(duì)照品候選物中馬拉硫磷含量。平行測(cè)定2份馬拉硫磷對(duì)照品和5份馬拉硫磷對(duì)照品候選物。

1.2.5 定值方法 協(xié)作標(biāo)定方法： 3家單位協(xié)作標(biāo)定；含量測(cè)定按照1.2.4 高效液相方法進(jìn)行；每家單位均由2人進(jìn)行測(cè)試；每人測(cè)試平行樣不少于5份(每人測(cè)試用對(duì)照品至少應(yīng)取2份)；單人平行樣的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于0.5%，2人間的相對(duì)偏差應(yīng)小于0.3%。3家單位協(xié)作標(biāo)定，測(cè)定結(jié)果進(jìn)行加權(quán)平均計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 相對(duì)密度 測(cè)定結(jié)果為1.23。

2.2 鑒別

2.2.1 生成深黃色沉淀；

2.2.2 馬拉硫磷對(duì)照品 候選物溶液主峰保留時(shí)間為16.999，馬拉硫磷對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間為16.994，保留時(shí)間一致。圖譜見圖3和圖4。

2.3 檢查

2.3.1 游離酸 用空白試驗(yàn)校正后，測(cè)得游離酸的結(jié)果為0.02%；

2.3.2 異馬拉硫磷 將濃度約為0.1 mg/mL的2份異馬拉硫磷對(duì)照品溶液和濃度約為20 mg/mL的2份馬拉硫磷對(duì)照品候選物溶液，分別進(jìn)樣2針。異馬拉硫磷和馬拉硫磷的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.5和1.0。按外標(biāo)法計(jì)算馬拉硫磷對(duì)照品候選物中異馬拉硫磷的含量，其平均值為0.06%，修約為0.1%，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。異馬拉硫磷對(duì)照品圖譜見圖1，馬拉硫磷對(duì)照品候選物圖譜見圖2。

表1 馬拉硫磷對(duì)照品候選物中異馬拉硫磷含量測(cè)定結(jié)果

圖1 異馬拉硫磷對(duì)照品圖譜

圖2 馬拉硫磷對(duì)照品候選物圖譜

2.3.3 水分測(cè)定結(jié)果 用3份重蒸水標(biāo)定費(fèi)休氏試液，得F值為3. 564 5；測(cè)定3份供試品的水分平均值為0.1%。

2.3 含量測(cè)定結(jié)果

2.3.1 系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果 將濃度約為10 mg/mL的馬拉硫磷對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5針，其峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.2%，理論塔板數(shù)大于2500，與相鄰峰的分離度符合方法要求。

2.3.2 含量測(cè)定結(jié)果 將濃度約為10 mg/mL的2份馬拉硫磷對(duì)照品溶液和5份馬拉硫磷對(duì)照品候選物溶液，分別進(jìn)樣2針，按外標(biāo)法計(jì)算5份馬拉硫磷對(duì)照品候選物的含量，其含量平均值為98.77%，修約為98.8%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該候選物滿足制備馬拉硫磷對(duì)照品原料的要求。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。馬拉硫磷對(duì)照品圖譜見圖3，馬拉硫磷對(duì)照品候選物圖譜見圖4。

圖3 馬拉硫磷對(duì)照品圖譜

圖4 馬拉硫磷對(duì)照品候選物圖譜

表2 馬拉硫磷對(duì)照品候選物含量測(cè)定結(jié)果

3 定值結(jié)果

3.1 協(xié)作標(biāo)定結(jié)果 協(xié)作標(biāo)定結(jié)果、加權(quán)平均計(jì)算結(jié)果和合并計(jì)算結(jié)果分別見表3、表4和表5：

表3 協(xié)作標(biāo)定結(jié)果匯總表

表4 3家單位協(xié)作標(biāo)定結(jié)果的加權(quán)平均值

表5 3家單位標(biāo)定結(jié)果加權(quán)平均值的合并計(jì)算

3.2 定值結(jié)果 對(duì)3家單位協(xié)作標(biāo)定結(jié)果進(jìn)行加權(quán)平均計(jì)算，得出馬拉硫磷對(duì)照品候選物含量的加權(quán)平均值為98.99%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.3%，修約為99.0%，所以本研究制備的馬拉硫磷對(duì)照品含量賦值為99.0%。

4 討論與結(jié)論

WHO發(fā)布的化學(xué)對(duì)照品一般指導(dǎo)原則規(guī)定用于含量測(cè)定用對(duì)照品需要至少3家實(shí)驗(yàn)室對(duì)其進(jìn)行協(xié)作標(biāo)定；中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所制定的《獸藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制技術(shù)規(guī)范(試行)》也規(guī)定新獸藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用溯源標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值時(shí)，原則上應(yīng)由2個(gè)以上(含2個(gè))外部實(shí)驗(yàn)室協(xié)作標(biāo)定，所以本次制備的馬拉硫磷對(duì)照品采用外標(biāo)法，由3家單位協(xié)作標(biāo)定來(lái)定值，保證了馬拉硫磷對(duì)照品含量賦值的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。

我國(guó)2017年版《獸藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》(化學(xué)藥品卷)收錄的馬拉硫磷原料含量測(cè)定方法為氣相法，但在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，通過(guò)改變柱溫、氣體流速、分流比等色譜條件[5]，馬拉硫磷主峰中仍有1小峰未能完全分離，所以用氣相方法測(cè)定馬拉硫磷含量存在定量準(zhǔn)確性的問題，所以本研究參照美國(guó)藥典和歐盟藥典用高效液相方法作為制備馬拉硫磷對(duì)照品的含量測(cè)定方法。

當(dāng)對(duì)照品用于專屬性的含量測(cè)定方法時(shí)，確定雜質(zhì)的含量是很重要的。本研究參照美國(guó)藥典及歐盟藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)增加了對(duì)雜質(zhì)異馬拉硫磷的質(zhì)量控制，保證了馬拉硫磷對(duì)照品含量定值結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3家單位協(xié)作標(biāo)定結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.3%，滿足用高效液相方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。