兩種實驗方法檢測食品中金黃色葡萄球菌的比較探討

黃少瓊

摘 要：目的：比較Baird-Parker平板計數(shù)法和MPN計數(shù)法檢測食品中金黃色葡萄球菌的結(jié)果，比較兩種實驗方法的優(yōu)劣。方法：隨機采集90份食品作為實驗樣品，分為實驗組（食品25g+生理鹽水225ml+1ml金黃色葡萄球菌菌液）、陽性對照組（250ml生理鹽水+1ml金黃色葡萄球菌菌液）和樣品對照組（食品25g+1ml金黃色葡萄球菌菌液）各30份，應(yīng)用Baird-Parker平板計數(shù)法和MPN計數(shù)法進(jìn)行定量計數(shù)，統(tǒng)計金黃色葡萄球菌的陽性檢出結(jié)果。結(jié)果：相比之下，MPN計數(shù)法對于金黃色葡萄球菌的陽性檢出率（35.56%>12.22%）相對更高（P<0.05）。結(jié)論：在食品中金黃色葡萄球菌的實驗檢測中，MPN計數(shù)法顯然是更好的選擇，可以獲得更加準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，可作為食品質(zhì)量安全評價的重要參考。

關(guān)鍵詞：食品；金黃色葡萄球菌；檢測；實驗方法

飲食是人們?nèi)粘Ｉ钪械闹匾顒?，是攝入營養(yǎng)和能量的主要途徑，維持人體健康活動。飲食安全則關(guān)系到人們的身體健康，與相關(guān)疾病的發(fā)生有著密切的聯(lián)系，應(yīng)當(dāng)引起足夠的重視。人們在飲食的過程中，食品受到金黃色葡萄球菌等大腸桿菌以及沙門氏菌多種致病菌的污染，則會增加食物中毒的風(fēng)險，誘發(fā)食源性疾病。在食品生產(chǎn)加工的過程中，致病菌檢驗是十分重要的環(huán)節(jié)，對于各類致病菌有著嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。在食品安全檢驗的，需要采用高效、靈敏、準(zhǔn)確的實驗方法，其實驗結(jié)果能夠作為食品安全質(zhì)量評價的重要參考依據(jù)[1]。本研究主要對食品中的金黃色葡萄球菌進(jìn)行實驗檢測，比較不同實驗方法的檢測結(jié)果，現(xiàn)報告如下。

1材料與方法

1.1材料

實驗樣品：隨機采集90份食品作為實驗樣品，其中包括餅干18份、罐頭15份、膨化食品12份、肉制品18份、乳制品15份以及方便食品12份。培養(yǎng)基：由青島海博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的Baird-Parker平板、瓊脂、凍干兔血漿、氯化鈉胰酪胨大豆肉湯管（10%），營養(yǎng)肉湯等。試劑：亞碲酸鉀卵黃增菌液（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。菌株：金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC29213，南京便診生物科技有限公司）。應(yīng)用以上樣品、培養(yǎng)基、試劑和菌株作為實驗材料，進(jìn)行食品中金黃色葡萄球菌的實驗檢測。

1.2方法

1.2.1樣品制備

將實驗樣品分為三組：實驗組、陽性對照組和樣品對照組各30份。在實驗組的菌液制備的過程中，在瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)金黃色葡萄球菌，取新鮮培養(yǎng)物，與3ml營養(yǎng)肉湯混合，制成肉湯菌懸液，并在4℃的環(huán)境下保存。在實驗前進(jìn)行稀釋，經(jīng)過預(yù)試驗檢測后，選取所需的菌液濃度（10-5稀釋濃度）。在樣品制備的過程中，在無菌均質(zhì)袋加入食品25g（液體樣品25ml）、生理鹽水225ml以及1ml金黃色葡萄球菌菌液（10-5濃度），獲得實驗樣品。

在陽性對照組的樣品制備中，將250ml生理鹽水與1ml金黃色葡萄球菌菌液（10-5濃度）混合。而在樣品對照組的樣品制備中，則是在無菌均質(zhì)袋加入食品25g（液體樣品25ml）、生理鹽水225ml，均勻混合。

1.2.2定量檢測

取實驗組、陽性對照組和樣品對照組的樣品勻液1ml，接種于Baird-Parker平板之上，在37℃ 的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，48h后對菌落進(jìn)行觀察，行革蘭氏染色。完成血漿凝固酶驗證后，對金黃色葡萄球菌進(jìn)行計數(shù)，獲得計算結(jié)果。另外取樣液1ml，分別接種在3個氯化鈉胰酪胨大豆肉湯管（10%），在37℃ 的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，48h后各取一環(huán)培養(yǎng)物， 在Baird-Parker平板上培養(yǎng) （37℃，48h），對菌落進(jìn)行觀察，行革蘭氏染色。完成血漿凝固酶驗證后，采用MPN計數(shù)方法，對金黃色葡萄球菌進(jìn)行計數(shù)，計算各組實驗樣品中金黃色葡萄球菌的陽性檢出結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

以SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理和分析，應(yīng)用（ ±s）和（%）進(jìn)行計量和計數(shù)，由t值和χ2檢驗，P<0.05代表對比具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

根據(jù)Baird-Parker計數(shù)，在90份樣品中，檢出金黃色葡萄球菌陽性11份，陽性率為12.22%。而根據(jù)MPN計數(shù)，在90份樣品中，檢出金黃色葡萄球菌陽性32份，陽性率為35.56%，具體見于表1：

3討論

金黃色葡萄球菌屬于革蘭氏陽性菌，是一種常見的致病菌種。人體受到金黃色葡萄球菌的侵襲，容易引起呼吸道和肺部感染、胃腸道疾病以及全身感染性疾病，對患者的身體健康造成損害。金黃色葡萄球菌廣泛存在于自然界，而飲食是該病菌侵襲人體的主要途徑。在人們的日常飲食中，由于食品中存在金黃色葡萄球菌，容易引發(fā)食物中毒，同時還會引起多種病癥。為了預(yù)防“ 病從口入”，需要加強對食品質(zhì)量安全的檢查， 對于食品中存在的金黃色葡萄球菌有著嚴(yán)格的限量要求。在食品的生產(chǎn)加工環(huán)節(jié)，需要嚴(yán)格把控，并需要進(jìn)行微生物檢驗，實施定量檢測方法，根據(jù)金黃色葡萄球菌的檢出結(jié)果，評價食品質(zhì)量安全[2]。

在金黃色葡萄球菌的實驗檢測中，一般采用Baird-Parker平板計數(shù)法和MPN計數(shù)法。本組實驗結(jié)果顯示，在90份食品中金黃色葡萄球菌的定量檢測中，MPN計數(shù)法對于金黃色葡萄球菌的陽性檢出率為35.56%，顯著高于Baird-Parker平板計數(shù)法的12.22%，充分說明MPN計數(shù)法是比Baird-Parker平板計數(shù)法更好的實驗檢測方法。

在實驗檢測中應(yīng)用Baird-Parker平板計數(shù)法，在Baird-Parker平板上接種培養(yǎng)，統(tǒng)計金黃色葡萄球菌數(shù)量。但是該實驗過程易受到其他菌種的干擾，導(dǎo)致檢出率的降低。在食品的微生物檢測中，金黃色葡萄球菌只是致病菌的一種，還大量存在著其他菌種，金黃色葡萄球菌在其中的含量不高，這在一定程度上影響到了Baird-Parker平板計數(shù)的準(zhǔn)確性。而MPN計數(shù)法在實驗檢測中的應(yīng)用，則是利用氯化鈉胰酪胨大豆肉湯進(jìn)行增菌處理，然后在Baird-Parker平板上接種培養(yǎng)，能夠減少其他菌種的干擾，獲得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，其對于金黃色葡萄球菌的陽性檢出率更高。另外，受到實驗樣品理化性質(zhì)、細(xì)菌依附等因素的影響，MPN計數(shù)法的檢測結(jié)果也會受到一定的干擾和影響。為了提高食品中金黃色葡萄球菌檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，可聯(lián)合應(yīng)用Baird-Parker平板計數(shù)法和MPN計數(shù)法，充分發(fā)揮兩種實驗方法的優(yōu)勢，滿足不同條件的下金黃色葡萄球菌定量檢測[3]。

綜上所述，Baird-Parker平板計數(shù)法、MPN計數(shù)法等不同實驗方法均可應(yīng)用于食品中金黃色葡萄球菌的檢測，其中MPN計數(shù)法的應(yīng)用效果更高，能夠準(zhǔn)確檢出金黃色葡萄球菌的分布情況，便于采取有效的控制措施，為食品質(zhì)量安全管理提供了重要支持。

參考文獻(xiàn)：

[1]胡金強，雷俊婷，白艷紅，等.食品中金黃色葡萄球菌PCR-ELISA檢測技術(shù)建立[J].食品工業(yè)科技，2016，37（20）：63-67.

[2]周莉，王永，王法云，朱海華，張立攀.食品中金黃色葡萄球菌概況及新型檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國釀造，2016，35（02）：1-4.

[3]李荔枝，胡萍.快速檢測食品中金黃色葡萄球菌及其腸毒素型的研究進(jìn)展[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2011，23（08）：144-146.