ACE及AGT基因多態(tài)性與糖尿病腎病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系

冉隆梅 王宇琴 賴紅輝 劉敏華 孫艷宇

【摘要】 目的 探究血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）基因和血管緊張素原（AGT）基因多態(tài)性與糖尿病腎病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)。方法 選取37糖尿病腎病患者作為實(shí)驗(yàn)組， 另選同期37例符合對照標(biāo)準(zhǔn)的健康者作為對照組。對比兩組研究對象的ACE基因I/D多態(tài)性檢測與AGT基因M235T多態(tài)性檢測分析結(jié)果。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組DD基因分布頻率21.6%（8/37）高于對照組的5.4%（2/37）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組患者ACE基因中的D等位基因頻率、I等位基因頻率分別為48.6%（36/74）、51.4%（38/74）， 對照組患者分別為27.0%（20/74）、73.0%（54/74）， 對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組TT基因分布頻率為43.2%（16/37）， 對照組為48.6%（18/37）， 對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)組患者AGT基因中的

T等位基因頻率、M等位基因頻率分別為63.5%（47/74）、36.5%（27/74）， 對照組患者分別為68.9%（51/74）、31.1%（23/74）， 對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 糖尿病腎病可受到多基因的影響， 單個(gè)基因變異也能夠?qū)μ悄虿∧I病產(chǎn)生影響， ACE-DD基因型與高糖尿病腎病存在明顯聯(lián)系， AGT-TT 基因型與糖尿病腎病無明顯聯(lián)系。

【關(guān)鍵詞】 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因;血管緊張素原基因;基因多態(tài)性;糖尿病腎病;發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.27.114

Association of ACE and AGT gene polymorphisms with the risk of diabetic nephropathy ? RAN Long-mei， WANG Yu-qin， LAI Hong-hui， et al. Department of Geriatrics， Guangzhou First Peoples Hospital， Guangzhou 510180， China

【Abstract】 Objective ? To investigate the correlation between angiotensin converting enzyme （ACE） gene and angiotensinogen （AGT） gene polymorphisms and the risk of diabetic nephropathy. Methods ? 37 patients with diabetic nephropathy served as the experimental group and concurrent 37 healthy persons who met the control criteria served as the control group. The results of ACE gene I/D polymorphism and AGT gene M235T polymorphism were compared between the two groups. Results ? The DD gene distribution frequency 21.6%（8/37） in the experimental group was higher than 5.4%（2/37） in the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The D allele frequency and I allele frequency in ACE gene were 48.6%（36/74） and 51.4%（38/74） respectively， which were 27.0%（20/74） and 73.0%（54/74） in the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The TT gene distribution frequency was 43.2%（16/37） in the experimental group， which was 48.6%（18/37） in the control group， and the difference was not statistically significant （P>0.05）. The T allele frequency and M allele frequency in AGT gene were 63.5%（47/74） and 36.5%（27/74） respectively， which were 68.9%（51/74） and 31.1%（23/74） in the control group， and their difference was not statistically significant （P>0.05）.Conclusion ? Diabetic nephropathy can be affected by multiple genes. Single gene mutation can also affect diabetic nephropathy. ACE-DD genotype is significantly associated with high diabetic nephropathy. AGT-TT genotype is not significantly associated with diabetic nephropathy.

【Key words】 Angiotensin converting enzyme gene; Angiotensinogen gene; Gene polymorphisms; Diabetic nephropathy; Incidence risk

糖尿病屬于內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病， 主要對人體的糖代謝功能產(chǎn)生影響， 若未得到有效治療， 可對患者的身體健康產(chǎn)生嚴(yán)重影響， 并引起全身性并發(fā)癥的發(fā)生， 其中糖尿病腎病最為常見[1]。糖尿病腎病是導(dǎo)致腎功能衰竭的第二大因素， 就當(dāng)下的醫(yī)療手段而言， 尚未明確糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制[2]。大部分學(xué)者認(rèn)為[3， 4]， 腎素血管緊張素系統(tǒng)能夠參與到患者的體液調(diào)節(jié)中， 維持血壓平衡和組織液平衡， 而糖尿病腎病

患者體內(nèi)腎素血管緊張素系統(tǒng)處于激活異常狀態(tài)中， 并且血管緊張素轉(zhuǎn)換酶中的ACE基因中第16內(nèi)含子， 可能會出現(xiàn)缺失或增多等異常形態(tài)[5]。因此， 本文主要對ACE及AGT基因多態(tài)性與糖尿病腎病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系進(jìn)行探究， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2018年1月～2019年1月在本院就診的糖尿病患者37例作為實(shí)驗(yàn)組， 其中男18例， 女19例， 年齡34～78歲， 平均年齡（56.91±8.01）歲。另選取同期于本院體檢中心就診的符合對照組標(biāo)準(zhǔn)的健康者37例作為對照組， 其中男20例， 女17例， 年齡33～79歲， 平均年齡（55.91±8.09）歲。

兩組研究對象一般資料對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 兩組研究對象均采取DNA進(jìn)行檢測， DNA樣本來源于檢測對象外周靜脈血液3 ml， 并使用常規(guī)肝素進(jìn)行抗凝處理， DNA提取方法主要采用酚/氯仿法。

1. 2. 1 ACE基因多態(tài)性檢測 采用I/D多態(tài)性檢測及分析方法：①獲得DNA樣本;②進(jìn)行DNA基因擴(kuò)增， 主要探究為ACE基因的第16內(nèi)含子， 均使用P1、P2引物。獲得反應(yīng)總體系為25 μl。PCR擴(kuò)增條件為：應(yīng)在高溫下進(jìn)行， 設(shè)置溫度為94℃， 需要在5 min進(jìn)入循環(huán)， 預(yù)變性的時(shí)間應(yīng)控制在5 min， 循環(huán)時(shí)需要在94℃變形1 min進(jìn)行， 并且需要逐漸退火， 退火的時(shí)間應(yīng)控制在1 min， 溫度為58℃， 72℃下進(jìn)行延伸， 延伸時(shí)間應(yīng)控制為2 min， 共進(jìn)行30個(gè)循環(huán);③采集擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠中電泳分析， 采集劑量為

10 μl， 使用溴乙錠進(jìn)行染色處理， 染色完成后， 使用標(biāo)準(zhǔn)分析量表進(jìn)行對照。

1. 2. 2 AGT基因多態(tài)性檢測 采用M235T多態(tài)性檢測及分析：①采集DNA;②擴(kuò)增AGT基因第2外顯子;③采用與ACE基因I/D多態(tài)性檢測相同方法， 進(jìn)行檢驗(yàn)及分析， 取擴(kuò)增產(chǎn)物后6 μl， 并放置于聚丙烯酰氨凝膠中進(jìn)行電泳分析， 與標(biāo)準(zhǔn)量表進(jìn)行對照。

1. 3 觀察指標(biāo) 對比兩組研究對象的ACE基因與AGT基因多態(tài)性檢測結(jié)果。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組ACE基因多態(tài)性檢測結(jié)果對比 實(shí)驗(yàn)組DD基因分布頻率21.6%（8/37）高于對照組的5.4%（2/37）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。兩組患者ACE基因中的D等位基因頻率、I等位基因頻率對比， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 兩組AGT基因多態(tài)性檢測結(jié)果對比 實(shí)驗(yàn)組TT基因分布頻率為43.2%（16/37）， 對照組為48.6%（18/37）， 比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)組患者AGT基因中的T等位基因頻率、M等位基因頻率對比， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)， 糖尿病腎病的發(fā)生與多種因素有關(guān)， 并不是單一的基因就能夠?qū)е绿悄虿∧I病的發(fā)生， 而是多基因遺傳因素以及環(huán)境因素共同作用導(dǎo)致患者發(fā)生糖尿病腎病。糖尿病腎病發(fā)病早期患者腎臟的血流動(dòng)力學(xué)會發(fā)生明顯改變。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶是腎素-血管緊張素中的關(guān)鍵性因素， 在血管緊張素失去活性的狀態(tài)下， C-末端水解會將2個(gè)氨基酸殘基去除掉， 在ACE基因的指導(dǎo)下進(jìn)行可產(chǎn)生血管緊張素Ⅱ， 對激動(dòng)血管緊張素受體1產(chǎn)生刺激， 最終可引起患者出現(xiàn)血壓升高、靜脈收縮等現(xiàn)象， 同時(shí)可對醛固酮的合成和釋放產(chǎn)生刺激作用， 利于鈉離子的重吸收。同時(shí)由此可以判斷出ACE基因的多態(tài)性與糖尿病腎病患者之間存在明顯聯(lián)系。

部分國外學(xué)者[6， 7]對ACE以及AGT基因多態(tài)性與糖尿病腎病之間的關(guān)系進(jìn)行了更加深入的研究， 部分學(xué)者認(rèn)為糖尿病腎病的發(fā)生與種族之間存在一定聯(lián)系， 研究報(bào)告顯示， 歐洲白種人ACE基因中I/D多態(tài)性與血漿ACE水平具有關(guān)聯(lián)性， 是糖尿病腎病的危險(xiǎn)因素， 而亞洲黃種人ACE基因I/D

多態(tài)性與糖尿病腎病之間亦存在諸多可能。

綜上所述， ACE基因多態(tài)性與糖尿病腎病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在一定聯(lián)系， ACE-DD 基因型為導(dǎo)致糖尿病腎病的危險(xiǎn)因素。而 AGT-TT 基因型與糖尿病腎病無明顯關(guān)系?？赏ㄟ^基因檢測篩查， 判斷具有相關(guān)高風(fēng)險(xiǎn)因素者， 可對其將來進(jìn)行長期隨訪及健康管理干預(yù)， 從而降低發(fā)病率會有重要的指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)

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[收稿日期：2019-04-25]