液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合p16、Ki67用于診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變的意義

邱華娟 紀(jì)燕琴 梁朵獻

【摘要】 目的 探究液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合p16、Ki67用于診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）的意義。方法 225例

CIN患者為研究對象， 分別給予液基細(xì)胞學(xué)、p16、Ki67檢測， 比較液基細(xì)胞學(xué)、p16、Ki67單獨檢測及聯(lián)合檢測的診斷準(zhǔn)確率。結(jié)果 液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合Ki67、p16檢測的診斷準(zhǔn)確率為100.00%， 顯著高于液基細(xì)胞學(xué)、p16、Ki67單獨檢測的91.56%、88.44%、86.67%， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=19.838、27.594、32.143， P=0.000、0.000、0.000<0.05）。液基細(xì)胞學(xué)、p16、Ki67單獨檢測的診斷準(zhǔn)確率兩兩比較， 差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 將液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合p16、Ki67應(yīng)用于CIN診斷中， 可顯著提升診斷準(zhǔn)確度， 值得應(yīng)用與推廣。

【關(guān)鍵詞】 宮頸上皮內(nèi)瘤變;液基細(xì)胞學(xué);p16;Ki67

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.27.007

Significance of liquid-based cytology combined with p16 and Ki67 in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia ? QIU Hua-juan， JI Yan-qin， LIANG Duo-xian. Department of Gynaecology， Huizhou Central Peoples Hospital， Huizhou 516001， China

【Abstract】 Objective ? To investigate the significance of liquid-based cytology combined with p16 and Ki67 in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia （CIN）. Methods ? A total of 225 CIN patients as study subjects， and all were tested by liquid-based cytology， p16 and Ki67， respectively. The diagnostic accuracy of single and combined detection of liquid-based cytology， p16 and Ki67 were compared. Results ? The diagnostic accuracy of combined detection of liquid-based cytology， p16 and Ki67 was 100.00%， which was significantly higher than 91.56%， 88.44% and 86.67% of single detection of liquid-based cytology， p16 and Ki67， and the difference was statistically significant （χ2=19.838， 27.594， 32.143， P=0.000， 0.000， 0.000<0.05）. There was no significant difference in diagnostic accuracy among liquid-based cytology， p16 and Ki67 （P>0.05）. Conclusion ? Combined detection of liquid-based cytology， p16 and Ki67 in CIN diagnosis can significantly improve the diagnostic accuracy， and it is worthy of application and promotion.

【Key words】 Cervical intraepithelial neoplasia; Liquid-based cytology; p16; Ki67

宮頸病變在婦科臨床中較為常見， 而宮頸癌則是其中最嚴(yán)重的一種類型。臨床依據(jù)患者細(xì)胞的異常程度可將CIN分為Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級， 但均有轉(zhuǎn)變成宮頸癌的可能， 對婦女健康產(chǎn)生較大威脅[1， 2]。因此， 需要盡早診斷并采取合理的治療方法。有研究提出[3]， 從癌前病變發(fā)展至宮頸癌大約需要10年。因此， 在這一時期內(nèi)， 應(yīng)及時作出相應(yīng)診斷并及時進行干預(yù)， 阻止疾病進一步發(fā)展， 因此早期診斷顯得尤為重要。在傳統(tǒng)診斷中， 主要通過巴氏涂片進行檢查， 但是如果巴氏涂片的質(zhì)量較差， 且厚度存在差異， 在一定程度上影響其診斷結(jié)果， 假陰性率、假陽性率也相對較高[4]。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展， 在目前臨床診斷中， 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)廣泛應(yīng)用， 加上近年來臨床對抗癌基因的認(rèn)識逐漸加深， 將組織細(xì)胞學(xué)與基因技術(shù)相結(jié)合的新型診斷方式成為可能。本研究采用液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合p16、Ki67診斷， 為臨床診斷方案提供借鑒， 報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2016年2月～2018年2月收治的225例CIN患者作為研究對象， 年齡25～49歲， 平均年齡（35.89±4.87）歲。采用2001伯塞斯達（The Bethesda System， TBS）分類法判讀：無上皮內(nèi)病變或惡性病變（NILM）40例， 非典型鱗狀上皮細(xì)胞-意義不明確（ASCUS）20例， 非典型鱗狀上皮細(xì)胞-不除外高級別鱗狀上皮內(nèi)病變（ASC-H）

12例， 低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）76例， 高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）44例， 鱗狀上皮癌（SCC）33例。

1. 2 方法 225例患者分別給予液基細(xì)胞學(xué)、p16、Ki67

檢測。

1. 2. 1 液基細(xì)胞學(xué)檢查 ①采用宮頸液基細(xì)胞學(xué)采樣刷分別采集宮頸外口及宮頸管的上皮細(xì)胞， 將采樣刷置入保存液中;②采用液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)， 將脫落細(xì)胞制成一薄膜細(xì)胞涂片， 直徑距離為2 cm;③采用TBS診斷系統(tǒng)對其診斷， 其主要內(nèi)容包括：NILM、ASCUS、ASC-H、LSIL、HSIL、SCC等。

1. 2. 2 p16、Ki67免疫組化檢測 采用免疫組化方法檢測p16、Ki67蛋白表達。免疫組化染色采用Envision法。鼠抗人一抗Ki67和p16單克隆抗體以及HRP兔抗鼠二抗均購自北京中杉生物技術(shù)公司， 用PBS取代一抗作陰性對照。陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：Ki67陽性信號定位于細(xì)胞核， p16以細(xì)胞核及細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達;在LSIL中， p16呈大片彌漫強陽性判讀為陽性， 不累及基底層的點狀、斑片狀表達定義為陰性;Ki67以及p16的真陽性表達局限于鱗狀上皮細(xì)胞層下1/3定義為LSIL;Ki67以及p16的真陽性表達超過鱗狀上皮3/2至全層， 定義為HSIL。

1. 3 觀察指標(biāo) 比較液基細(xì)胞學(xué)、p16、Ki67單獨檢測及聯(lián)合檢測的診斷準(zhǔn)確率。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合Ki67、p16檢測的診斷準(zhǔn)確率為100.00%， 顯著高于液基細(xì)胞學(xué)、p16、Ki67單獨檢測的91.56%、88.44%、86.67%， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=19.838、27.594、32.143， P=0.000、0.000、0.000<0.05）。液基細(xì)胞學(xué)、p16、Ki67單獨檢測的診斷準(zhǔn)確率兩兩比較， 差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

近年來， 宮頸癌的發(fā)病率呈逐年上升發(fā)展趨勢， 嚴(yán)重威脅患者的身心健康和生命安全， 因此對宮頸病變的早期診斷和治療顯得尤為重要， 不僅能顯著降低宮頸癌的發(fā)病率， 還能及早有效防治宮頸癌[5， 6]。

隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展， 在目前臨床診斷中， 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)廣泛應(yīng)用， 該技術(shù)不僅有效改善取材方式和標(biāo)本的保存和固定、制片染色， 同時還可提升涂片質(zhì)量[7]。此

外， 該技術(shù)的背景較為干凈， 在觀察時清晰可見細(xì)胞結(jié)構(gòu)， 容易辨認(rèn)， 不僅使診斷的特異性大大提高， 同時還可提升其敏感性[8]。該技術(shù)的應(yīng)用為臨床提供較好的宮頸病變診斷方式， 但該技術(shù)亦會存在誤診、漏診， 其原因在于：萎縮性標(biāo)本的良性細(xì)胞具有異型性， 而血性標(biāo)本中， 其細(xì)胞結(jié)構(gòu)相對模糊， 由于陽性病理的細(xì)胞較小， 且較為擁擠， 與脫落的細(xì)胞形態(tài)難以區(qū)分， 該因素也是導(dǎo)致假陰性的主要原因[9]。隨著近年來臨床對基因?qū)W的不斷深入了解， 研究發(fā)現(xiàn)， 一些基因直接或間接參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展中， 如p16、Ki67。p16基因直接參與細(xì)胞生長增殖的負(fù)調(diào)節(jié)， p16基因的失活則可導(dǎo)致正常p16蛋白的表達異常。研究表明[10]， p16蛋白可競爭cyclinD與CDK4的結(jié)合， 通過抑制CDK4的活性， 阻止細(xì)胞G1期向S期轉(zhuǎn)化， 使細(xì)胞周期停止在G1期， 避免細(xì)胞的過度增殖。當(dāng)p16基因突變或缺失時， p16蛋白就無法正常表達， 細(xì)胞增殖失去控制， 最終形成腫瘤。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多數(shù)腫瘤存在p16蛋白表達的下降或缺失。Ki67是目前應(yīng)用最廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)志之一， 其是一種細(xì)胞增殖核抗原， 存在于G0期以外的各期細(xì)胞， 與細(xì)胞有絲分裂密切相關(guān)， 是反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的理想標(biāo)記物， 對判斷腫瘤惡性程度有一定的價值。本次研究結(jié)果表明， 液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合Ki67、p16檢測的診斷準(zhǔn)確率為100.00%， 顯著高于液基細(xì)胞學(xué)、p16、Ki67單獨檢測的91.56%、88.44%、86.67%， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=19.838、27.594、32.143， P=0.000、0.000、0.000<0.05）。臨床基于對分

子標(biāo)志物的了解， 很多新的分子標(biāo)志物有助于克服目前宮頸癌普篩的局限性。本研究結(jié)果表明， 將p16、Ki67分子標(biāo)記物聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢查可顯著提升診斷準(zhǔn)確度。

項目風(fēng)險分析與對策：病例數(shù)量不足：為盡可能準(zhǔn)確性的以樣本估計總體， 減小抽樣誤差需要一定的樣本量， 增大樣本量的有效辦法是多中心病例研究。由于多中心研究需要龐大的醫(yī)療人力資源及經(jīng)費開支， 所以本課題在設(shè)計時暫以本院醫(yī)療網(wǎng)絡(luò)為主。以本院近兩年收治的225例CIN患者為研究對象， 統(tǒng)計分析表明在課題期限內(nèi)應(yīng)該有充足的病例， 但不排除各種客觀因素造成病源流失， 以致無足夠的樣本量完成課題。規(guī)避措施：課題進行期間每月進行質(zhì)量監(jiān)控， 及時預(yù)見可能發(fā)生的樣本量不足情況。在樣本量不足時， 盡可能聯(lián)系急救醫(yī)療系統(tǒng)內(nèi)的兄弟單位進行多中心病例收集。

綜上所述， 對CIN患者采用p16、Ki67分子標(biāo)記物聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)診斷， 可顯著提升診斷準(zhǔn)確度， 值得臨床借鑒推廣。

參考文獻

[1] 葛雪飛， 張睿怡， 游珂， 等. p16/Ki67雙染在宮頸病變檢出中的作用. 中國計劃生育學(xué)雜志， 2017， 25（12）：855-859.

[2] 李莉， 王林， 李菊曉， 等. 宮頸細(xì)胞內(nèi)p16/Ki67表達與宮頸癌及癌前病變的關(guān)系及其用于HPV陽性人群分流的診斷價值. 中國腫瘤， 2018， 27（4）：311-315.

[3] 陳鋇. P16/Ki67雙染在宮頸上皮內(nèi)瘤變篩查及診斷中的價值. 中國臨床醫(yī)生雜志， 2017， 45（8）：89-92.

[4] 李玉霞， 宋曉婕， 陳莉， 等. 宮頸癌篩查中高危型HPV及液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合應(yīng)用的臨床價值. 中國婦幼保健， 2015， 30（3）：479-481.

[5] 羅紅學(xué)， 杜輝， 劉志紅， 等. 不同亞型人乳頭狀瘤病毒感染合并細(xì)胞學(xué)異常者宮頸上皮內(nèi)瘤變2級或3級及以上病變的患病風(fēng)險評估. 中華腫瘤雜志， 2018， 40（3）：232-238.

[6] Danhof NA， Kamphuis EI， Limpens J， et al. The risk of preterm birth of treated versus untreated cervical intraepithelial neoplasia （CIN）： a systematic review and meta-analysis. European Journal of Obstetrics & Gynecology， 2015（188）：24-33.

[7] 江維， 曾四元， 梁美蓉， 等. 宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查與hTERC基因檢測聯(lián)合應(yīng)用對陰道鏡活檢漏診高級別上皮內(nèi)瘤變的診斷效能. 山東醫(yī)藥， 2018， 58（3）：62-64.

[8] 李亞萍， 葉新梅， 徐永輝， 等. 薄層液基細(xì)胞學(xué)和宮頸人乳頭瘤病毒聯(lián)合檢測在宮頸癌篩查中的應(yīng)用. 寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報， 2017， 39（12）：1465-1468.

[9] Lee SJ， Kim WY， Shim SH， et al. Semi-quantitative HPV viral load in patients with ASC-US cytology： viral load correlates strongly with the presence of CIN but only weakly with its severity. Cytopathology Official Journal of the British Society for Clinical Cytology， 2015， 26（1）：19-25.

[10] 代維. 宮頸薄層液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合高危型人乳頭瘤病毒檢測在宮頸上皮內(nèi)瘤變篩查中的價值. 中國婦幼保健， 2017， 32（21）：

5438-5440.

[收稿日期：2019-04-02]