葉下珠總灰分、酸不溶性灰分和浸出物的含量測定

莫我躍 張前飛 趙應(yīng)梅 劉娟 楊再清 許斌

【摘 要】? 目的：測定葉下珠總灰分、酸不溶性灰分和浸出物的含量，為制定葉下珠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法：按照《中國藥典》2015年版2302灰分測定和2201浸出物測定法對葉下珠總灰分、酸不溶性灰分和浸出物進(jìn)行測定。結(jié)果：葉下珠總灰分含量為5.62%～8.16%，酸不溶性灰分含量為0.69%～1.70%，醇溶性浸出物含量為16.35%～29.55%;結(jié)論：建議葉下珠總灰分不得過8.24%，酸不溶性灰分不得過1.52%，醇溶性浸出物量不低于15.05%，所測得結(jié)果對葉下珠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究有重要意義。

【關(guān)鍵詞】 葉下珠;總灰分;酸不溶性灰分;浸出物

【中圖分類號(hào)】R284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2019）16-0047-03

Abstract：Objective To determine the total ash content， acid insoluble ash content and extractive from Phyllanthus urinaria L.， and to provide basis for formulating the quality standard of Phyllanthus urinaria L.. Methods Sample were measured according to the Chinese Pharmacopoeia （2015 edition） 2302 ash determination and 2201 extractive determination method for total ash content， acid insoluble ash content and extractive. Results The total ash content of Phyllanthus urinaria L. was between 5.62% and 8.16%， the acid insoluble ash content was between 0.69% and 1.70%， and the alcohol soluble extract content was between 16.35% and 29.55%. Conclusion It is suggested that the total ash content of Phyllanthus urinaria L. should not exceed 8.24%. The insoluble ash should not exceed 1.52%， and the amount of alcohol soluble extractive should not be less than 15.05%. The results obtained are of great significance for the study of the quality standard of Phyllanthus urinaria L..

Keywords：Phyllanthus urinaria L. ; Total Ash; Acid Insoluble Ash; Extractive

葉下珠為大戟科植物葉下珠Phyllanthus urinaria L.的干燥全草。多生于山坡、路旁、田間，花沿莖葉下而生，結(jié)果時(shí)狀如小珠，故有葉下珠之稱。分布于廣東、廣西、云南、湖南、貴州、福建、浙江、江西等地，具有清熱解毒、利水消腫、明目、消積的功效，用于痢疾、泄瀉、黃疸、水腫、熱淋、石淋、目赤、夜盲、疳積、癰腫、毒蛇咬傷等治療[1]。藥材中常含有一定量的灰分，包括植物本身的生理灰分和外來泥沙等，影響灰分含量因素較多。生長環(huán)境、土質(zhì)、水肥條件、種植習(xí)慣等的不同也會(huì)影響生理灰分變化，藥材中灰分的最高限量可以保證中藥的純度[2-3]。浸出物測定可充分反應(yīng)藥材的內(nèi)在質(zhì)量，是確保其療效確切、質(zhì)量可靠的有效手段。中藥材的浸出物含量測定作為控制其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用[4-6]。賈芳等曾對四川和廣西兩地產(chǎn)葉下珠進(jìn)行灰分、浸出物、沒食子酸研究發(fā)現(xiàn)，廣西產(chǎn)的和四川產(chǎn)的葉下珠在質(zhì)量方面存在一定的差異[7]。有必要對更多不同產(chǎn)地葉下珠的質(zhì)量進(jìn)行分析比較，研究以《中國藥典》[8]2015年版灰分測定和浸出物測定法，測定四川、廣西、貴州、云南、福建、廣東等地不同產(chǎn)地葉下珠總灰分和酸不溶性灰分和浸出物含量，為進(jìn)一步制定葉下珠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 材料 10批葉下珠來源見表1，其中4批來源于貴州，其余6批來源于四川、廣西、廣東、云南、福建等地，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院魏升華教授鑒定為大戟科葉下珠屬植物葉下珠Phyllanthus urinaria L.的帶根干燥全草。

1.2 儀器 DFD-700恒溫水浴鍋（北京國華醫(yī)療器械廠）;DFT-200藥材粉碎機(jī)（長沙市岳麓區(qū)中南制劑機(jī)械廠）;SX-5-12箱式電阻爐（天津泰斯特儀器有限公司）;Srtorius BSA224S電子天平（德國Srtorius公司）;202-3AB型電熱恒溫干燥箱（天津泰斯特儀器有限公司）;干燥器、坩堝（50mL）。

2 方法和結(jié)果

2.1 總灰分和酸不溶性灰分測定 按照《中國藥典》2015年版2302總灰分測定 取10批葉下珠供試品用粉碎機(jī)粉碎，使能通過二號(hào)篩，混合均勻，取供試品3g，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量（準(zhǔn)確至0.01g）緩慢熾熱，避免燃燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升溫至550℃，使完全灰化至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中總灰分的含量（%）。取總灰分項(xiàng)下所得的灰分，在坩堝中小心加人稀鹽酸約10mL，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10min，表面皿用熱水5mL沖洗，洗液并人坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移置同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中酸不溶性灰分的含量（%）。所得總灰分和酸不溶性灰分結(jié)果見表2。

由表2可知，10批葉下珠飲片總灰分含量在5.62%～8.16%之間，酸不溶性灰分含量在0.69%～1.70%之間。應(yīng)以統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析測試數(shù)據(jù)，基于測試數(shù)據(jù)，設(shè)定葉下珠總灰分和酸不溶性灰分限度的公式[9]μ=x+tsn+MU

注：x是樣本的平均數(shù);t是置信水平為 99%的學(xué)生t檢測值（單尾）（t0.01，9=3.2500）;s是樣本的標(biāo)準(zhǔn)偏差;n是樣本的批數(shù);MU 是不確定度評估。不確定度評估（葉下珠總灰分的擴(kuò)展不確定度為 0.04286×x，酸不溶性灰分的擴(kuò)展不確定度為0.069535×x）[10]

總灰分：

μ=x+tsn+MU=7.22+3.250×0.6943710+0.04286×7.22=8.24

酸不溶性灰分：μ=x+tsn+MU=1.12+3.250×0.31147710+0.069535×1.12=1.52

2.2 不同處理方法水溶性浸出物含量測定 按照《中國藥典》2015年版2201浸出物測定法項(xiàng)下的冷浸法和熱浸法測定，取1批（廣西欽州）葉下珠供試品粉末過二號(hào)篩，取供試品約4g置250mL的錐形瓶中，精密加水100mL。由表3可知，葉下珠采用熱浸法所得水溶性浸出物含量較高為23.56%。

2.3 不同濃度乙醇量對浸出物含量測定 取葉下珠（廣西欽州）按照《中國藥典》2015年版2201浸出物測定法項(xiàng)下以30%、50%、70%、90%乙醇量方法對醇溶性浸出物項(xiàng)下的冷浸法和熱浸法對影響探究。由表4可知，水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量最高的是采用乙醇量為30%的熱浸法的浸出物最高為24.12%，乙醇量為90%的冷浸法的浸出物最低9.58%。根據(jù)經(jīng)濟(jì)，實(shí)惠，方便，因此本文樣品的浸出物的測定采用醇溶性浸出物進(jìn)行測定。

2.4 樣品醇浸出物測定 按照《中國藥典》2015年版2201浸出物測定法項(xiàng)下采用乙醇量為30%的熱浸法取供試品約4g，精密稱定，置250mL的錐形瓶中，精密加乙醇量為30% 100mL，密塞，稱定重量，靜置1h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105°C干燥3h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定重量，以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量（%）。結(jié)果見表5。

由表5可知，10批葉下珠醇溶性浸出物含量在16.35%～29.55%之間。應(yīng)以統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析測試數(shù)據(jù)， 基于測試數(shù)據(jù)，設(shè)定葉下珠醇溶性浸出物限度的公式如下[9]μ=x-tsn-MU

注：x是樣本的平均數(shù);t是置信水平為 99%的學(xué)生t檢測值（單尾）（t0.01，9=3.250）;s是樣本的標(biāo)準(zhǔn)偏差;n是樣本的批數(shù);MU 是不確定度評估。 不確定度評估（葉下珠醇浸出物含量的擴(kuò)展不確定度為 0.13394×x）[10]。

醇浸出物含量：μ=x-tsn-MU=22.89-3.250×4.6416110-0.13394×22.89=15.05

3 討論

研究對10批葉下珠總灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量測定發(fā)現(xiàn)，不同來源樣品具有一定的差異，總灰分最高值是為8.16%（廣西欽州），最低值是5.62%（福建泉州），酸不溶性灰分最高值是1.70%（貴州威寧），最低值是0.69%（四川瀘州），醇溶性浸出物最高值是29.55%（貴州凱里麻江），最低值是16.35%（云南昭通），發(fā)現(xiàn)含量最高值和最低值均相差近1倍，導(dǎo)致差異可能的原因是產(chǎn)地海拔高度、土壤類型、水肥條件、采集時(shí)間等因素有關(guān)[2-3]，有待進(jìn)一步研究。

按照2015年版《中國藥典》的方法對10批葉下珠進(jìn)行測定，通過測定總灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量，得到較為準(zhǔn)確的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，為建立藥材標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)，根據(jù)所測結(jié)果建議葉下珠藥材總灰分不得過8.24%，酸不溶性灰分不得過1.52%，并建議將醇溶性浸出物按熱提法處理所得結(jié)果納入標(biāo)準(zhǔn)，并規(guī)定不低于15.05%。

參考文獻(xiàn)

[1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草（第四冊）[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999： 421，842.

[2]曲朋， 趙好冬， 龍宇， 等. 不同產(chǎn)地山羊角藥材灰分測定研究[J]. 吉林中醫(yī)藥， 2014， 34（6）：606-608.

[3]顧志榮，王亞麗.不同生長環(huán)境當(dāng)歸總灰分、酸不溶性灰分及浸出物比較分析甘肅省化學(xué)會(huì)第二十八屆年會(huì)暨第十屆中學(xué)化學(xué)教學(xué)經(jīng)驗(yàn)交流會(huì)論文集[C].167-169.

[4]李潔.不同產(chǎn)地半枝蓮中浸出物含量的比較研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25（6）：1207-1208.

[5]童巧珍，趙四清，周日寶，等.對不同種植方法白扁豆中浸出物含量測定的研究[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，25（2）19-20.

[6]秦健，吳孟嵐，王珂雅.不同產(chǎn)地何首烏藥材水分、灰分和浸出物的測定[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，7（13）67-68.

[7]賈芳，夏厚林，黃萍，等.四川葉下珠與廣西葉下珠的質(zhì)量比較研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，37（4）：19-22.

[8]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[9]張志鋒，戴領(lǐng)，吳春蕾，等.藏藥白花刺參的水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量的測定[J].西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，37（4）：597-602.

[10]張達(dá)正，劉強(qiáng)，曹志強(qiáng)測定人參水分、總灰分、酸不溶性灰分含量的不確定度評估[J].人參研究，2007（2）：15-17.

（收稿日期：2019-06-06 編輯：程鵬飛）