狗肝菜中有機(jī)酸的提取工藝及含量測定

姚山梅

(廣西崇左市憑祥市夏石中學(xué) 廣西 憑祥 532600)

1.材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料。儀器 KQ3200B型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；烘箱(上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；電子天平(奧豪斯儀器上海有限公司)；密封型搖擺式中藥粉碎機(jī)(無錫市江成液壓機(jī)械公司)

試劑 無水碳酸鈉基準(zhǔn)試劑(天津市化學(xué)試劑批發(fā)公司)；鄰苯二甲酸氫鉀(天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司)；氫氧化鈉(分析純,成都市科龍化工試劑廠)；鹽酸(分析純,廣東省精細(xì)化學(xué)品工程技術(shù)研究開發(fā)中心)；酚酞(成都市科龍化工試劑廠)；溴甲酚綠 (成都市科龍化工試劑廠)；甲基紅(成都市科龍化工試劑廠)；甲基橙(廣州化學(xué)試劑廠)；95%乙醇(分析純，成都市科龍化工試劑廠)

樣品 狗肝菜，購自崇左菜市場

1.2 實(shí)驗(yàn)方法。采用單因素實(shí)驗(yàn)、正交實(shí)驗(yàn),探究乙醇濃度、料液比、超聲波提取時(shí)間及溫度對狗肝菜中總有機(jī)酸提取量的影響規(guī)律，利用酸堿滴定法對其總有機(jī)酸的含量進(jìn)行測定，最終確定最佳提取條件。

工藝流程：采集狗肝菜→清洗→烘干→粉碎→乙醇浸潤→超聲波振蕩→總有機(jī)酸含量測定

2.結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)。

2.1.1 不同乙醇濃度對提取效果的影響。準(zhǔn)確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取溫度65℃、超聲提取時(shí)間30min、料液比﹝狗肝菜葉粉末(g)：乙醇(ml)﹞1:30的條件下，分別在乙醇濃度55%，65%,75%，85%,95%條件下提取，比較不同乙醇濃度對提取物中總有機(jī)酸含量的影響，乙醇濃度小于75%之時(shí),有機(jī)酸含量隨著乙醇濃度的增大而增加,但超過75%時(shí),總酸含量反而下降。這可能是因?yàn)橐掖紳舛冗^小時(shí)，不利于有機(jī)酸的浸出；濃度過大時(shí)，引起產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的變化。因此提取有機(jī)酸乙醇的濃度為75%時(shí)為最優(yōu)。

2.1.2 不同料液比對提取效果的影響。準(zhǔn)確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取溫度為65℃、超聲提取時(shí)間為30min,乙醇濃度為85%的條件下，分別于液料比為1:10,1:20,1:30，1:40,1:50的條件下提取，比較不同料液比對提取物中總有機(jī)酸含量的影響，當(dāng)料液比小于1:30時(shí)，有機(jī)酸提取率隨著料液比的增加而增加；當(dāng)料液比大于1:30時(shí)，有機(jī)酸提取率反而下降。這可能是因?yàn)榱弦罕冗^小時(shí)，浸提液太小，從而影響有機(jī)酸提取；若加水過多，不利于后濃縮，因此提取有機(jī)酸料液比為1:30時(shí)為最優(yōu)。

2.1.3 不同提取時(shí)間對提取效果的影響。準(zhǔn)確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取溫度65℃、料液比﹝狗肝菜葉粉末(g)：乙醇(ml)﹞1:30,乙醇濃度為85%的條件下，分別超聲提取20min,30min，40min,50min,60min，比較不同超聲提取時(shí)間對提取物中總有機(jī)酸含量的影響，隨著時(shí)間的延長，有機(jī)酸提取率先上升后下降。說明有機(jī)酸浸出過程與時(shí)間密切相關(guān)，時(shí)間過短，有機(jī)酸浸出不充分，但時(shí)間過長，可能影響產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的變化，從而使提取率降低。因此提取有機(jī)酸超聲提取時(shí)間為35min時(shí)為最優(yōu)。

2.1.4 不同提取溫度對提取效果的影響。準(zhǔn)確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取時(shí)間30min、料液比﹝狗肝菜葉粉末(g)：乙醇(ml)﹞1:30,乙醇濃度為85%的條件下，分別在超聲提取溫度55℃，60℃,65℃，70℃,75℃條件下提取，比較不同超聲提取溫度對提取物中總有機(jī)酸含量的影響，當(dāng)提取溫度小于70℃時(shí)，隨著溫度的升高，狗肝菜有機(jī)酸提取率隨之增大；當(dāng)溫度繼續(xù)升高，有機(jī)酸提取率呈下降趨勢。說明溫度升高有利于有機(jī)酸的浸出，但溫度過高會(huì)影響有機(jī)酸的穩(wěn)定性。因此提取有機(jī)酸超聲提取溫度為65℃時(shí)為最優(yōu)。

2.2 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)。精密稱取狗肝菜葉粉末1.0000g3份，在最佳組合條件,即乙醇濃度75%，料液比1:30，提取時(shí)間35min，提取溫度65℃的條件下，按擬定方法進(jìn)行提取，測定，計(jì)算含量。在此最佳參數(shù)組合條件下，有機(jī)酸含量的平均值為7.03%，提取率大于正交試驗(yàn)表中的任何一組，為最佳選擇。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)。精密稱取狗肝菜葉粉末1.0000g，在最佳組合條件，即乙醇濃度75%，料液比1:30，提取時(shí)間35min，提取溫度65℃的條件下，按擬定方法進(jìn)行提取，平行測定5次，計(jì)算含量。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.02%，表明該工藝提取方法測定總酸含量精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。精密稱取狗肝菜葉粉末1.0000g，在最佳組合條件，即乙醇濃度75%，料液比1:30,超聲時(shí)間35min，超聲溫度65℃的條件下,按擬定方法進(jìn)行提取,分別于0h，2h，4h，6h，8h，12h進(jìn)行含量測定,計(jì)算含量。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.35%，表明該工藝提取方法測定總酸含量在12h內(nèi)是穩(wěn)定的。

3.討論

雖然中草藥中有機(jī)酸類成分的提取分離及測定方法有很多，但其適用范圍條件各有所差異。要選擇出一種適合的提取分離和分析測定方法,除了要考慮所需要分析的有機(jī)酸類成分的結(jié)構(gòu)組成和性質(zhì)外，還需要充分考慮提取物中其它物質(zhì)成分可能對有機(jī)酸造成的干擾。因此，在實(shí)際應(yīng)用中要根據(jù)具體情況做具體分析,綜合各因素考慮,以確定出最佳的提取分離及測定方法。