不同炮制方法對藤三七珠芽總黃酮含量的影響

方镕澤，王杰，趙冉

(貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025)

藤三七[Anrederacordifolia(Tenore)van steen]為落葵科(Basellaceae)植物藤三七(BoussingaultiagracilisMiers var.pseudobaselloides Bailey)的珠芽，別名洋落葵，又稱落葵薯、川七、藤子三七、金錢珠、中枝蓮和土三七等[1]，是一種近年來引進(jìn)中國的藥食同源的藥用植物，原產(chǎn)地為巴西，目前在中國的云南、廣東、福建、四川、浙江、江蘇、北京等地均有分布。其味微苦，性溫，具有滋補(bǔ)、活血補(bǔ)血、補(bǔ)益肝腎、消腫散瘀和壯腰健膝等功效，主治無名腫毒，外傷出血、吐血，腰膝無力等[2]。目前市場有用藤三七酒作為保健品使用，發(fā)揮消腫散瘀、補(bǔ)益肝腎的保健效果[3]。目前，國內(nèi)外有關(guān)藤三七的化學(xué)成分研究還處于初級階段，已有研究表明,藤三七的主要成分為皂苷類和黃酮類化合物，具有降血糖[4]、抗脂質(zhì)過氧化[5]、抗菌消炎[6]、抗HIV[7]等藥理活性。由于藤三七干燥時表面易發(fā)霉菌，在切片干燥時切面易發(fā)霉，變黑，因此此次研究采用蒸制、酒制等方法，用蒸制法驗證是否能更好的進(jìn)行藥材儲藏，酒蒸是驗證在蒸制的基礎(chǔ)上是否增加了藥材的總黃酮含量，加強(qiáng)消腫散瘀的功效，為今后藤三七珠芽藥材的充分利用提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

紫外可見分光光度計(日本島津公司，型號：UV-2700);水浴鍋(常州國華電器有限公司，型號：HH-6);十萬分之一電子分析天平(日本島津公司，型號：AUW120D);萬分之一電子分析天平(上海佑科儀器儀表有限公司，型號：YS1609256)。

氫氧化鈉、硝酸鋁、亞硝酸鈉為市售分析純；對照品：蘆丁對照品(貴州迪大科技有限責(zé)任公司，純度≥98.0%)。

1.2 樣品來源及處理

藤三七藥材采自貴陽市花溪區(qū)貴州中醫(yī)藥大學(xué)后山田邊，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)方藥教研室趙冉副教授鑒定為藤三七珠芽(BoussingaultiagracilisMiers var.pseudobaselloides Bailey)。

生品：將新鮮藤三七珠芽分為三份，切成厚片，將生品放于40 ℃烘箱，烘干。

蒸制品：將新鮮藤三七珠芽烘至六成干，蒸制透心即可。

酒蒸品：將新鮮藤三七珠芽烘至六成干，用黃酒悶潤0.5 h，再蒸至透心。將炮制的藤三七放于40 ℃烘箱中，烘干，打粉過2號篩，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 總黃酮的測定方法

精密移取藤三七珠芽濾液5 mL，置于25 mL容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉1 mL，搖勻，放置6 min，再加10%硝酸鋁1 mL，搖勻，放置6 min，再加4%的氫氧化鈉10 mL，加40%的乙醇稀釋到刻度，放置15 min，以亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉試劑為空白參比液，在400～800 nm之間掃描，結(jié)果供試品溶液在510 nm處有最大吸收。

2.2 總黃酮含量的測定

2.2.1 對照品的制備

精密稱取蘆丁11.09 mg，置于25 mL的容量瓶中，加入40%的乙醇溶液，超聲20 min，再加入乙醇定容至刻度制成0.443 6 mg/mL蘆丁對照溶液即可。

2.2.2 供試品的制備

精密稱定藤三七珠芽粉末2 g，置于錐形瓶中，加入40%的乙醇50 mL，靜置1 h，稱定質(zhì)量，再置于80 ℃水浴回流2次，每次1 h，取出，放冷，用40%的乙醇補(bǔ)重后，離心過濾，取5 mL濾液置于25 mL容量瓶中待用。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密取蘆丁對照品溶液1 mL、2 mL、2.5 mL、3 mL、3.5 mL、4 mL置于25 mL容量瓶中，按照“2.1”項下的操作方法進(jìn)行顯色后，用乙醇溶液定容至刻度，測定吸光度A，以蘆丁濃度C為橫坐標(biāo)，以吸光度A為縱坐標(biāo)，得到回歸方程Y=9.813X+0.028 7(r=0.999 3)，說明蘆丁對照品在0.017 74～0.070 98 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，如圖1所示。

2.2.4 精密度試驗

精密量取供試品(生品藤三七)的提取濾液，連續(xù)測定6次，得出吸光度，計算RSD值，由實驗數(shù)據(jù)可知其RSD<3.0%，說明儀器精密度良好。其結(jié)果如表1所示。

圖1 藤三七總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1精密度試驗

編號吸光度吸光度平均值RSD(%)10.34320.34730.3490.3421.7540.33350.34560.338

2.2.5 重復(fù)性試驗

精密稱取6份藤三七珠芽(生品)粉末約2 g，依次測定吸光度，計算RSD值，其結(jié)果如表2所示。由實驗數(shù)據(jù)可知其RSD<3.0%,說明該實驗方法重復(fù)性較好。

表2重復(fù)性試驗

編號吸光度A吸光度平均值RSD(%)10.33320.35230.3610.3462.8440.34450.34760.339

2.2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品濾液，測定10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min的吸光度，計算RSD值，由實驗可知其RSD<3.0%，說明樣品在1 h內(nèi)穩(wěn)定性較好，結(jié)果如表3所示。

表3穩(wěn)定性試驗

時間(min)吸光度A吸光度平均值RSD(%)100.341200.333300.3360.3312.10400.329500.328600.321

2.2.7 加樣回收試驗

取6份已知總黃酮含量的藤三七珠芽藥材，精密稱定約0.25 g，加入與其藤三七珠芽總黃酮含量比為1∶0.5，1∶1的蘆丁對照品，按上述方法“2.2.2”項下進(jìn)行提取后，取5mL按方法“2.1”項下進(jìn)行顯色后測定其吸光度，計算其回收率，結(jié)果如表4所示。

2.2.8 樣品含量的測定

取生品及炮制品藤三七珠芽2 g，按方法“2.2.2”項下制備供試品，按方法“2.1”項下進(jìn)行顯色，測定吸光度，計算含量。其實驗結(jié)果如表5所示。

表4加樣回收試驗

編號藤三七珠芽質(zhì)量(g)瓜蔞總黃酮含量(mg)加入對照品量(mg)吸光度A檢測含量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)10.250 110.105.110.60214.6288.4320.250 510.125.010.61514.9596.5030.251 110.145.150.62115.1196.3793.433.2440.250 810.1310.260.80119.7093.2450.250 710.1310.090.79819.6294.0960.250 510.1210.170.79219.4791.93

表5各總黃酮含量測定結(jié)果

樣品稱樣量(g)吸光度A總黃酮含量(%)總黃酮均值(%)RSD(%)生品2.001 90.3383.942.000 20.3484.073.991.672.000 90.3413.98蒸制2.001 20.2112.322.001 60.2062.262.253.352.001 60.1992.17酒蒸2.000 70.2372.662.000 90.2272.532.554.162.001 10.2152.37

3 討論

藤三七珠芽成份主要是皂苷類和黃酮類，且本身含有大量黏液質(zhì)、在整個珠芽進(jìn)行干燥時效果不好，貯存時易發(fā)黑發(fā)霉，所以本實驗將藤三七珠芽進(jìn)行蒸制，目的是起到殺酶保苷的作用，又由于該藥材可用于活血化瘀，所以在蒸制的基礎(chǔ)上驗證酒蒸是否增加總黃酮含量，更有利于活血化瘀。在供試品制備時將其進(jìn)行離心，其目的是由于所含黏液質(zhì)較多，在過濾上造成較大的困難，因此用離心的方法，取其上清液進(jìn)行過濾使用。在提取上，選用了30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇作比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在同等條件下用40%乙醇提取的吸光度較大，在比較料液比1∶20，1∶25、1∶30時，發(fā)現(xiàn)當(dāng)料液比在1∶25時，所提取的的總黃酮含量最大，所以本試驗選用40%的乙醇進(jìn)行提取，料液比為1∶25，且在料液比為1∶25時，離心的效果較好。實驗結(jié)果表明，藤三七珠芽通過蒸制后，其總黃酮含量降低，但進(jìn)行貯存的效果卻優(yōu)于生品。而酒蒸后的藤三七珠芽，其總黃酮含量略高于蒸制，其干燥貯存效果也優(yōu)于生品與蒸制。