頂空氣相色譜法同時測定環(huán)維黃楊星D中四種有機(jī)溶劑殘留量的研究

江蘇省鹽城市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)中心（224055）鄭灝 丁愛華 支榮榮

環(huán)維黃楊星D（Cyclovirobuxinum D, CVB-D）是從黃楊科植物小葉黃楊(Buxus microphylla Sieb. et Zucc. var. sinica Rehd. et Wils.)植物中提取的生物堿[1-4]，用作心血管疾病療效良好的中藥黃楊寧片的藥用原料[5][6][7]，分別被2000年版、2005年版、2010年版和2015年版《中國藥典》一部收載。環(huán)維黃楊星D在提取精制過程中涉及環(huán)己烷、丙酮、甲醇、三氯甲烷的使用，但四版藥典中環(huán)維黃楊星D項(xiàng)下都沒有規(guī)定有機(jī)溶劑殘留檢查項(xiàng)，為保證黃楊寧片的用藥安全，有必要對環(huán)維黃楊星D中這幾種有機(jī)溶劑的殘留量進(jìn)行測定。本研究參考有關(guān)文獻(xiàn)[8-11]建立頂空毛細(xì)管氣相色譜法（GC）測定環(huán)維黃楊星D中四種有機(jī)溶劑殘留量的方法，方法準(zhǔn)確、靈敏，可作為環(huán)維黃楊星D中殘留溶劑的檢測方法。

1 儀器與試藥

Agilent 7890A氣相色譜儀；Agilent DB-WAX色譜柱（30.0m ×0.32mm ×0.25μm）；Agilent 7694E 頂空進(jìn)樣器；梅特勒BP-211D電子分析天平；環(huán)已烷、丙酮、三氯甲烷、甲醇、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）均為色譜純；3批環(huán)維黃楊星D樣品由東臺市康寧植物素有限公司提供，批號分別為160701、160702、160703。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent DB-WAX 柱（30.0m ×0.32mm ×0.25μm），程序升溫：40℃保持5 min，以10℃·min-1的速率升溫至100℃，再以35℃·min-1程序升溫至200℃，保持1分鐘；進(jìn)樣口溫度150℃；氫火焰離子化檢測器( FID )溫度220℃；載氣為高純氮?dú)?，流速?2.5 mL·min-1，分流比為10∶1；頂空進(jìn)樣器參數(shù)：平衡溫度85℃，平衡時間30分鐘，傳輸管溫度為110℃，進(jìn)樣環(huán)溫度為105℃。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取環(huán)己烷、丙酮、甲醇、三氯甲烷適量，加入DMF溶解并稀釋制成每lmL中分別含環(huán)己烷0.388mg、丙酮0.5mg、甲醇0.5mg、三氯甲烷0.006mg的對照品混合溶液。精密量取3mL，置l0mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，氣體進(jìn)樣。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品，研細(xì)，取約0.3g，精密稱定，置10mL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加入DMF 3mL，密封，氣體進(jìn)樣。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對照品溶液3mL、精密加入“2.2.1”項(xiàng)下對照品混合溶液2mL和DMF 1mL混合的供試品溶液以及DMF 3mL，分別置于頂空瓶中，迅速密封瓶口，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，色譜圖見附圖。其中環(huán)己烷、丙酮、甲醇、三氯甲烷的保留時間分別為1.604、2.191、3.913、6.293min，各對照品之間分離度均大于1.5，計(jì)算理論塔板數(shù)均大于10000。

從空白樣品中可以看出DMF對測定無干擾。表明該法專屬性良好。

2.4 檢測限和定量限試驗(yàn) 分別精密稱取環(huán)己烷、丙酮、甲醇、三氯甲烷各適量，用DMF定容并逐級稀釋成適當(dāng)濃度的測定溶液，分別精密量取各測定溶液3mL，置頂空瓶中，密封，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測，并計(jì)算信噪比。當(dāng)信噪比為10∶1時的測定濃度為定量限，此時環(huán)己烷濃度為0.154mg·L-1，丙酮濃度為0.807mg·L-1、甲醇濃度為4.006mg·L-1、三氯甲烷濃度為1.5mg·L-1。當(dāng)信噪比為3∶1時的測定濃度為檢測限，此時環(huán)己烷濃度為0.0463mg·L-1，丙酮濃度為0.202mg·L-1、甲醇濃度為1.502mg·L-1、三氯甲烷濃度為0.48mg·L-1。

附表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

附表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

附表3 三批樣品溶劑殘留量（%）

附圖 對照品(A)、空白(B)和樣品(C)色譜圖。1.環(huán)己烷，2.丙酮，3.甲醇，4.三氯甲烷

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對照品混合溶液0.4、0.6、1.0、1.4、1.6mL，置25mL量瓶中，用DMF溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密量取各濃度對照品溶液3mL置頂空瓶中，密封，氣體進(jìn)樣。測定峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積的平均值為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸。線性回歸結(jié)果為：環(huán)己烷在168.947～275.789 mg·L-1范圍內(nèi)線性方程為Y = 6.000×106X+2.903×105(r=0.9845)，丙酮在210.835～843.341 mg·L-1范圍內(nèi)線性方程為Y=7.556×105X–2.576×102(r=0.9999)、甲醇在206.157～824.627 mg·L-1范圍內(nèi)線性方程為Y=2.206×105X+5.873×103(r=0.9999)、三氯甲烷在1.988～7.952mg·L-1范圍內(nèi)線性方程為Y=9.000×106X–1.281×102(r=0.9999)。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 分別精密稱取環(huán)己烷、丙酮、甲醇、三氯甲烷各適量，按“2.2.1”項(xiàng)下對照品溶液制備法平行制備5份，精密量取3mL，置頂空瓶中，密封，依法測定，計(jì)算其校正因子。見附表1。

2.7 精密度試驗(yàn)

2.7.1 日內(nèi)精密度 同一天精密稱取同一批樣品(批號160701)，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備6份，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算各殘留溶劑的含量。測得日內(nèi)精密度結(jié)果為：丙酮的平均含量為0.00093%，RSD為2.56%(n=6)，環(huán)己烷、甲醇及三氯甲烷未檢出。

2.7.2 日間精密度 不同天精密稱取同一批樣品(批號160701)，共試驗(yàn)3天，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算各殘留溶劑的含量。測得日間精密度結(jié)果為：丙酮的平均含量為0.00092%，RSD為0.03% (n=6)，環(huán)己烷、甲醇及三氯甲烷未檢出。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 取已測知各殘留溶劑含量的樣品(批號160701) 6份，每份精密稱取0.3g，置頂空瓶中，精密加入“2.2.1”項(xiàng)下對照品混合溶液3mL使溶解，依法測定。將各加樣回收溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，使用外標(biāo)法定量。結(jié)果見附表2。

2.9 樣品測定 取樣品3批，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，氣體進(jìn)樣，測定，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算殘留量。結(jié)果見附表3。

3 討論

根據(jù)《中國藥典》2015年版四部附錄0861項(xiàng)殘留溶劑測定法規(guī)定[12]，環(huán)己烷、丙酮、甲醇、三氯甲烷限度應(yīng)分別不得過0.388%、0.5%、0.5%、0.006%。測定結(jié)果表明，3批樣品中溶劑殘留均小于藥典規(guī)定限度。本實(shí)驗(yàn)中四種溶劑的檢測濃度和定量濃度均遠(yuǎn)低于藥典規(guī)定，方法學(xué)驗(yàn)證證明該方法分離度良好，靈敏度高，在考察的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率符合規(guī)定，可作為環(huán)維黃楊星D中殘留溶劑的質(zhì)量控制方法。