高效液相色譜法在測定食品中胭脂紅酸的有效應(yīng)用

余雪華

摘 要：食品中使用胭脂紅酸作為色素的情況較多，為充分有效保障食品安全，需要積極開展胭脂紅酸的測定工作，積極使用經(jīng)過優(yōu)化的高效液相色譜法，可以實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確測定的目標(biāo)。本文主要從利用高效液相色譜法測定食品中胭脂紅酸的重要性分析入手，重點(diǎn)按照材料與方法、結(jié)果與分析兩個(gè)方面介紹了高效液相色譜法實(shí)際應(yīng)用的流程和環(huán)節(jié)，實(shí)驗(yàn)證明使用甲醇- 0.02mol/L磷酸二氫銨水溶液作為流動(dòng)相、使用2mol/L鹽酸作為提取溶劑、使用PAX柱實(shí)施凈化活動(dòng)，將能夠起到良好的測定效果，為有效開展食品中胭脂紅酸的測定工作提供一定前提。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;測定;食品;胭脂紅酸

胭脂紅酸是蒽醌類天然色素，擁有著較為穩(wěn)定的理化性質(zhì)，可以被廣泛應(yīng)用在多種行業(yè)之中，如醫(yī)藥、食品、化妝品以及紡織品等，是經(jīng)過FDA允許的可以使用在食品中的天然色素。當(dāng)前合成色素的使用越來越嚴(yán)格，食品生產(chǎn)過程中對(duì)于天然色素的重視程度不斷上升，胭脂紅酸作為優(yōu)良安全的天然色素，受到人們的青睞?，F(xiàn)階段多種食品生產(chǎn)及制作過程中都積極使用胭脂紅酸這一色素，國內(nèi)在胭脂紅酸的使用方面有著嚴(yán)格的規(guī)定，但是在具體檢測方法標(biāo)準(zhǔn)方面還存在著一定不足，為有效強(qiáng)化胭脂紅酸的測定效果，需要注重有效建立起食品中胭脂紅酸的準(zhǔn)確測定方法。本文以高效液相色譜法作為重要研究對(duì)象，觀測其在食品中胭脂紅酸的測定情況，希望能夠?yàn)橛行ч_展胭脂紅酸測定工作提供借鑒和參考。

1.利用高效液相色譜法測定食品中胭脂紅酸的重要性

合成色素測定過程中有著較為成熟的方法，但是對(duì)于胭脂紅酸這一天然色素來說，其中擁有著較為復(fù)雜的成分，使用常用的分光光度法加以測定，會(huì)容易受到多種因素的干擾。因而國內(nèi)外都在不斷開展胭脂紅酸測定的研究工作，高效液相色譜法就是其中重要一種，且也得到了較為有效的應(yīng)用。但是不容忽視的是，食品擁有著十分繁雜的種類，基質(zhì)也很復(fù)雜，現(xiàn)階段采用的高效液相色譜法在實(shí)際測定胭脂紅酸方面還有著一定缺陷，包含復(fù)雜基質(zhì)凈化效果不佳、前處理操作較為復(fù)雜、抗干擾能力較差、會(huì)受到人工合成色素的影響等，對(duì)此需要注重改進(jìn)高效液相色譜法應(yīng)用過程的條件和儀器，針對(duì)多種基質(zhì)凈化條件和前處理方法加以對(duì)比和分析，獲取到更多測定胭脂紅酸的基礎(chǔ)性數(shù)據(jù)，便于有效尋找到更好的檢測方法，使其達(dá)到較高的靈敏度、回收率和簡便性。通過科學(xué)使用經(jīng)過優(yōu)化的高效液相色譜法，將能夠針對(duì)食品中的胭脂紅酸含量加以準(zhǔn)確測定，從而有效判斷出食品是否保持著安全，進(jìn)而避免不安全食品流入市場，給人們身心健康造成不良影響。

2.材料與方法

在實(shí)際測定食品中胭脂紅酸情況的過程中，積極使用高效液相色譜法，可以起到良好效果，為不斷改進(jìn)測量工作，需要在實(shí)驗(yàn)中加以驗(yàn)證，選擇到更為優(yōu)良的條件和方法。

2.1儀器

實(shí)驗(yàn)活動(dòng)進(jìn)行中，選擇由睿科儀器有限公司生產(chǎn)的Auto EVA-20Plus全自動(dòng)平行濃縮儀;由日本島津生產(chǎn)的LC-2030C高效液相色譜儀;由賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司生產(chǎn)的SQP電子分析天平;由美國安捷倫生產(chǎn)的Agilent 1260 HPLC-DAD;由日本日立生產(chǎn)的GR22N 離心機(jī);由美國安捷倫Vac Elut 20固相萃取裝置等[1]。

2.2試劑

由天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨、磷酸氫二鈉、磷酸以及乙酸鈉，都是屬于優(yōu)級(jí)純的;由賽默飛世爾科技（中國）有限公司生產(chǎn)的乙腈和甲醇，這些屬于HPLC級(jí);分別由上海麥克林生化科技有限公司和太倉滬試試劑有限公司生產(chǎn)的乙酸和鹽酸，同樣都是優(yōu)級(jí)純的;以及不同規(guī)格的萃取柱。

2.3實(shí)驗(yàn)方法

2.3.1配置標(biāo)準(zhǔn)溶液

第一，要配置pH6.0乙酸鈉緩沖液。這其中需要選擇54.6g乙酸鈉，將20ml的1mol/L乙酸溶液加入其中，使其達(dá)到充分溶解狀態(tài)之后，加入適量的水，待其稀釋到500ml的時(shí)候，可以得到乙酸鈉緩沖液[2]。第二，配置1.0 mg/ml胭脂紅酸儲(chǔ)備液，按照要求稱取好一定量的胭脂紅酸標(biāo)準(zhǔn)品，研究過程中選擇11.8mg即可，然后使用事先配置好的pH6.0乙酸鈉緩沖液進(jìn)行溶解，使其達(dá)到10ml的時(shí)候，將其冷藏并采用避光保存的方式。第三，需要配置好100μg/ml胭脂紅酸標(biāo)準(zhǔn)使用液。這其中需要取1.0mg/ml的胭脂紅酸儲(chǔ)備液，將其使用水進(jìn)行定容，當(dāng)其達(dá)到10ml狀態(tài)之后，同樣采用冷藏避光的方式加以保存[3]。

2.3.2前處理

做好樣品的前處理工作，是開展實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的重要基礎(chǔ)，這是有效發(fā)揮高效液相色譜法測定食品中胭脂紅酸的有效手段。

第一，做好提取工作。按照精確到0.01g的要求，準(zhǔn)確稱取好樣品，取5.0g即可，將其放置在三角瓶之中，將20ml的2mol/L鹽酸加入到三角瓶中，使其在沸水浴狀態(tài)中開展30mim的提取工作，為有效強(qiáng)化提取的充分性，需要注重開展5～6次的振搖活動(dòng)，當(dāng)其取出來恢復(fù)到正常室溫之后，就可以把其轉(zhuǎn)移到50ml的離心管之中。在離心操作之后，50ml比色管中將能夠容納全部的上清液，如果樣品沒有達(dá)到既定的離心效果，可以使用玻璃濾紙進(jìn)行處理[4]。為提升提取效果，需要注重開展重復(fù)提取工作，這其中需要再次借助于鹽酸和10min的離心操作，轉(zhuǎn)速應(yīng)該保持在4000r/min。

第二，凈化。開展凈化活動(dòng)過程中，首先要使用5ml甲醇活化混合陰離子交換柱，為實(shí)現(xiàn)良好的水平衡，需要加入其中5.0ml的水，將5.0ml的提取液加以準(zhǔn)確取出，使其達(dá)到過柱的狀態(tài);其次，針對(duì)固相萃取柱進(jìn)行有效淋洗，使用5.0ml的水就可以達(dá)到良好效果，并對(duì)其進(jìn)行抽干處理;再者，需要開展洗脫，將洗脫液加以有效收集，這其中主要使用5 ml的2%磷酸甲醇溶液，在此基礎(chǔ)上使用40℃氮加以吹干，將其定容到1.0ml的狀態(tài)中;最后，將凈化處理好的樣品加以過濾，并將其放置在樣品瓶中，為后續(xù)采用高效液相色譜法開展測定工作提供前提。

第三，確定好色譜條件。對(duì)于色譜柱來說，主要是采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，其大小為250 mm×4.6 mm。而在具體流動(dòng)相方面，主要是劃分為兩個(gè)部分，首先，A是甲醇;其次，B是0.02 mol/l磷酸二氫銨。實(shí)際開展洗脫操作的過程中，情況如下表1所示。

3.結(jié)果與分析

在利用高效液相色譜法開展食品中胭脂紅酸測定實(shí)驗(yàn)的過程中，能夠發(fā)現(xiàn)該方法擁有一定優(yōu)勢(shì)，但是不容忽視的是，其中還存在著一些需要不斷改進(jìn)和優(yōu)化的地方。

第一，在優(yōu)化色譜條件方面。首先，要能夠合理選擇到流動(dòng)相。實(shí)際測定胭脂紅酸的過程中，多數(shù)情況下所選擇到的流動(dòng)相都是甲醇-磷酸鹽水溶液或者甲醇-甲酸水溶液等，通過實(shí)驗(yàn)開展分別研究活動(dòng)，按照不同觀測點(diǎn)開展細(xì)致觀測活動(dòng)，能夠發(fā)現(xiàn)這些流動(dòng)相都擁有著較好的洗脫效果，在等度洗脫時(shí)峰形狀態(tài)良好，而在梯度洗脫時(shí)也具備著小雜峰狀態(tài)，尤其是甲醇-甲酸水溶液，效果最佳。但是需要注意到，這些流動(dòng)相實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中都屬于較低的pH值狀態(tài)，想要胭脂紅酸和常用的食品合成色素達(dá)到徹底分離，還存在著一定不足，因而積極使用甲醇- 0.02mol/L磷酸二氫銨水溶液可以起到良好效果。其次，在選擇檢測波長方面。在測定食品中胭脂紅酸的環(huán)節(jié)中，需要考量到人工合成色素的影響，將檢測波長控制在280nm時(shí)可以達(dá)到最佳效果。

第二，在優(yōu)化前處理?xiàng)l件方面。需要針對(duì)胭脂紅酸樣品的提取工作加以高度重視，2mol/L鹽酸在提取活動(dòng)進(jìn)行中，相較于一般常用的提取溶劑，凈化效果良好，且能夠?qū)㈦s質(zhì)帶來的干擾降低到最小限度，并針對(duì)峰形進(jìn)行有效改善。同時(shí)還需要針對(duì)凈化條件進(jìn)行有效優(yōu)化，研究活動(dòng)進(jìn)行中發(fā)現(xiàn)積極使用PAX柱實(shí)施凈化活動(dòng)，將能夠使得基質(zhì)凈化保持著更為平穩(wěn)的基線狀態(tài)，且峰形保持著良好的對(duì)稱效果，出現(xiàn)雜質(zhì)峰的幾率也較低。

4.結(jié)束語

高效液相色譜法在測定食品中胭脂紅酸方面發(fā)揮著積極作用，為有效提升準(zhǔn)確測定效果，需要注重開展不斷優(yōu)化和改進(jìn)工作，重點(diǎn)優(yōu)化其色譜條件和前處理?xiàng)l件方面。本次研究活動(dòng)進(jìn)行中，選擇合適的儀器、設(shè)備，設(shè)定好相應(yīng)的測定條件，明確高效液相色譜法在實(shí)際測定食品中胭脂紅酸的應(yīng)用效果，發(fā)現(xiàn)該方法應(yīng)用環(huán)節(jié)還存在著一定不足，要能夠合理確定好各項(xiàng)優(yōu)化條件，使用甲醇- 0.02mol/L磷酸二氫銨水溶液作為流動(dòng)相、使用2mol/L鹽酸作為提取溶劑、將檢測波長控制在280nm、使用PAX柱實(shí)施凈化活動(dòng)，可以起到很大程度的改善作用。在經(jīng)過優(yōu)化處理的高效液相色譜法下，將能夠準(zhǔn)確測定好食品中的胭脂紅酸含量情況，充分保障食品安全與健康。

參考文獻(xiàn)：

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