中華絨螯蟹幼蟹對(duì)蘇氨酸需求量的研究

王 偉葉金云，?楊 霞張易祥劉 沛，3（．溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院、生命科學(xué)學(xué)院，溫州35035；．浙江省水生生物資源養(yǎng)護(hù)與開發(fā)技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院水生動(dòng)物繁育與營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖州師范學(xué)院，湖州33000；3．大連海洋大學(xué)，大連603）

中華絨螯蟹幼蟹對(duì)蘇氨酸需求量的研究

王 偉1葉金云1，2?楊 霞2張易祥2劉 沛2，3
（1．溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院、生命科學(xué)學(xué)院，溫州325035；2．浙江省水生生物資源養(yǎng)護(hù)與開發(fā)技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院水生動(dòng)物繁育與營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖州師范學(xué)院，湖州313000；3．大連海洋大學(xué)，大連116023）

摘 要：通過56 d的生長(zhǎng)試驗(yàn)確定中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）幼蟹對(duì)蘇氨酸的需求量。試驗(yàn)設(shè)計(jì)了6種以酪蛋白、明膠和晶體氨基酸為蛋白質(zhì)源的等氮等能純化飼料，通過添加晶體L－蘇氨酸，使得飼料中蘇氨酸含量分別為飼料干物質(zhì)的0．86%（對(duì)照，無外源蘇氨酸）、1．24%、1．61%、2．04%、2．42%、2．81%。選取初始體重為（0．36±0．00）g的中華絨螯蟹幼蟹360只，隨機(jī)分為6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只幼蟹。結(jié)果表明：隨飼料中蘇氨酸含量的升高，幼蟹的增重率、特定生長(zhǎng)率以及消化酶（胃蛋白酶、胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶）活力均先升高后降低，在蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的1．61%時(shí)，各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到最大值，且此時(shí)飼料系數(shù)最低，蛋白質(zhì)效率最高，且該組增重率、特定生長(zhǎng)率顯著高于0．86%、1．24%、2．42%和2．81%組（P＜0．05），消化酶活力顯著高于其他各組（P＜0．05）。飼料中蘇氨酸含量對(duì)幼蟹的成活率及體成分無顯著影響（P＞0．05）。幼蟹肝胰腺超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶和酸性磷酸酶活力均隨飼料中蘇氨酸含量的升高呈先升高后降低趨勢(shì)，并分別在蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的1．61%、1．61%和2．42%時(shí)達(dá)到最大值。以增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行折線回歸模型分析，得到中華絨螯蟹幼蟹對(duì)飼料中蘇氨酸的需求量為飼料干物質(zhì)的1．59%（飼料蛋白質(zhì)的3．98%）。

關(guān)鍵詞：中華絨螯蟹；蘇氨酸；需求量；消化酶；非特異性免疫指標(biāo)

蘇氨酸（threonine，Thr）是魚蝦健康生長(zhǎng)所必需的氨基酸之一，蘇氨酸的缺乏可以導(dǎo)致水生動(dòng)物生長(zhǎng)減緩［1－3］，飼料利用率降低［4－6］。蘇氨酸還直接參與體蛋白質(zhì)的合成，且具有一定的免疫作用。近年來，隨著賴氨酸和蛋氨酸在配合飼料中的廣泛使用，以及大量植物性蛋白質(zhì)源如玉米蛋白、小麥面筋、豆粕、菜籽粕等在飼料中的使用，蘇氨酸逐漸成為影響動(dòng)物生產(chǎn)性能的限制性氨基酸［7－8］，有關(guān)蘇氨酸的研究已成為新的熱點(diǎn)之一。目前，水產(chǎn)動(dòng)物的蘇氨酸需求量已見部分報(bào)道，如斑節(jié)對(duì)蝦（Penaeus monodon）蘇氨酸需求量為飼料蛋白質(zhì)的3．5%［3］、凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus van? namei）為3．53%［9］、低鹽度下凡納濱對(duì)蝦（Litope?naeus vannamei）為3．78%［10］、日本對(duì)蝦（Penaeus japonicus）為2．6%［11］?？梢?，不同種類的水生動(dòng)物對(duì)蘇氨酸的需求量不同，即使同一種類在不同條件下其氨基酸需求量也存在差異，而有關(guān)中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）蘇氨酸需求量的研究尚未見報(bào)道。

中華絨螯蟹，俗稱河蟹，是我國(guó)特有的淡水珍品。其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富、肉味鮮美，備受國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)青睞。近幾年，有關(guān)中華絨螯蟹對(duì)蛋白質(zhì)、脂肪、蛋白質(zhì)能量比、脂肪酸、鈣、磷及其比例、維生素、肌醇和膽堿等需求量的研究均有報(bào)道［12］。但有關(guān)中華絨螯蟹對(duì)必需氨基酸需求量的研究?jī)H限于賴氨酸、蛋氨酸和精氨酸［13］，尚不能全面反映其對(duì)必需氨基酸的需求狀況。本試驗(yàn)采用蘇氨酸含量不同的純化飼料飼喂中華絨螯蟹幼蟹，探討蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)及相關(guān)理化指標(biāo)的影響，確定其對(duì)飼料中蘇氨酸的需求量，為配制營(yíng)養(yǎng)均衡、廉價(jià)高效、低污染的中華絨螯蟹飼料提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1．1 試驗(yàn)用蟹及養(yǎng)殖系統(tǒng)

試驗(yàn)用中華絨螯蟹幼蟹購(gòu)自上海崇明島長(zhǎng)江口中華絨螯蟹養(yǎng)殖基地，屬于長(zhǎng)江系中華絨螯蟹。選取體格健康、附肢完整、規(guī)格一致、初始體重為（0．36±0．00）g的幼蟹360只，隨機(jī)分成6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只幼蟹。養(yǎng)殖試驗(yàn)在室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行，以重復(fù)為單位養(yǎng)殖于長(zhǎng)方體白色硬質(zhì)聚乙烯水族箱，每箱體積300 L，實(shí)際蓄水200 L，缸內(nèi)放置塑料網(wǎng)片和圓形聚氯乙烯（PVC）管作為幼蟹的隱蔽物。試驗(yàn)用水為天然池塘水，不間斷充氣增氧，試驗(yàn)期間水溫為28～ 30℃，pH為7．5～8．5，溶解氧濃度＞5 mg／L，氨氮濃度＜0．15 mg／L，亞硝酸鹽濃度＜0．01 mg／L。

1．2 試驗(yàn)飼料

以酪蛋白、明膠、晶體氨基酸為蛋白質(zhì)源配制基礎(chǔ)飼料，以王樹英等［14］報(bào)道的蟹種肌肉必需氨基酸組成模式補(bǔ)充必需氨基酸，添加的晶體氨基酸利用率以100%計(jì)算［15］。分別在每千克基礎(chǔ)飼料中添加0、4、8、12、16、10 g晶體L－蘇氨酸（購(gòu)至國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純，純度＞98%），實(shí)測(cè)飼料中蘇氨酸含量分別為飼料干物質(zhì)的0．86%、1．24%、1．61%、2．04%、2．42%、2．81%，用谷氨酸平衡氨基酸混合物，配制成6種等氮等能的試驗(yàn)飼料。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1，試驗(yàn)飼料氨基酸組成見表2。

試驗(yàn)飼料制作時(shí)，將所有原料粉碎并通過60目篩，采用逐級(jí)擴(kuò)大法將預(yù)混料等微量成分按比例充分混勻，然后加入魚油、大豆卵磷脂和水?dāng)嚢杌靹?，通過飼料機(jī)（型號(hào)SLX－80，上海亞勵(lì)科技貿(mào)易有限公司）擠壓制成直徑為1．5 mm的長(zhǎng)條，55℃烘干，自然冷卻后破碎成粒徑為1～2 mm的破碎料，置于－20℃冰箱內(nèi)密封保存?zhèn)溆谩?/p>

表1　試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets（DM basis）　%

表2　試驗(yàn)飼料氨基酸組成（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 2 Composition of amino acids in experimental diets（DM basis）　%

1．3 試驗(yàn)管理

試驗(yàn)用幼蟹在馴化1周后開始正式試驗(yàn)。每天飽食投喂2次（08：30和16：30），日投喂量為體重的3%～5%，視攝食情況和幼蟹生長(zhǎng)做適當(dāng)調(diào)整，每天晨飼前1 h采用微流水進(jìn)行換水，每天換水量為養(yǎng)殖水體的1／3，飼養(yǎng)周期為8周。

1．4 樣品采集及分析

試驗(yàn)結(jié)束停食24 h后，以重復(fù)為單位稱重并記錄存活只數(shù)。每箱隨機(jī)取5～7只幼蟹用于體成分分析，每箱另隨機(jī)取3只幼蟹，取肝胰腺于－80℃冰箱保存，用于消化酶活力和非特異性免疫指標(biāo)的測(cè)定。

試驗(yàn)飼料及全蟹水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量分別采用105℃恒重法、凱氏定氮法、索氏抽提法和550℃馬福爐灼燒法進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)飼料氨基酸含量采用酸水解法利用日立L－8900氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定。

酶液蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法，定義為1 mg粗酶液的酶活力單位數(shù)為酶的比活力。本試驗(yàn)測(cè)定的酶活力指標(biāo)均采用比活力。胃蛋白酶活力采用水解蛋白質(zhì)法測(cè)定，定義為每毫克組織蛋白質(zhì)37℃每分鐘分解蛋白質(zhì)生成1 μg氨基酸相當(dāng)于1個(gè)酶活力單位。胰蛋白酶活力采用水解精氨酸乙酯法測(cè)定，定義為在pH 8．0、37℃條件下，每毫克蛋白質(zhì)中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0．003為1個(gè)酶活力單位。淀粉酶活力采用水解淀粉法測(cè)定，定義為每毫克組織中含有的淀粉酶在37℃與底物作用30 min，水解10 mg淀粉為1個(gè)酶活力單位。脂肪酶活力采用水解脂肪酸法測(cè)定，定義為在37℃條件下，每克組織蛋白質(zhì)在反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物為1個(gè)酶活力單位。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力按照黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，定義為每毫升反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為1個(gè)酶活力單位。堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）和酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）活力按照磷酸苯二鈉法測(cè)定，定義為100 mL組織勻漿在37℃下與底物作用15或60 min，產(chǎn)生1 mg酚為1個(gè)金氏單位或1個(gè)酶活力單位。以上指標(biāo)均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，具體操作方法參考試劑盒說明書進(jìn)行。

1．5 生長(zhǎng)性能指標(biāo)計(jì)算公式

增重率（weight gain ratio，WGR，%）＝100×（終末均重－初始均重）／初始均重；特定生長(zhǎng)率（specific growth rate，SGR，%／d）＝100×（ln終末均重－ln初始均重）／試驗(yàn)天數(shù)；

成活率（survival rate，SR，%）＝100×試驗(yàn)結(jié)束時(shí)蟹尾數(shù)／試驗(yàn)開始時(shí)蟹尾數(shù)；飼料系數(shù)（feed conversion ratio，F(xiàn)CR）＝攝食量／（總終末蟹重＋死亡蟹重－總初始蟹重）；

蛋白質(zhì)效率（protein efficiency ratio，PER，%）＝100×蟹體凈增重／（飼料攝入量×飼料蛋白質(zhì)含量）。

1．6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）”表示，采用SPSS 18．0統(tǒng)計(jì)軟件中one?way ANOVA進(jìn)行單因素方差分析，P＜0．05為差異顯著，若有顯著差異再用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。以增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行折線回歸模型分析，確定中華絨螯蟹幼蟹蘇氨酸的需求量。

2　結(jié) 果

2．1 蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響

由表3可以看出，中華絨螯蟹幼蟹的終末體重、增重率與特定生長(zhǎng)率均隨飼料中蘇氨酸含量的升高呈先升高后降低的趨勢(shì)，在飼料中蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的1．61%時(shí)終末體重、增重率與特定生長(zhǎng)率均達(dá)到最大值，且均顯著高于0．86%、1．24%、2．42%和2．81%組（P＜0．05）。同時(shí)，在飼料中蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的1．61%時(shí)飼料系數(shù)最小，蛋白質(zhì)效率最高，但與其他試驗(yàn)組無顯著差異（P＞0．05）。飼料中蘇氨酸含量對(duì)中華絨螯蟹幼蟹的成活率無顯著影響（P＞0．05）。

2．2 蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹體成分的影響

由表4可以看出，飼料中蘇氨酸含量對(duì)中華絨螯蟹幼蟹全蟹水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量均無顯著影響（P＞0．05）。

2．3 蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中消化酶活力的影響

由表5可以看出，中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中胰蛋白酶、胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力均隨飼料中蘇氨酸含量的升高呈先升高后降低的趨勢(shì)，飼料中蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的1．61%時(shí)胰蛋白酶、胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力均達(dá)到最大值，并顯著高于其他各組（P＜0．05）。

表3　蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響Table 3 Effects of Thr on growth performance of juvenile Chinese mitten crab（n＝3）

表4　蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹體成分的影響（濕重基礎(chǔ)）Table 4 Effects of Thr on body composition of juvenile Chinese mitten crab（wet weight basis，n＝3）　%

表5　蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中消化酶活力的影響Table 5 Effects of Thr on digestive enzyme activities in hepatopancreas of juvenile Chinese mitten crab（n＝3）

2．4 蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中非特異性免疫指標(biāo)的影響

由表6可以看出，中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中SOD、AKP活力均隨飼料中蘇氨酸含量的升高呈先升高后降低的趨勢(shì)，在飼料蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的1．61%時(shí)SOD、AKP活力達(dá)到最大值，且該組SOD活力顯著高于其他各組（P＜0．05），AKP活力顯著高于0．86%和2．04%組（P＜0．05）；肝胰腺中ACP活力隨飼料中蘇氨酸含量的升高呈升高趨勢(shì)，在飼料中蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的2．42% 時(shí)ACP活力達(dá)最大值，顯著高于其他各組（P＜0．05）。

表6　蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中非特異性免疫指標(biāo)的影響Table 6 Effects of Thr on nonspecific immune indices in hepatopancreas of juvenile Chinese mitten crab（n＝3）

2．5 中華絨螯蟹幼蟹對(duì)蘇氨酸的需求量

根據(jù)飼料中蘇氨酸含量與中華絨螯蟹幼蟹增重率的關(guān)系（圖1），通過折線回歸模型分析得到方程y＝165．88x＋710．69（R2＝0．996 8）和y＝－48．061x＋1 050．9（R2＝0．954 5），經(jīng)計(jì)算得出中華絨螯蟹幼蟹對(duì)飼料中蘇氨酸的需求量為飼料干物質(zhì)的1．59%（飼料蛋白質(zhì)的3．98%）。

圖1　飼料中蘇氨酸含量與中華絨螯蟹幼蟹增重率的關(guān)系Fig．1 Relationship between dietary Thr content and WGR of juvenile Chinese mitten crab

3　討 論

3．1 蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)通過在純化基礎(chǔ)飼料中添加不同水平的晶體L－蘇氨酸飼養(yǎng)中華絨螯蟹幼蟹8周，發(fā)現(xiàn)蘇氨酸缺乏組（飼料中蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的0．86%）的幼蟹表現(xiàn)出較低生長(zhǎng)速度，隨著飼料中蘇氨酸含量的升高到飼料干物質(zhì)的1．61%，其生長(zhǎng)速度得到了顯著的提高。由此證明，飼料中蘇氨酸含量影響中華絨螯蟹幼蟹的生長(zhǎng)，且中華絨螯蟹幼蟹有利用晶體蘇氨酸的能力。

氨基酸平衡理論指出，必需氨基酸的平衡有助于提高飼料氨基酸的消化、吸收和利用，提高蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和飼料的利用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著飼料中蘇氨酸含量由飼料干物質(zhì)的0．86%升高到1．61%，其增重率隨之升高，飼料系數(shù)隨之降低。這些結(jié)果可能就是氨基酸平衡效應(yīng)的體現(xiàn)，當(dāng)蘇氨酸含量達(dá)到適宜水平時(shí)，增重率達(dá)到最大值，飼料系數(shù)此時(shí)最低。飼料中過量蘇氨酸對(duì)水生動(dòng)物生長(zhǎng)的影響存在明顯的種間差異。在尼羅羅非魚（Oreochromis nilotic? us）［16］、遮目魚（Chanos chanos）［17］、斑點(diǎn)叉尾（Ictalurus punetaus）［5］、美國(guó)紅魚（Sciaenops ocel?latus）［18］、歐洲黑鱸（Dicentrarchus labrax）［19］上的研究結(jié)果顯示飼料中蘇氨酸過量時(shí)對(duì)生長(zhǎng)并無顯著影響。但本試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)飼料中蘇氨酸含量超過中華絨螯蟹幼蟹適宜需求量時(shí)會(huì)抑制其生長(zhǎng)。這與在印度鯉魚（Cirrhinus mrigala）［20］、日本牙鲆（Paralichthys olivaceus）［21］、斑節(jié)對(duì)蝦［3］、凡納濱對(duì)蝦［9］等上的研究結(jié)果一致。關(guān)于飼料中過量蘇氨酸抑制生長(zhǎng)的機(jī)理有多種解釋。Alam等［21］研究指出，蘇氨酸過量抑制生長(zhǎng)可能由氨基酸中毒引起，機(jī)體氨基酸庫(kù)大量?jī)?chǔ)存蘇氨酸或其降解副產(chǎn)物會(huì)促使酶系統(tǒng)加速運(yùn)轉(zhuǎn)，導(dǎo)致氨基酸的大量?jī)?chǔ)存并產(chǎn)生毒性。Shivananda等［22］研究認(rèn)為，飼料氨基酸間的平衡對(duì)魚類氨基酸的吸收有重要作用，過量攝入蘇氨酸會(huì)破壞氨基酸間的平衡，影響魚類吸收和利用其他氨基酸，從而影響其生長(zhǎng)速度，這可能也是過量蘇氨酸抑制生長(zhǎng)的原因之一。

關(guān)于蘇氨酸對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物成活率的影響，不同研究者的結(jié)果也不一致。如在遮目魚［18］和低鹽度下凡納濱對(duì)蝦［10］上的研究發(fā)現(xiàn)蘇氨酸缺乏時(shí)死亡率升高。而對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦［3］、日本對(duì)蝦［11］的研究結(jié)果則顯示其成活率不受飼料中蘇氨酸含量的影響。這可能與試驗(yàn)飼料組成、基礎(chǔ)飼料中蘇氨酸含量、試驗(yàn)動(dòng)物種類以及試驗(yàn)條件等因素有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，中華絨螯蟹幼蟹的成活率不受飼料中蘇氨酸含量的影響，這與斑節(jié)對(duì)蝦［3］、日本對(duì)蝦［11］的研究結(jié)果一致，推測(cè)原因可能是因?yàn)橹腥A絨螯蟹幼蟹對(duì)蘇氨酸具有較寬的耐受范圍，也可能是因?yàn)榛A(chǔ)飼料中蘇氨酸基本滿足了幼蟹的機(jī)體代謝需求。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)中華絨螯蟹幼蟹的體成分不受飼料中蘇氨酸含量的影響，這與在鱸魚（Lateolabrax japonicus）［23］上的研究結(jié)果一致，可能是因?yàn)橹腥A絨螯蟹幼蟹維持體成分穩(wěn)定的能力相對(duì)較強(qiáng)。另外，本試驗(yàn)的飼養(yǎng)周期（56 d）相對(duì)較短，可能在短時(shí)間內(nèi)蘇氨酸含量的變化不能顯著影響到中華絨螯蟹幼蟹的體成分，因此，今后可通過延長(zhǎng)飼養(yǎng)周期以對(duì)體成分進(jìn)行進(jìn)一步研究。

3．2 蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中消化酶活力的影響

飼料質(zhì)量是影響甲殼動(dòng)物消化酶活力的關(guān)鍵因素之一，消化酶活力在一定程度上反映出機(jī)體對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)成分的消化利用程度。當(dāng)攝食不同營(yíng)養(yǎng)成分的飼料時(shí)，甲殼動(dòng)物會(huì)出現(xiàn)消化酶分泌量的差異，以便更好地消化、吸收和利用飼料中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，來適應(yīng)飼料組成的變化［24］。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼料中蘇氨酸含量顯著影響了中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中胰蛋白酶、胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力，均隨飼料中蘇氨酸含量的升高呈先升高后降低的趨勢(shì)，且在飼料蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的1．61%時(shí)達(dá)到最大值。這與在幼建鯉（Cypri?nus carpio var．Jian）［25］、生長(zhǎng)中期草魚（Cteno?pharynodon idellu）［26］、生長(zhǎng)后期草魚［27］上的研究結(jié)果基本一致。機(jī)體能為消化腺提供合適數(shù)量和配比的氨基酸這是消化酶能夠順利合成的關(guān)鍵，當(dāng)機(jī)體所需的氨基酸不足時(shí)，外源補(bǔ)充適量的氨基酸能夠促進(jìn)消化酶的合成和分泌。這可能是中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活力隨飼料中蘇氨酸含量的升高先出現(xiàn)升高的原因。但當(dāng)飼料中蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的2．04%～2．81%時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活力逐漸降低。這可能是在蘇氨酸過量的情況下，中華絨螯蟹幼蟹對(duì)飼料中氨基酸比例不平衡表現(xiàn)出不適應(yīng)性，即過量的蘇氨酸抑制了幼蟹肝胰腺消化酶的活力，這也可能是幼蟹生長(zhǎng)速度降低的原因之一。

3．3 蘇氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中非特異性免疫指標(biāo)的影響

SOD是機(jī)體關(guān)鍵的抗氧化酶之一，是超氧自由基的天然消除劑，可以清除體內(nèi)多余的自由基，使自由基的形成與消除處于一種動(dòng)態(tài)平衡中，從而免除其對(duì)生物分子的損傷等。已有研究發(fā)現(xiàn)，SOD的活力與生物的免疫水平呈密切相關(guān)［28］。因此，SOD可作為機(jī)體非特異性免疫指標(biāo)，來評(píng)判免疫刺激劑對(duì)機(jī)體非特異性免疫力的影響［29－31］。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中SOD活力隨飼料中蘇氨酸含量的升高呈先升高后降低的趨勢(shì)，且在蘇氨酸含量為飼料干物質(zhì)的1．61% 時(shí)SOD活力達(dá)到最大值，這表明飼料中適量的蘇氨酸可增強(qiáng)中華絨螯蟹幼蟹的抗氧化能力，保護(hù)機(jī)體免遭過氧化物的損傷。Wellen等［32］在人上的研究發(fā)現(xiàn)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入過量會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激。本試驗(yàn)中，飼料中蘇氨酸含量超過飼料干物質(zhì)的1．61%后，中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中SOD活力出現(xiàn)降低，因此推測(cè)可能是過量蘇氧酸誘導(dǎo)了氧化損傷，致使SOD活力降低。

AKP是一種重要的代謝調(diào)控酶，可通過改變病原體的表面結(jié)構(gòu)而增強(qiáng)被侵襲機(jī)體對(duì)病原體的識(shí)別和吞噬能力［33］，有助于提高幼蟹的抗病力。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼料中適量的蘇氨酸可以提高中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中AKP活力，促進(jìn)幼蟹細(xì)胞中的物質(zhì)代謝，從而促進(jìn)幼蟹生長(zhǎng)，也間接地提高了其非特異性免疫能力。ACP是巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶，與機(jī)體物質(zhì)代謝關(guān)系密切。它通過催化磷蛋白中磷酯鍵的水解，直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝［34］，在體內(nèi)細(xì)胞調(diào)節(jié)過程中起重要作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中適量的蘇氨酸可以提高肝胰腺中ACP活力，這有利于其機(jī)體細(xì)胞中的物質(zhì)代謝，促進(jìn)正常生長(zhǎng)，并提高其非特異性免疫能力。

由此可見，飼料中適量的蘇氨酸在促進(jìn)中華絨螯蟹幼蟹健康生長(zhǎng)的同時(shí)，也可在一定程度上有效地提高其非特異性免疫功能。

4　結(jié) 論

①飼料中適量的蘇氨酸可以促進(jìn)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)，提高其消化能力和非特異性免疫功能。

②以增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過折線回歸模型得到中華絨螯蟹幼蟹對(duì)飼料中蘇氨酸的需求量為飼料干物質(zhì)的1．59%（飼料蛋白質(zhì)的3．98%）。

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（責(zé)任編輯 菅景穎）

Threonine Requirement of Juvenile Chinese Mitten Crab（Eriocheir sinensis）

WANG Wei1YE Jinyun1，2?YANG Xia2ZHANG Yixiang2LIU Pei2，3
（1．School of Laboratory Medicine and Life Science，Wenzhou Medical University，Wenzhou 325035，China；2．Zhejiang Provincial Key Laboratory of Aquatic Resources Conservation and Development，Key Laboratory of Aquatic Animal Genetic Breeding＆Nutrition of Chinese Academy of Fishery Science，Huzhou University，Huzhou 313000，China；3．Dalian Ocean University，Dalian 116023，China）

?Corresponding author，professor，E?mail：ziff2006＠163．com

Abstract：A 56?day growth trial was conducted to determine the threonine requirement of juvenile Chinese mit?ten crab（Eriocheir sinensis）．Six isonitrogenous and isoenergetic purified diets were formulated using casein，gelatin and crystalline amino acids as protein sources，and the threonine content in those diets was 0．86%（con?trol，without extra threonine），1．24%，1．61%，2．04%，2．42%and 2．81%of dietary dry matter by adding crystalline L?threonine，respectively．A total of 360 juvenile Chinese mitten crab with the initial body weight of （0．36±0．00）g were chosen and randomly distributed into 6 groups with 3 replicates per group and 20 crabs per replicate．The results showed that with the increase of dietary threonine content，the weight gain rate （WGR），specific growth rate（SGR），and the activities of digestive enzymes（pepsin，trypsin，lipase and amylase）were firstly increased and then decreased，which reached their peaks in the 1．61%group，and the WGR and SGR in the 1．61%group were significantly higher than those in the 0．86%，1．24%，2．42%and 2．81%groups（P＜0．05）and the activities of digestive enzymes in the 1．61%group were significantly higher than those in the other groups（P＜0．05）．Whereas，the feed conversion ratio（FCR）reached the lowest value in the 1．61%group，and the protein efficiency ratio（PER）reached the highest value in the same group．Diet?ary threonine content had no significant effects on survival rate（SR）and body composition（P＞0．05）．The activities of superoxide dismutase（SOD），alkaline phosphatase（AKP）and acid phosphatase（ACP）in hepa?topancreas were firstly increased and then decreased，which reached their peaks in the 1．61%，1．61%and 2．42%groups，respectively．Using WGR as the evaluation index，dietary threonine requirement of juvenile Chinese mitten crab is estimated to be 1．59%of dietary dry matter（3．98%of dietary protein）by broken?line regress model analysis．［Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（2）：476?484］

Key words：juvenile Chinese mitten crab；threonine；requirement；digestive enzymes；non?specific immune indices

通信作者：?葉金云，研究員，博士生導(dǎo)師，E?mail：ziff2006＠163．com

作者簡(jiǎn)介：王 偉（1989—），男，安徽阜陽人，碩士研究生，從事水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料研究。E?mail：tiexuedaqinww＠126．com

基金項(xiàng)目：公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201003020）；浙江省淡水養(yǎng)殖重點(diǎn)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（2010R50026?17）

收稿日期：2014－08－08

doi：10．3969／j．issn．1006?267x．2015．02．018

文章編號(hào)：1006?267X（2015）02?0476?09

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類號(hào)：S963．73＋1