白細(xì)胞分化抗原147、血管內(nèi)皮生長因子蛋白表達(dá)與肺腺癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

楊繼嵐 胡鳳娣 謝琳

[摘要] 目的 探討白細(xì)胞分化抗原147（CD147）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）蛋白表達(dá)與肺腺癌患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 方法 選取昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院2015年10月～2018年10月肺腺癌患者78例，取其肺腺癌組織與相應(yīng)癌旁正常肺組織標(biāo)本，以免疫組織化學(xué)SP法檢測患者肺腺癌組織和相應(yīng)癌旁正常肺組織標(biāo)本中CD147、VEGF蛋白表達(dá)，并分析CD147、VEGF蛋白表達(dá)和患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期之間關(guān)系。 結(jié)果 肺腺癌組織中CD147、VEGF蛋白陽性表達(dá)率均高于癌旁正常肺組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌組織中CD147、VEGF蛋白陽性表達(dá)率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期Ⅰ～Ⅱ期患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。 結(jié)論 肺腺癌組織中CD147、VEGF蛋白均呈高表達(dá)，且兩者表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān)，可將其作為肺腺癌診斷、惡性程度評(píng)估的重要指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 肺腺癌;白細(xì)胞分化抗原147;血管內(nèi)皮生長因子;臨床分期;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

[中圖分類號(hào)] R736.4? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）08（b）-0127-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the expression of leukocyte differentiation antigen 147 （CD147） and vascular endothelial growth factor （VEGF） protein and clinical stage， lymph node metastasis in patients with lung adenocarcinoma. Methods A total of 78 patients with lung adenocarcinoma from October 2015 to October 2018 in the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University were enrolled. The lung adenocarcinoma tissues and corresponding normal lung tissues were taken and the lung glands were detected by immunohistochemical SP method. The expressions of CD147 and VEGF protein in cancer tissues and corresponding normal lung tissues were analyzed， and the relationship between CD147， VEGF protein expression and lymph node metastasis and clinical stage was analyzed. Results The positive expression rates of CD147 and VEGF protein in lung adenocarcinoma tissues were higher than those in corresponding normal lung tissues， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The positive expression rates of CD147 and VEGF protein in lung adenocarcinoma tissues with lymph node metastasis and clinical stage Ⅲ-Ⅳ were higher than those in non-lymph node metastasis and clinical stage Ⅰ-Ⅱ patients， the differences were statistically significant （all P < 0.05）. Conclusion The expressions of CD147 and VEGF in lung adenocarcinoma are highly expressed， and their expression levels are related to lymph node metastasis and clinical stage. They can be used as an important index for the diagnosis and malignant degree evaluation of lung adenocarcinoma.

[Key words] Lung adenocarcinoma; Leukocyte differentiation antigen 147; Vascular endothelial growth factor; Clinical stage; Lymph node metastasis

近年來，隨大氣污染情況與人口老齡化加劇、主動(dòng)與被動(dòng)吸煙人數(shù)增加等因素影響，肺癌發(fā)病率逐漸增高，每年肺癌發(fā)病人數(shù)占據(jù)全部癌癥發(fā)病總?cè)藬?shù)的13%左右，且病死人數(shù)約占全部癌癥病死總?cè)藬?shù)的18%，居各類型惡性腫瘤之首[1-3]。臨床研究[4-5]報(bào)道，肺癌起病較隱匿，75%左右肺癌患者于疾病確診時(shí)已進(jìn)展中晚期，存在轉(zhuǎn)移證據(jù)，致使治療難度及患者病死率提升。故探尋一種肺癌早期診斷及病情評(píng)價(jià)的靈敏方法對(duì)指導(dǎo)臨床采取及時(shí)準(zhǔn)確治療、延長患者生存周期均有重要意義。白細(xì)胞分化抗原147（CD147）為免疫球蛋白超家族中的一員，可刺激腫瘤附近間質(zhì)纖維母細(xì)胞分泌大量基質(zhì)金屬蛋白酶，參與細(xì)胞外基質(zhì)降解，與腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲密切相關(guān)[6]。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）為一種正性血管生成調(diào)節(jié)因子，能促進(jìn)腫瘤及組織新生血管生成，在腫瘤發(fā)生、進(jìn)展、侵襲中起著重要作用[7-8]。此外，肺腺癌為肺癌重要類型之一，其在肺癌中占據(jù)著較大比例。本研究以免疫組織化學(xué)SP法測定患者肺腺癌組織和相應(yīng)癌旁正常肺組織標(biāo)本中CD147、VEGF蛋白表達(dá)，旨在分析其表達(dá)和患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)之間關(guān)系，為臨床早期診斷、病情評(píng)估和靶向治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年10月～2018年10月昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院（以下簡稱“我院”）收治的肺腺癌患者78例，其中男46例，女32例;年齡35～79歲，平均（62.13±7.09）歲;腫瘤大體類型：周圍型50例，中央型28例;腫瘤大?。?3 cm 41例，≤3 cm 37例;分化程度：低分化24例，高、中分化54例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例;臨床分期：Ⅲ～Ⅳ期40例，Ⅰ～Ⅱ期38例。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)? ①符合《內(nèi)科學(xué)》[9]中肺癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)手術(shù)病理組織檢查明確為肺腺癌，并取距原發(fā)腫瘤邊緣>5 cm的癌旁正常肺組織標(biāo)本（通過HE染色確認(rèn)無腫瘤浸潤）;②術(shù)前未采取放化療及免疫治療;③臨床和病理資料完整;④患者對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)? ①合并其他類型惡性腫瘤者;②合并精神系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病者;③肝、腎、心等臟器存在器質(zhì)性病變者;④妊娠、哺乳期女性。

1.3 方法

所有標(biāo)本均采用多聚甲醛（4%）固定，采取石蠟包埋，制作4 μm厚度切片。

1.3.1 檢測方法? 以免疫組織化學(xué)SP法檢測患者肺腺癌組織和相應(yīng)癌旁正常肺組織標(biāo)本中CD147（檢測試劑盒購于北京中山金橋生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：ZA-4055）、VEGF（檢測試劑盒購于邁新生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：18080824366）蛋白表達(dá)，有關(guān)操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書施行，均由同一組醫(yī)師執(zhí)行操作，以已知VEGF、CD147陽性肺腺癌組織與磷酸鹽緩沖液替代一抗作為陽性及陰性對(duì)照。

1.3.2 結(jié)果判定? VEGF陽性信號(hào)定位于細(xì)胞漿內(nèi)，CD147陽性信號(hào)定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜;依據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞染色強(qiáng)度應(yīng)用半定量積分法施行結(jié)果判斷，每張切片取高倍視野5個(gè)，觀察不低于500個(gè)細(xì)胞，按照視野下陽性細(xì)胞所占百分比施行評(píng)分：陽性細(xì)胞數(shù)>75%計(jì)4分，>50%～75%計(jì)3分，>25%～50%計(jì)2分，>5%～25%計(jì)1分，≤5%計(jì)0分;并按照細(xì)胞染色強(qiáng)度施行評(píng)分：呈棕褐色計(jì)3分，棕黃色計(jì)2分，淡黃色為1分，未著色計(jì)0分，而后將兩項(xiàng)積分相乘，最終得分5～12分判斷為陽性，0～4分判斷為陰性[10]。

1.4 觀察指標(biāo)

①比較患者肺腺癌組織和相應(yīng)癌旁正常肺組織標(biāo)本中CD147、VEGF蛋白表達(dá);②分析CD147、VEGF蛋白表達(dá)和患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期之間的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者肺腺癌組織和相應(yīng)癌旁正常肺組織標(biāo)本中CD147、VEGF蛋白表達(dá)比較

肺腺癌組織中CD147、VEGF蛋白陽性表達(dá)率均高于癌旁正常肺組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。見表1。

2.2 CD147、VEGF蛋白表達(dá)與患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌組織中CD147、VEGF蛋白陽性表達(dá)率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。見表2。

3 討論

肺腺癌屬肺癌重要類型之一，病因與遺傳、電離輻射、致癌物質(zhì)長期接觸史、肺部慢性感染史、吸煙、大氣污染等多種因素有一定相關(guān)性，疾病早期檢出率低，治療難度大，易產(chǎn)生轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)期生存率較低[11-13]。探尋一種疾病早期診斷和病情評(píng)價(jià)方法一直為臨床研究重點(diǎn)。

臨床研究[14]發(fā)現(xiàn)，腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移為多種因素參與的一個(gè)復(fù)雜過程，包含原發(fā)腫瘤浸潤、細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生降解、腫瘤新生血管形成、腫瘤細(xì)胞向靶組織轉(zhuǎn)移等環(huán)節(jié)。CD147是免疫球蛋白超家族成員之一，相對(duì)分子量為58 kDa左右，可調(diào)控單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性度、參與生殖及機(jī)體免疫應(yīng)答等生理過程[15]。近年來，有研究[16]報(bào)道，CD147可誘導(dǎo)腫瘤間質(zhì)纖維母細(xì)胞大量分泌基質(zhì)金屬蛋白酶，進(jìn)而加速細(xì)胞外基質(zhì)成分降解，為腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移提供有利條件。CD147還能直接上調(diào)腫瘤自身VEGF抑或間接經(jīng)過基質(zhì)金屬蛋白酶上調(diào)腫瘤細(xì)胞和附近基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)VEGF表達(dá)水平，進(jìn)而加速新生血管形成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長、增殖[17]。同時(shí)，相關(guān)研究[18]發(fā)現(xiàn)，在CD147表達(dá)水平增高時(shí)，可增強(qiáng)脫離原發(fā)病灶腫瘤細(xì)胞同間質(zhì)、脈管之間黏附作用，使腫瘤細(xì)胞更易于散播。覃玲艷等[19]報(bào)道，CD147可經(jīng)由轉(zhuǎn)化因子通路途徑加速上皮及間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促使腫瘤細(xì)胞易于侵入到間質(zhì)中，致使腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能增高。既往研究[20]發(fā)現(xiàn)，CD147在子宮內(nèi)膜癌、結(jié)直腸癌、肝癌、前列腺癌等多種腫瘤中均呈高表達(dá)，其表達(dá)水平和腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移有一定相關(guān)性。但關(guān)于其在肺腺癌中的表達(dá)情況相關(guān)報(bào)道尚較少。本研究顯示，CD147蛋白在肺腺癌組織中陽性表達(dá)率高于癌旁正常肺組織，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌組織中CD147蛋白陽性表達(dá)率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期患者（均P < 0.05）。提示CD147蛋白于肺腺癌組織中呈高表達(dá)，且其表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期密切相關(guān)。

VEGF為目前臨床已知作用最強(qiáng)血管內(nèi)皮生長因子之一，可對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生作用，加速血管內(nèi)皮細(xì)胞大量增殖，促進(jìn)新生血管形成，進(jìn)而為腫瘤增殖及轉(zhuǎn)移提供有利微環(huán)境[21-23]。同時(shí)，VEGF通過和其受體相結(jié)合，還可促進(jìn)血管基底膜產(chǎn)生降解，提升血管通透性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞脫落及轉(zhuǎn)移[24]。相關(guān)研究[25-27]指出，正常組織中VEGF表達(dá)水平較低，而在惡性腫瘤患者癌組織及血清中，VEGF表達(dá)水平可顯著增高，且增高幅度與腫瘤惡性程度有一定相關(guān)性。張冉等[28]研究顯示，肺癌組織中VEGF陽性表達(dá)率顯著高于正常組織。本研究肺腺癌組織中VEGF蛋白陽性表達(dá)率高于癌旁正常肺組織，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌組織中VEGF蛋白陽性表達(dá)率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期患者（均P < 0.05）。提示肺腺癌組織中VEGF蛋白呈高表達(dá)，且其表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期密切相關(guān)。

綜上，CD147、VEGF蛋白在肺腺癌組織中均呈現(xiàn)高表達(dá)，且其表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期具有密切關(guān)系，可將其作為肺腺癌診斷、惡性程度評(píng)估的重要指標(biāo)，亦提示可通過阻斷兩者信號(hào)傳導(dǎo)通過作為肺腺癌治療新靶點(diǎn)。

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（收稿日期：2018-12-18? 本文編輯：王? ?蕾）