柬埔寨柯拉斯那沉香的化學(xué)成分研究

夏錄錄 李薇 梅文莉 楊理

摘 要：該文采用 ODS、硅膠、Sephadex LH-20 等柱色譜技術(shù)，對柬埔寨野生柯拉斯那沉香（Aquilaria crassna）進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：從柬埔寨柯拉斯那所產(chǎn)沉香的乙醇提取物中進(jìn)行分離共得到了10個(gè)化合物，包括一對對映異構(gòu)體（9a/9b）。經(jīng)波譜解析分別鑒定為6-甲氧基-2- [2-（3-羥基-4-甲氧基苯）乙基]色酮（1）、6-甲氧基-2- [2-（3-甲氧基-4-羥基苯）乙基]色酮（2）、6，7-二甲氧基-2-（2-苯乙基）色酮（3）、6-羥基-2-（2-苯乙基）色酮（4）、6-羥基-2- [2-（4-甲氧基苯）乙基]色酮（5）、8-氯-6-羥基-2- [2-（3-羥基-4-甲氧基苯）乙基]色酮（6）、8-氯-6-羥基-2- [2-（4-甲氧基苯）乙基]色酮（7）、oxidoagarochromone B（8）、4′-demethoxyaqusisnenoned（9）。其中，化合物6、7和9均為首次從柯拉斯那沉香中分離得到?；钚詼y試結(jié)果顯示，化合物1和2對乙酰膽堿脂酶具有一定的抑制活性，化合物2對人慢性髓原白血病細(xì)胞K562具有較弱的抑制作用。

關(guān)鍵詞：柬埔寨， 沉香， 柯拉斯那， 化學(xué)成分， 乙酰膽堿脂酶抑制活性， 細(xì)胞毒活性

中圖分類號：Q946.91， R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1000-3142（2019）04-0540-08

Abstract：Ten compounds， including one pair of enantiomers （9a/9b）， were isolated from the ethanol extract of agarwood originating from Aquilaria crassna in Cambodia by comprehensive chromatographic techniques including ODS， silica gel and Sephadex LH-20. On the basis of spectroscopicdata， they were identified as 6-methoxy-2- [2-（3-hydroxy-4-methoxyphenyl） ethyl] chromone （1）， 6-methoxy-2- [2-（3-methoxy-4-hydroxyphenyl） ethyl] chromone （2）， 6，7-dimethoxy-2-（2-phenylethyl） chromone （3）， 6-hydroxy-2-（2-phenylethyl） chromone （4）， 6-hydroxy-2- [2-（4-methoxyphenyl） ethyl ] chromone（5）， 8-chloro-6-hydroxy-2- [2- （3-hydroxy-4-methoxyphenyl） ethyl]chromone （6）， 8-chloro-6-hydroxy-2- [2- （4-methoxyphenyl） ethyl] chromone （7）， oxidoagarochromone B （8）， 4′-demethoxyaqusisnenoned （9）. Compounds 6， 7 and 9 were isolated from agarwood of A. crassna for the first time. Among those， compounds 1 and 2 showed inhibitory activities against acetylcholinesterase. Compound 2 had weak inhibitory effect on K562 cell lines.

Key words：Cambodia， agarwood， Aquilaria crassna， chemical constituents， acetylcholinesterase inhibitory activity， cytotoxic activity

沉香為瑞香科（Thymelaeaceae）沉香屬（Aquilaria）或擬沉香屬（Gyrinops）植物含有樹脂的干燥芯材（中國藥典委員會，2015）。沉香是傳統(tǒng)的名貴中藥和香料，其味辛、苦，性微溫，具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘等功效，主要用于治療胸腹脹悶疼痛、胃寒嘔吐呃逆、胃虛氣逆喘急等（中國藥典委員會，2015）。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，沉香具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、細(xì)胞毒、抑菌、降糖、抗抑郁等藥理作用（戴好富，2017;楊洋等，2016;康科星等，2017）。目前報(bào)道的沉香屬植物約有23種，主要分布于中國、泰國、印度、緬甸、老撾、柬埔寨、馬來西亞、印度尼西亞等東南亞國家（戴好富和梅文莉，2015）。國內(nèi)外學(xué)者對沉香的化學(xué)成分研究始于20世紀(jì)50年代，目前已鑒定出了300多個(gè)化學(xué)成分，主要是倍半萜類和2-（2-苯乙基）色酮類化合物（Chen et al.， 2012;戴好富，2017;Naef，2015;邵杭等，2015;Shao et al.， 2016;向盼等，2017;Xiang et al.， 2017）。

柯拉斯那沉香樹（A. crassna）主要分布于柬埔寨、泰國、老撾、越南等國家（戴好富和梅文莉，2015）。目前關(guān)于柯拉斯那沉香的化學(xué)成分和生物活性研究報(bào)道較少，本課題組前期對產(chǎn)自老撾的柯拉斯那沉香進(jìn)行了研究，報(bào)道了少量倍半萜類和2-（2-苯乙基）色酮類化合物，部分化合物具有一定的乙酰膽堿脂酶抑制活性和降血糖活性（康科星等，2017;王紅妮等，2016;楊洋等，2016;Yang et al.， 2017）。本研究選用柬埔寨野生柯拉斯那沉香為材料，從其乙醇提取物中分離鑒定了10個(gè)2-（2-苯乙基）色酮類化合物（圖1），其中化合物6、7和9均為首次從柯拉斯那沉香中分離得到。初步揭示了柬埔寨柯拉斯那沉香的化學(xué)成分，為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料

沉香樣品于2017年11月購于柬埔寨金邊，經(jīng)中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所王軍博士鑒定其基源植物為柯拉斯那（Aquilaria crassna），標(biāo)本編號為（JPZ20171101），保存于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所。

1.2 儀器和試劑

儀器：柱層析硅膠G（200～300目，60～80目）（青島海洋化工廠）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國 Heidolph Laborota）;Sephadex LH-20（德國Merck公司）;ODS（20～45

SymbolmA@m）（日本 Fuji公司）;高效液相色譜儀（Agilent 1260）（美國安捷倫科技有限公司）;色譜柱（C18，250 mm×4.6 mm，ID）（日本 Nacalai Tesque公司）;Rudolph Autopol III polarimeter（美國 Rudolph Research Analytical）;半制備高效液相色譜儀（SUMMIT P680A）（美國dionex公司）;半制備色譜柱（C18，250 mm×10.0 mm，ID）（日本 COSMOSIL公司）;ELX-800酶標(biāo)儀（美國寶特公司）;Bruker AV-500型超導(dǎo)核磁共振波譜儀，TMS為內(nèi)標(biāo)。

試劑：乙酰膽堿酯酶、碘化硫代乙酰膽堿、二硫代二硝基苯甲酸（DNTB）、他克林（美國 Sigma 公司）;人慢性髓原白血病細(xì)胞株K562（中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫）。

2 提取與分離

將干燥的柬埔寨柯拉斯那沉香樣品（928.0 g）用95% 乙醇加熱回流提取3次（每次3 h，每次加入乙醇5 L）減壓濃縮，得乙醇浸膏375.2 g。用水將乙醇提取物分散形成懸濁液，用石油醚進(jìn)行萃取，得到浸膏440.0 mg，剩余部分經(jīng)減壓柱色譜，以氯仿-甲醇（1∶0～0∶1）梯度洗脫，得到20個(gè)流份（Fr.1～Fr.20）。

Fr.9 （6.9 g） 經(jīng)Sephadex LH-20（石油醚∶氯仿∶甲醇 = 2∶1∶1）洗脫，得到3個(gè)流份（Fr.9-1～Fr.9-3）。Fr.9-3（5.0 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯（50∶1）洗脫，得到9個(gè)流份（Fr.9-3-1～Fr.9-3-9）。Fr.9-3-6（306.5 mg）經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-氯仿-丙酮（100∶10∶1）洗脫，得到14個(gè)流份（Fr.9-3-6-1～Fr.9-3-6-14）。Fr.9-3-6-14（41.0 mg）通過半制備高效液相色譜儀（C18柱，35%乙腈水，流速4 mL·min-1，檢測波長244 nm）洗脫，得到化合物 8（4.5 mg，保留時(shí)間12.8 min）。

Fr.12經(jīng)ODS柱色譜，以甲醇-水（3∶7～1∶0）梯度洗脫，得到12個(gè)流份（Fr.12-1～Fr.12-12）。Fr.12-7（1.5 g）析出部分白色固體，依次用石油醚、氯仿、丙酮、甲醇清洗得白色固體172.0 mg，再經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇（200∶1～0∶1）梯度洗脫，得到4個(gè)流份（Fr.12-7-1～Fr.12-7-4）。Fr.12-7-4（42.0 mg）通過半制備高效液相色譜儀（C18柱，65%甲醇水，流速4 mL·min-1，檢測波長222 nm）洗脫，得到化合物 6（5.9 mg，保留時(shí)間11.0 min）。Fr.12-7-2（29.4 mg）通過半制備高效液相色譜儀（C18柱，32%乙腈水，流速4 mL·min-1，檢測波長242 nm）洗脫，得到化合物5（4.0 mg，保留時(shí)間41.7 min）和化合物 4（4.4 mg，保留時(shí)間47.2 min）。Fr.12-10（1.9 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇為洗脫劑梯度洗脫，得到5個(gè)流份（Fr.12-10-1～Fr.12-10-5）。Fr.12-10-1（552.7 mg）經(jīng)ODS，以甲醇-水（3∶7～1∶0） 梯度洗脫，得到7個(gè)流份（Fr.12-10-1-1～Fr.12-10-1-7）。Fr.12-10-1-3（139.4 mg）通過半制備高效液相色譜儀（C18柱，32%乙腈水，流速4 mL·min-1，檢測波長222 nm）洗脫，得到4個(gè)流份（Fr.12-10-1-3-1～Fr.12-10-1-3-4）。Fr.12-10-1-3-3（19.0 mg）通過半制備高效液相色譜儀（C18柱，32%乙腈水，流速4 mL·min-1，檢測波長222 nm）洗脫，得到化合物 7（1.9 mg，保留時(shí)間21.2 min）。Fr.12-10-1-6（36.3 mg）通過半制備高效液相色譜儀（C18柱，45%乙腈水，流速4 mL·min-1，檢測波長244 nm）洗脫，得到化合物9（7.0 mg，保留時(shí)間12.8 min）。

石油醚萃取物（440.0 mg）經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）得到3個(gè)流份（Fr.21～Fr.23）。Fr.22（321.2 mg）經(jīng)ODS（甲醇-水，3∶7～1∶0）梯度洗脫，得到6個(gè)流份（Fr.22-1～Fr.22-6）。Fr.22-5（90.8 mg）經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（80∶1）洗脫，得到4個(gè)流份（Fr.22-5-1～Fr.22-5-4）。Fr.22-5-4（20.0 mg）經(jīng)半制備高效液相色譜儀（C18柱，60%甲醇水，流速4 mL·min-1，檢測波長198 nm）洗脫，得到化合物1（1.5 mg，保留時(shí)間11.5 min）和化合物 2（1.7 mg，保留時(shí)間13.3 min）。Fr.22-5-3（15.0 mg）通過半制備高效液相色譜儀（C18柱，58%甲醇水，流速4 mL·min-1，檢測波長232 nm）洗脫，得到化合物 3（1.1 mg，保留時(shí)間21.6 min）。

5 討論

迄今為止，關(guān)于柬埔寨所產(chǎn)沉香化學(xué)成分研究的文獻(xiàn)報(bào)道僅有一篇，且只得到了幾個(gè)簡單的2-（2-苯乙基）色酮和倍半萜類化合物（Alkhathlan & Al-Hazimi，2005）。本研究采用多種色譜技術(shù)，從柬埔寨柯拉斯那沉香乙醇提取物中分離得到10個(gè)2-（2-苯乙基）色酮類化合物， 其中， 化合物6、7和9為首次從柯拉斯那沉香中分離得到，豐富了柬埔寨所產(chǎn)沉香的化學(xué)成分。目前，從沉香中分離鑒定出的含氯取代的2-（2-苯乙基）色酮和2-（2-苯乙基）色酮二聚體數(shù)量較少（Yagura et al.， 2003;Liao et al.， 2016;Gao et al.， 2012;Wu et al.， 2012;戴好富，2017;Huo et al.， 2018;Xiang et al.， 2017;Yang et al.， 2017）。本研究得到了兩個(gè)含氯取代的2-（2-苯乙基）色酮和兩個(gè)2-（2-苯乙基）色酮二聚體：8-氯-6-羥基-2- [2-（3-羥基-4-甲氧基苯）乙基]色酮（6）、8-氯-6-羥基-2- [2-（4-甲氧基苯）乙基]色酮（7）和4′-demethoxyaqusisnenoned（9），為研究不同產(chǎn)地沉香的化學(xué)成分差異提供了一定依據(jù)。本研究活性測試結(jié)果顯示，化合物1和2對乙酰膽堿脂酶具有一定的抑制活性，化合物2對人慢性髓原白血病細(xì)胞具有較弱的抑制活性，為柬埔寨柯拉斯那沉香的進(jìn)一步研究和開發(fā)利用提供了一定的理論依據(jù)。

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