宮頸細(xì)胞學(xué)液基薄層制片與傳統(tǒng)宮頸涂片巴氏染色的制片效果對比分析

摘要：目的探討宮頸涂片巴氏染色和液基薄層細(xì)胞檢測（TCT）制片效果。方法分別對2013年至2015年本院 1000例婦科傳統(tǒng)宮頸涂片和2014年至2016年本院1000例液基薄層檢測標(biāo)本進(jìn)行了回顧性分析、對比，比較了2種方法的制片效果和細(xì)胞形態(tài)及其影響因素。結(jié)果本研究所有研究對象中， TCT 細(xì)胞學(xué)的宮頸癌檢出陽性率為 9.90%（99/1000），傳統(tǒng)巴氏染色法的檢測陽性率為 6.50%（65/1000），兩種檢測方法的檢出陽性率之間的差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論液基薄層細(xì)胞檢測技術(shù)（TCT）制片效果優(yōu)于傳統(tǒng)宮頸涂片巴氏染色，明顯提高檢測準(zhǔn)確率。

關(guān)鍵詞：宮頸細(xì)胞液基薄層細(xì)胞檢測;宮頸涂片巴氏染色;制片效果對比，分析

閆秀英（1975年），女，漢族，甘肅蘭州人，大學(xué)本科，病理學(xué)主管技師，主要從事病理學(xué)技術(shù)方面的工作，擅長免疫組織化學(xué)染色和分子病理學(xué)技術(shù)。

宮頸癌在目前全球女性最常見的惡性腫瘤中位于第二，嚴(yán)重危害婦女的身體健康;發(fā)展中國家及不發(fā)達(dá)地區(qū)宮頸癌的患病率及死亡率均高于發(fā)達(dá)國家及地區(qū);發(fā)展中國家每年宮頸癌新發(fā)病例數(shù)約占世界每年宮頸癌新發(fā)病例數(shù)的80%[1-3];我國宮頸癌的患病率約占世界宮頸癌患病率及死亡率的1/3[4]。宮頸癌的死亡率僅次于乳腺癌，預(yù)后較差。宮頸癌是能夠早期預(yù)防、早期診斷、早期治愈的，因此對于宮頸的癌前病變進(jìn)行早期篩查、早期診斷和早期治療是提高宮頸癌生存率和治愈率的主要方法。最基本、最簡單的方法是采用傳統(tǒng)的宮頸涂片巴氏染色檢測技術(shù)，目前較發(fā)達(dá)地區(qū)多采用宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測（TCT）進(jìn)行對宮頸的癌前病變以及宮頸癌的篩查。

液基薄層制片（ Thin-Cytologic Test，簡稱 TCT） 是近年應(yīng)用于臨床細(xì)胞病理學(xué)診斷的一種新技術(shù)，從根本上解決了常規(guī)脫落細(xì)胞制片技術(shù)難題，如假陰性率高、涂片質(zhì)量差和丟失細(xì)胞率高等，為脫落細(xì)胞學(xué)診斷做出了重大貢獻(xiàn)。TCT 可全自動制備均勻的薄層標(biāo)本，采用機(jī)械、氣動和流體動力學(xué)原理，大大減少了影響閱片的血液、黏液和炎性細(xì)胞[5]。我們分別對2013年至2015年本院 1000例婦科傳統(tǒng)宮頸涂片和2014年至2016年本院1000例液基薄層檢測標(biāo)本進(jìn)行了回顧性分析、對比，比較了2種方法的制片效果和細(xì)胞形態(tài)及其影響因素。

1材料與方法

1.1材料：

由蘭州市第一人民醫(yī)院婦科門診、住院部及體檢中心提供宮頸涂片和液基細(xì)胞保存液處理過的標(biāo)本瓶，所有標(biāo)本均是新鮮采集及時送檢。細(xì)胞保存液、細(xì)胞提取液、標(biāo)本收集瓶、一次性使用宮頸采樣拭子刷等由泰普生物科學(xué)（中國）有限公司提供。拭子刷A2型號，由刷桿、套管和刷頭（包括刷毛部分和連接部分）組成;刷桿和套管由聚丙烯（PP）制成，刷頭由聚乙烯（PE）制成。

1.2方法：

1.2.1傳統(tǒng)的宮頸涂片

傳統(tǒng)宮頸涂片是由婦科醫(yī)生采用婦科木制刮板刮取宮頸及宮頸管內(nèi)的上皮細(xì)胞樣品，均勻地涂在玻片上，隨即送檢病理科，95%的酒精“帶濕固定法”固定20分鐘，巴氏染色法染色，無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察結(jié)果。

1.2.2液基薄層細(xì)胞檢測（thinprep cytologic test），簡稱TCT

由婦科醫(yī)生用一次性標(biāo)本采集刷采集宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本：用大拇指與食指捏住刷柄，將采集刷尖伸入宮頸口內(nèi)朝順時針方向旋轉(zhuǎn)3-5周，抽出采集刷，卸下刷頭立即放入裝有保存液的標(biāo)本瓶，輕輕搖晃、漂洗，以使刷頭上的細(xì)胞全部混入保存液中，送檢病理科。我科接受標(biāo)本后先在標(biāo)本瓶上編號，然后將標(biāo)本瓶震蕩混勻，使刷頭上的細(xì)胞完全脫落到標(biāo)本瓶保存液中。用一次性網(wǎng)管通過過濾膜進(jìn)入過濾器（過濾膜具有3萬—5萬個小孔，濾膜孔直徑為5微米），將標(biāo)本瓶中的標(biāo)本過濾。然后在濾后的裝有標(biāo)本的標(biāo)本瓶內(nèi)加入4ml細(xì)胞提取液，1080轉(zhuǎn)/分，離心2分鐘。用吸管抽吸標(biāo)本瓶上部液體8ml棄去，再2000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。取出離心管棄去上清液。將離心管在振蕩器上震蕩25秒，使離心管底部聚集的細(xì)胞恢復(fù)懸浮狀態(tài)。然后按編號順序?qū)㈦x心管放入制片機(jī)制片，經(jīng)設(shè)置好的程序運(yùn)行，自動完成細(xì)胞混勻、細(xì)胞轉(zhuǎn)移的制片過程，經(jīng)程序化處理后制成直徑為2cm的薄層細(xì)胞涂片染色。染色試劑有HEMA（蘇木素）、EA/OG染色試劑;H2O（緩沖液）、ALC（沖洗液），蘇木素清潔液用蒸餾水（純化水），EA/OG清潔液用75%乙醇，染色、沖洗均自動完成。手工進(jìn)行80%乙醇-95%乙醇-100%乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下閱片。

2.結(jié)果

2.1傳統(tǒng)的宮頸涂片染色：細(xì)胞核藍(lán)色，鱗狀上皮底層及表層的細(xì)胞胞漿均染成藍(lán)綠色，表層不全角化細(xì)胞胞漿呈粉紅色，完全角化細(xì)胞胞漿呈桔黃色，粘液染成淡紅色或淡藍(lán)色，紅細(xì)胞染呈鮮紅色，涂片色彩豐富。但巴氏染色易陳舊，效果不穩(wěn)定;涂片過厚，細(xì)胞重疊多，厚薄不勻，涂片質(zhì)量不能保證（圖1）;由于涂片厚薄不均勻，封好的切片放置一段時間后有個別切片出現(xiàn)邊緣有氣泡或密封不全，不利于長時間保存。傳統(tǒng)的手工涂片無法祛除正常宮頸細(xì)胞學(xué)成分以外的雜質(zhì)，含有血液、粘液、組織碎片及炎性細(xì)胞，遮蓋了正常細(xì)胞，致細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清楚;有的涂片有細(xì)胞水腫、有的有細(xì)胞退變等容易影響診斷。采用細(xì)胞學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)是“巴氏五級分類法”。

2.2液基薄層細(xì)胞檢測TCT制片：細(xì)胞均勻分布于載玻片上，幾乎無重疊，紅藍(lán)分明，結(jié)構(gòu)清晰，背景干凈看不到血液、粘液及炎性細(xì)胞的干擾;全部切片蓋玻片密封完好，染色色彩幾乎無褪色、無陳舊現(xiàn)象（圖2）。診斷分析結(jié)果采用2001年國際癌癥協(xié)會推薦的新TBS（The Bethesda System）分級系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)診斷，其包含三項(xiàng)內(nèi)容：標(biāo)本評估、總分類、描述性命名：判讀/結(jié)果。具體包括標(biāo)本滿意度評估，有無反應(yīng)性炎性細(xì)胞變化，有無微生物病原體如滴蟲、霉菌、皰疹病毒、人乳頭狀瘤（HPV）病毒、白色念珠菌、放線菌感染的改變，細(xì)胞量的多少（大于或小于5000個細(xì)胞），上皮細(xì)胞異常的分類明確、細(xì)致。

分別對2013年至2015年本院 1000例婦科傳統(tǒng)宮頸涂片和2014年至2016年本院1000例液基薄層檢測標(biāo)本進(jìn)行了回顧性分析、對比，結(jié)果表明，巴氏分類檢出陽性結(jié)果 （ASC-US 及以上 ）為 65 例，陽性檢出率為 6.50%，TCT 檢出陽性結(jié)果為 99例，陽性檢出率為 9.9%，兩種檢測方法的陽性檢出率有顯著差異。見表 1

3.討論

3.1傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)制片法由于操作方法簡單，所需設(shè)備簡單，制片技術(shù)簡捷，價格便宜，醫(yī)務(wù)人員能節(jié)省人力，病患也因減輕經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)而樂于接受檢查，在基層醫(yī)院容易推廣應(yīng)用，對疾病早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷起到了積極作用，傳統(tǒng)的宮頸涂片巴氏染色對于宮頸的癌前病變通常可以篩查出來，對于降低宮頸癌的風(fēng)險起到積極作用，能檢測出70%--80%的由人乳頭狀瘤（HPV）病毒引起的細(xì)胞學(xué)異常[6]。因此基層醫(yī)療單位在設(shè)備不全、經(jīng)濟(jì)有限的情況下可作為宮頸病變的初步篩查。但因其由于細(xì)胞采集的量、能否及時固定、固定的時間和制片的技術(shù)不穩(wěn)定等人為因素影響，部分陽性細(xì)胞甚至被血細(xì)胞或炎性細(xì)胞等所覆蓋，難以分辨細(xì)胞結(jié)構(gòu)，容易漏診，出現(xiàn)假陰性或假陽性診斷結(jié)果，從而影響診斷精確度[7]。傳統(tǒng)手工方法制作的涂片只收集了最多20%的細(xì)胞，而80%以上的細(xì)胞樣本則殘留在采樣器上并隨采樣器一起被丟棄。另外，40%以上的涂片會因血液、粘液和炎癥組織的影響而變得混濁不清，以及固定不及時、涂片太厚造成掉片、細(xì)胞重疊等人為因素所致細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，使閱片困難，存在假陰性或假陽性。

3.2液基薄層細(xì)胞檢測TCT 技術(shù)因可全自動制片，幾乎使采集器上所有細(xì)胞得以保存，細(xì)胞采量增加，使血液，粘液，上皮細(xì)胞和炎性細(xì)胞經(jīng)過處理后得以分離，細(xì)胞集中，涂片質(zhì)量穩(wěn)定，薄而均勻，保存了細(xì)胞的完整性，去除了紅細(xì)胞、黏液等的涂片，染色背景清晰，容易觀察到病變，陽性檢出率有所提高，同時也減輕了細(xì)胞學(xué)工作者的視力疲勞。TCT技術(shù)報告采用TBS（The Bethesda System）分級系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)診斷報告系統(tǒng)，明顯提高了標(biāo)本的滿意度及宮頸異常細(xì)胞檢出率，對宮頸癌細(xì)胞的檢出率明顯提高，同時還能發(fā)現(xiàn)癌前病變、微生物感染如霉菌、滴蟲、衣原體等。 TCT 技術(shù)不僅避免了漏診，而且是有規(guī)范程序的制片，減少了人為因素造成的影響，提高了工作效率，經(jīng)過規(guī)范化培訓(xùn)的人員都可制備標(biāo)準(zhǔn)化的細(xì)胞學(xué)涂片，實(shí)現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)化管理。從而提升了診斷價值，是一種更為敏感的方法。TCT技術(shù)能檢測85%--95%的由人乳頭狀瘤（HPV）病毒引起的細(xì)胞學(xué)異常，降低了假陰性率，對促進(jìn)臨床細(xì)胞病理工作具有積極的作用[6]-[8]。潘秦鏡[9]等報道TCT 技術(shù)具有高度敏感性和特異性，假陰性率僅為 2.3%，大大低于傳統(tǒng)巴氏涂片的 15%～40%。

綜上所述，目前大量研究論證了液基薄層細(xì)胞檢測TCT與傳統(tǒng)宮頸涂片巴氏染色檢測相比較，TCT技術(shù)具有高度的敏感性和特異性，檢出率優(yōu)于傳統(tǒng)宮頸涂片巴氏染色，液基薄層細(xì)胞檢測TCT 技術(shù)對宮頸的癌前病變的檢出率比傳統(tǒng)的巴氏涂片提高 233%[10]，大大降低了誤診率和漏診率，在實(shí)際工作中對TCT檢測陽性的病人進(jìn)一步做其他檢查（如HPV檢測、陰道鏡檢查、宮頸組織學(xué)活檢等），跟蹤隨訪，進(jìn)行有效的治療，可預(yù)防和治愈宮頸癌疾病，值得在臨床診療和基層醫(yī)療單位推廣應(yīng)用。

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