革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法在陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用比較

吳斌 楊巧榮

【摘要】目的：探討在陰道細(xì)菌檢驗(yàn)過(guò)程中分別采用革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法所能收獲的效果。方法：本次研究對(duì)象為2017年1月～2019年1月期間在本院就診的97例陰道疾病患者，對(duì)其陰道分泌物標(biāo)本均完成革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法三種檢驗(yàn)，對(duì)比檢出率。結(jié)果：革蘭染色法組總檢出率明顯低于細(xì)菌培養(yǎng)法組、PCR法組，細(xì)菌培養(yǎng)法組總檢出率與PCR法組對(duì)比結(jié)果顯示，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：陰道細(xì)菌檢驗(yàn)過(guò)程中，細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法均能獲得滿意且較高的準(zhǔn)確度，在疾病診斷、指導(dǎo)治療方面意義深遠(yuǎn)，但考慮時(shí)效性、普遍性要求，則PCR法更為適宜，耗時(shí)短且適宜基層醫(yī)院普遍應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】革蘭染色法;細(xì)菌培養(yǎng)法;PCR法;陰道細(xì)菌檢驗(yàn)

個(gè)人簡(jiǎn)歷：吳斌（1984.5-），男，漢族，甘肅敦煌人，敦煌市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科工作，主管檢驗(yàn)技師，本科學(xué)歷，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作。

陰道細(xì)菌感染是引起陰道炎等在內(nèi)多種婦科疾病最為常見(jiàn)的影響因素，陰道內(nèi)環(huán)境遭到破壞，酸堿失衡情況突出，對(duì)其生活困擾十分明顯，對(duì)其健康危害巨大，隨著陰道細(xì)菌感染不斷加劇，甚至?xí)M(jìn)展成盆腔炎、導(dǎo)致不孕等，臨床認(rèn)為進(jìn)行必要的陰道細(xì)菌檢查，盡早發(fā)現(xiàn)病變跡象可對(duì)機(jī)體發(fā)生細(xì)菌性陰道疾病起到預(yù)防作用[1]?；诖耍狙芯吭陉幍兰?xì)菌檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)用革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法等三種不同實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法，現(xiàn)報(bào)告如下。

1臨床資料與方法

1.1臨床資料

97例陰道疾病患者均于2017年1月～2019年1月期間在本院就診，經(jīng)證實(shí)均存在不同程度的陰道疾病，伴隨陰道存在明顯瘙癢感、陰道分泌物呈現(xiàn)明顯異常狀態(tài)等癥狀。年齡25～45歲，平均年齡（36.72±2.25）歲。97例陰道疾病患者均符合：日常月經(jīng)正常;納入本次研究前15d并未使用抗生素;納入本次研究前15d并未進(jìn)行陰道用藥;3周內(nèi)未進(jìn)行性生活;均知情本次研究，且自愿參與。排除婦科器質(zhì)性疾病者;心、腎等重要臟器疾病者;妊娠期、月經(jīng)期、哺乳期女性患者。

1.2方法

采集全部研究對(duì)象的陰道分泌物，對(duì)其陰道分泌物標(biāo)本均完成革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法三種檢驗(yàn)。

①陰道分泌物標(biāo)本采集。取截石位，在無(wú)菌陰道鏡的輔助作用下促使患者宮頸部位能夠有效顯露，在此狀態(tài)下，取無(wú)菌棉簽蘸取陰道分泌物，陰道分泌物標(biāo)本取好之后應(yīng)予以良好保存，臨床建議將其放置于預(yù)先準(zhǔn)備好的無(wú)菌試管中，對(duì)無(wú)菌試管要求提前存放適宜生理鹽水。

②革蘭染色法。用紗布事先完成所用載玻片的擦拭清潔工作，完成后進(jìn)行浸泡步驟，浸泡要求于乙醇中進(jìn)行，浸泡步驟完成后，正確手法將其取出、晾干，之后應(yīng)將陰道分泌物標(biāo)本涂抹于載玻片上，要求涂抹以均勻?yàn)橐?，涂抹步驟完成后，取蓋玻片加以固定，固定完成后進(jìn)行正確革蘭染色，借助醫(yī)用顯微鏡作進(jìn)一步的觀察、分析工作。

③細(xì)菌培養(yǎng)法。取陰道分泌物標(biāo)本，在確保無(wú)菌條件下開展檢驗(yàn)工作，首先利用無(wú)菌接種環(huán)開展接種，于細(xì)菌分離專用培養(yǎng)基上完成接種，其次將其放置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)，此步驟為的是完成孵育，需要注意的是，培養(yǎng)箱溫度應(yīng)控制在35℃，在歷時(shí)48h后觀察培養(yǎng)物，最后選擇滿足生化檢驗(yàn)要求之菌落，具體要求有三：一是半透明狀，二是灰色光滑，三是水滴狀。

④PCR法。預(yù)先準(zhǔn)備好離心機(jī)，用其完成陰道分泌物離心工作，離心要求有二：一是12000r/min轉(zhuǎn)速，二是10min離心時(shí)間;之后取上層清液，添加適宜劑量的堿性裂解液完成加熱工作，加熱要求有二：一是溫度98℃，二是加熱時(shí)間10min;接下來(lái)進(jìn)行再次離心，離心要求有二：一是12000r/min轉(zhuǎn)速，二是5min離心時(shí)間;取上層清液，按照相關(guān)要求將其制成臨床DNA模板，DNA模板制作完成后，如果添加有DNA模板，則其為陽(yáng)性組，如沒(méi)有添加則為陰性組，對(duì)比分析陽(yáng)性組與陰性組，完成PCR產(chǎn)物檢測(cè)與擴(kuò)增步驟，最后完成提取，則需要借助無(wú)菌去離子水進(jìn)行，在其表面用石蠟予以良好規(guī)范覆蓋，目的在于完成PCR反應(yīng)循環(huán)，共計(jì)32環(huán)。

1.3觀察指標(biāo)

陰道細(xì)菌陽(yáng)性檢出率比較。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)本研究所得數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS21.0進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)表示，并行卡方檢驗(yàn)，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果 ?革蘭染色法組總檢出率明顯低于細(xì)菌培養(yǎng)法組、PCR法組（P<0.05），細(xì)菌培養(yǎng)法組總檢出率與PCR法組對(duì)比結(jié)果顯示，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見(jiàn)表1。

3討論

陰道細(xì)菌感染引起的婦科疾病，多速度緩慢且無(wú)癥狀表現(xiàn)，在感染初期多不能及時(shí)被發(fā)現(xiàn)，隨著感染加劇，治療困難程度隨之增大，缺乏恰當(dāng)、有效的治療，則易進(jìn)展成盆腔炎、出現(xiàn)腹腔感染等一系列病癥，甚至造成生育能力喪失[2]。正常生理狀態(tài)下，在女性陰道部位會(huì)存在許多上皮細(xì)胞，與之并存的是革蘭陽(yáng)性球菌等，上述諸多物質(zhì)的存在有其合理性，但當(dāng)機(jī)體自身抵抗力下降或者機(jī)體因遭受其它環(huán)境因素的影響造成感染事件迅速蔓延，短時(shí)間內(nèi)打破陰道內(nèi)寄生菌群平衡之狀態(tài)，其陰道功能受到影響，自凈能力明顯降低甚至出現(xiàn)消失跡象，隨之不利于系統(tǒng)穩(wěn)定性保持，在此過(guò)程中，益生菌易受到不利影響，開始出現(xiàn)大量死亡情況，進(jìn)而更為適宜致病菌生存、使其得以快速繁殖，陰道酸堿不平衡，紊亂情況尤為嚴(yán)重，隨之而來(lái)的是一系列臨床癥狀。由此可見(jiàn)，對(duì)女性患者來(lái)說(shuō)，其健康的陰道內(nèi)環(huán)境依賴于陰道菌群的變化，只有準(zhǔn)確、有效的了解復(fù)雜陰道菌群變化情況，方能為陰道內(nèi)環(huán)境之健康、穩(wěn)定狀態(tài)提供強(qiáng)力有效保證，所以檢測(cè)陰道細(xì)菌感染情況在恰當(dāng)科學(xué)治療細(xì)菌性陰道疾病中所起到的作用不容小覷[3]。

細(xì)菌性陰道疾病臨床治療強(qiáng)調(diào)早期診斷，而陰道分泌物檢查所發(fā)揮的作用不容忽視，據(jù)此能夠更為清晰全面了解陰道菌群失調(diào)情況、感染情況等，故而其應(yīng)用范圍甚是廣泛，其檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性與細(xì)菌性陰道疾病的診斷、恰當(dāng)科學(xué)的治療、良好的預(yù)后之間的關(guān)系不言而喻。但此項(xiàng)輔助檢查因具體檢測(cè)方法具有多樣化之突出特點(diǎn)，臨床迫切尋求一種兼具準(zhǔn)確度可靠、便捷易操作、時(shí)效性理想之多重特點(diǎn)的檢測(cè)方法，旨在通過(guò)此檢測(cè)手段獲得有利依據(jù)以制定恰當(dāng)適宜的治療方案，更為良好維護(hù)女性健康。其中革蘭染色法因操作簡(jiǎn)便故而在臨床上有著較為良好的認(rèn)可度，應(yīng)用范圍也比較廣，但其在檢驗(yàn)操作過(guò)程中易受諸多因素的影響，比如染色時(shí)間把握情況、觀察誤差程度等，這些因素的影響導(dǎo)致準(zhǔn)確度不甚理想，并不適宜陰道細(xì)菌感染的檢驗(yàn)[4]。細(xì)菌培養(yǎng)法與PCR法均能獲得滿意的準(zhǔn)確度，但考慮到細(xì)菌培養(yǎng)法在保證取得成效的同時(shí)，執(zhí)行過(guò)于繁瑣，步驟繁多，其凸顯出過(guò)程復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)等諸多特征，使其無(wú)法普遍推廣，尤其是對(duì)于基層醫(yī)院來(lái)說(shuō)并不適宜，但PCR法與之不同，臨床研究證實(shí)其體現(xiàn)出“高特異性、強(qiáng)靈敏度、便捷快速”之優(yōu)勢(shì)，其整個(gè)檢驗(yàn)過(guò)程耗時(shí)多控制在2～4h，用時(shí)較短，易被接受，更重要的是，其對(duì)檢驗(yàn)標(biāo)本的純度并未作特別要求，一方面融合DNA雜交特異性之優(yōu)點(diǎn)，另一方面融合RCP敏感性性之優(yōu)點(diǎn)，使得其測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度甚佳[5]。

本研究結(jié)果顯示，革蘭染色法組總檢出率明顯低于細(xì)菌培養(yǎng)法組、PCR法組，細(xì)菌培養(yǎng)法組總檢出率與PCR法組對(duì)比結(jié)果顯示，差異并不顯著。提示臨床在開展陰道細(xì)菌檢驗(yàn)過(guò)程中，細(xì)菌培養(yǎng)法及PCR法準(zhǔn)確性更令人滿意，若檢驗(yàn)更強(qiáng)調(diào)時(shí)效性、普遍性時(shí)，PCR法更容易滿足需求。

參考文獻(xiàn)

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