鐵線蓮屬蒙藥材薄層層析圖譜研究

羅彩神

關(guān)鍵詞：鐵線蓮屬;蒙藥材;薄層色譜

前言

鐵線蓮屬（Clematis L.）隸屬于毛茛科，為多年生木質(zhì)或草質(zhì)藤本，或為直立灌木或草本，分布于世界各地，約300種，我國各地均有分布[1]。內(nèi)蒙古地區(qū)有16種6變種[2]，經(jīng)本草考證[2-5]，其中入蒙藥的植物有：芹葉鐵線蓮（Clematis aethusifolia）、黃花鐵線蓮（C. intricata）、短尾鐵線蓮（C. brevicaudata）、棉團鐵線蓮（C. hexapetala） 長瓣鐵線蓮（C. macropetala）和辣蓼鐵線蓮（C. mandshurica）（又名：東北鐵線蓮）。

以上6種鐵線蓮屬蒙藥，從藥性及功能主治方面，各有差異，不能等同。但由于來源于同科同屬不同種植物，親緣關(guān)系相近，原植物形態(tài)、藥材性狀及顯微特征方面相似，故臨床用藥混用、代用等現(xiàn)象較為嚴重.

現(xiàn)有資料報道的鐵線蓮屬藥材薄層研究主要以齊墩果酸或蘆丁作為對照品，單獨的對棉團鐵線蓮、芹葉鐵線蓮、威靈仙進行定性鑒別。而運用薄層色譜法系統(tǒng)地對上述6種鐵線蓮進行鑒別還未見報導(dǎo).本研究運用硅膠薄層色譜法對上述6種鐵線蓮的薄層色譜圖譜進行分析，對6種鐵線蓮進行準確、快速鑒別，從而為臨床安全用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1.儀器與試劑

燒杯數(shù)個;量筒;冷凝回流裝置（數(shù)字恒溫水浴鍋，球形冷凝管，圓底燒瓶）;抽慮裝置（抽濾瓶，布式漏斗，抽慮泵，濾紙）;10ml容量瓶數(shù)個;玻璃點樣毛細管（華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠）;層析缸;噴瓶;ZF-20D暗香式紫外分析儀（南京科爾儀器設(shè)備有限公司）;薄層層析硅膠GF254（青島海洋化工）;所用試劑均為分析純。

2.材料與實驗方法

2.1材料

于2009～2011年藥材采收期采集6種鐵線蓮植物全草，置于陰涼通風(fēng)干燥處儲存。蒙藥材原植物均經(jīng)藥用植物學(xué)教研室李驍老師認真鑒定。

2.2實驗方法

2.2.1樣品提取

分別精確稱取第一批材料樣品各三份，每份5g，適當粉碎，分別用75ml蒸餾水、75ml70%乙醇， 75ml95%乙醇浸泡過夜。再分別將隔夜浸泡的藥材與溶劑轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶，加熱回流1h，趁熱抽慮，濾渣分別加入第一次所加溶劑65ml，回流0.5h，趁熱抽慮，合并兩次濾液，水浴蒸干得浸膏，浸膏中加少量（約6-8ml）無水乙醇溶解，定容至10ml容量瓶，備用。

2.2.2 提取方法選擇

取10cm×20cm硅膠板，分別點上第一批樣品10μL，預(yù)飽和15分鐘，橫向展開（展開系統(tǒng)甲苯：乙酸乙酯：甲酸=20：3：1），展距8cm;25%硫酸水溶液顯色，加熱至斑點顯色清晰.

結(jié)果顯示，70%乙醇提取液展開的點數(shù)目較多且斑點清晰，故優(yōu)先選用以70%乙醇溶液提取。

2.2.3 ?提取方法重復(fù)性與穩(wěn)定性研究

以70%乙醇提取芹葉鐵線蓮作重復(fù)性和穩(wěn)定性研究，分別稱取第一批芹葉鐵線蓮三份，每份5g，以70%乙醇浸泡，按2.2.1項下方法提取，存放時間分別為0h，24h，48h;取10cm×20cm硅膠板，點樣10μL，展開劑石油醚：乙酸乙酯：丙酮=9：3：1，預(yù)飽和15分鐘，展開，展距13.8cm，25%硫酸水溶液顯色，加熱至斑點顯色清晰.

結(jié)果顯示，斑點數(shù)目及清晰度一致，說明該提取方法重復(fù)性和樣品穩(wěn)定性良好。故按2.2.1方法以70%乙醇提取第二批藥材。

2.2.4 ?展開系統(tǒng)選擇

以70%乙醇提取物為標準，分別實驗了如下種展開系統(tǒng)：

1.石油醚：乙酸乙酯：丙酮=9：3：1;

2.環(huán)己烷：乙酸乙酯：冰乙酸=12：3：1;

3.苯：丙酮=3：1;

4.三氯甲烷：甲醇：水=15：3：0.5

5乙酸乙酯：甲醇：甲酸：水=8：1：1：1

經(jīng)檢視后發(fā)現(xiàn)石油醚：乙酸乙酯：丙酮=9：3：1和三氯甲烷：甲醇：水=15：3：0.5系統(tǒng)可明顯區(qū)別出六種藥材，故以這兩展開系統(tǒng)作為優(yōu)先展開系統(tǒng)。

2.3 藥材薄層圖譜鑒別

將兩批樣品點于同一張薄層板上（10cmX20cm），展開劑石油醚：乙酸乙酯： 丙酮=9：3：1展開，展距8.0cm，噴25%硫酸水溶液后加熱至色點清晰，日光下檢視。

再以氯仿：甲醇：水（15：3：0.5）為展開劑，將兩批藥材點于同一張薄層板上（20cm×20cm），展距17.0cm， 25%濃硫酸水溶液顯色后于365nm紫外燈下檢視。

3.結(jié)果

以石油醚：乙酸乙酯：丙酮（9：3：1）為展開劑，得圖3，圖譜中可以看到Q點為辣蓼鐵線蓮所獨有色點， Q點Rf=0.86，從而可以鑒別出辣蓼鐵線蓮;再以三氯甲烷：甲醇：水（15：3：0.5）為展開劑，得圖4，圖中可以看到，芹葉鐵線蓮獨有A色點，長瓣鐵線蓮比芹葉鐵線蓮只少了A色點，棉團鐵線蓮獨有B，F(xiàn)，G色點，短尾鐵線蓮缺C色點，黃花鐵線蓮C，D點都有，辣蓼鐵線蓮D，E，F(xiàn)，G點不明顯，經(jīng)過分析對比，從而辨別出了芹葉鐵線蓮，黃花鐵線蓮，短尾鐵線蓮，棉團鐵線蓮，長瓣鐵線蓮和辣蓼鐵線蓮。各色點比移值：A點Rf=0.65;B點Rf=0.56;C點Rf=0.49;D點Rf=0.43;E點Rf=0.32;F點Rf=0.24;G點Rf=0.16.

4.討論

實驗分析發(fā)現(xiàn)，鐵線蓮屬蒙藥材中，棉團鐵線蓮成分最為特殊和復(fù)雜。有多種獨有成分。芹葉鐵線蓮和長瓣鐵線蓮成分最為相似。作為同屬蒙藥材，鐵線蓮屬蒙藥化學(xué)成分多有相同，但是也有區(qū)別，相互之間的替代使用還需要符合藥理事實依據(jù)，因此我們在保證用藥安全的同時， 合理利用藥材資源， 綜合開發(fā)，合理的替代，以達到藥材資源的永久持續(xù)利用。本研究主要進行了藥材鑒別的薄層色譜方法學(xué)研究，摸索出適合于鐵線蓮屬6種蒙藥材鑒別的薄層色譜方法，并運用該方法鑒別出6種蒙藥材;該方法快速，簡便，重復(fù)性好。

5.不足之處：

1.由于難以找到適合標準品，本研究未對藥材成分進行定性分析。只是用薄層色譜比較了他們之間的區(qū)別。

2本研究提取樣品所含化學(xué)成分較復(fù)雜，展開效果常被其他成分干擾而影響檢視效果，猜測利用萃取方法先對樣品溶液進行萃取，再對不同萃取部位點樣分析效果可能會更加明顯。

參考文獻

[1] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會. 中國植物志（第二十八卷）[M]. 北京：科學(xué)出版社，1989， 74～87.

[2] 內(nèi)蒙古植物志編輯委員會. 內(nèi)蒙古植物志（第二卷）[M].呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，1989， 515～534.

[3] 中國中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.《中華本草·蒙藥卷》[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 2004， 80，216，353.

[4] 柳白乙拉主編. 蒙藥正典（占布拉道爾吉著）[M]. 北京：民族出版社，2006， 128～129.

[5] 內(nèi)蒙古植物藥志編輯委員會. 內(nèi)蒙古植物藥志（第一卷）[M].呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，2000，389～397.