馬飛 許文超 宿雅彬 王建昌 李濤
摘要 本研究運(yùn)用分子生物學(xué)方法,對(duì)進(jìn)口荷斯坦奶牛遺傳物質(zhì)、進(jìn)口種牛、國(guó)產(chǎn)牛精液等進(jìn)行BLAD、CVM、DUMPS、FDS4種主要遺傳病篩查,采用的PCR-RFLP方法是對(duì)提取產(chǎn)物的致病序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增,后均采用酶切的方法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行純合子和隱性雜合子的鑒定,本文標(biāo)本來(lái)自進(jìn)口52份牛精液(美國(guó)、加拿大)、國(guó)產(chǎn)112份牛精液標(biāo)本.650份進(jìn)口種牛血液樣品(澳大利亞、新西蘭、烏拉圭、智利等國(guó)家),通過(guò)對(duì)814份樣品的篩查,共檢出攜帶BLAD隱性有害基因的樣品6份,攜帶CVM隱性有害基因的樣品15份,攜帶DUMPS隱性有害基因的樣品4份,未檢測(cè)到攜帶FDS隱性有害基因的樣品。基于此,我國(guó)有必要盡快建立荷斯坦牛隱性遺傳缺陷監(jiān)控體系并進(jìn)行系譜標(biāo)注,以逐步降低我國(guó)奶牛群體中遺傳缺陷隱性等位基因頻率。
關(guān)鍵詞 進(jìn)境種牛;遺傳缺陷病;檢測(cè)方法;應(yīng)用
中圖分類號(hào) S858.23
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A
文章編號(hào) 1007-5739(2019)08-0218-05
1綜述
遺傳缺陷病是動(dòng)物個(gè)體發(fā)生基因突變或染色體畸變導(dǎo)致的遺傳疾病,導(dǎo)致發(fā)育個(gè)體出現(xiàn)身體結(jié)構(gòu)上的缺陷或者功能性障礙,從而影響生產(chǎn)性能,具有先天性和家族性的特征。遺傳缺陷病分為單染色體遺傳病、染色體遺傳病和多染色體遺傳病。單基因遺傳病是指一對(duì)主基因突變?cè)斐傻募膊?,其遺傳符合孟德?tīng)柖?,荷斯坦牛中最常?jiàn)以常染色體隱性為主如荷斯坦牛脊柱畸形綜合癥(CVM)、荷斯坦牛白細(xì)胞粘附缺陷(BLAD)、荷斯坦牛尿氨酸合酶缺陷癥(DUMP),以及新發(fā)現(xiàn)的牛面部畸形綜合癥(FDS)等。
近年來(lái),由于人工授精技術(shù)的普及以及奶牛生產(chǎn)力和養(yǎng)殖效益的大幅提高,奶牛遺傳缺陷病危害逐年增加。目前,一些國(guó)家每年都會(huì)檢測(cè)公牛的一些遺傳缺陷,并淘汰攜帶者。2017年我國(guó)進(jìn)口種牛逾10萬(wàn)頭,進(jìn)口牛精液及胚胎300萬(wàn)只,種公牛數(shù)百頭。本研究對(duì)部分進(jìn)口公牛和奶牛的精液及血液標(biāo)本進(jìn)行篩查,旨在了解我國(guó)部分進(jìn)口和國(guó)內(nèi)公牛及奶牛的遺傳缺陷情況,并希望初步建立一種方便快捷的遺傳缺陷病篩查方法。這樣以來(lái),就可提前把具有及攜帶遺傳缺陷病基因的病牛拒國(guó)]之外,對(duì)我國(guó)畜牧業(yè)穩(wěn)定發(fā)展及保障畜禽衛(wèi)生健康具有重要意義。
1.1CVM疾病簡(jiǎn)述
脊柱畸形綜合征(complexvertebralmalformation,CVM),是荷斯坦牛的一種常染色體致死性隱性遺傳病,CVM主要表現(xiàn)為純合子胎兒的早期死亡,純合子胎兒在出生后極少能存活,但是CVM雜合子后代(攜帶者)表現(xiàn)正常,能存活?;疾倥5牟顬樾刈岛皖i椎較正常犢牛短,掌指關(guān)節(jié)和跖趾關(guān)節(jié)對(duì)稱性地收縮和彎曲,體重較同期正常犢牛輕20%左右,另外還常見(jiàn)不同程度的椎骨半側(cè)缺失、脊柱側(cè)凸以及脊柱的骨間連合等(注:在CVM患者中發(fā)現(xiàn)了脊椎沒(méi)有損傷的特例)。一些CVM患病胎兒還存在肺部和心臟畸形.CVM嚴(yán)重影響奶業(yè)生產(chǎn)。
Agerholm等研究確診CVM為常染色體隱性遺傳病,確定CVM的候選基因是SLC35A3(solutecarrierfamily35,memberA3)基因,本研究根據(jù)CVM發(fā)病的分子機(jī)理為CVM患牛的3號(hào)染色體(BTA3)上的SLC35A3(BovineSoluteCarrierFamily35Member3)基因的第4外顯子559處發(fā)生G-T突變,導(dǎo)致180處纈氨酸置換為苯丙氨酸,致使異常的核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)至高爾基體從而使Rsal限制性酶切位點(diǎn)消失的原理,通過(guò)PCR-RFLP方法對(duì)此標(biāo)本進(jìn)行鑒定分析。針對(duì)G559T突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,特異性擴(kuò)增牛SLC35A3基因含有上述點(diǎn)突變的片段,長(zhǎng)度為225bp。經(jīng)限制性內(nèi)切酶RsaI酶切后,正常個(gè)體產(chǎn)生201bp和24bp的DNA條帶,而攜帶者產(chǎn)生201、24、225bp的DNA條帶,純合隱性個(gè)體仍為225bp。
1.2BLAD疾病簡(jiǎn)述
荷斯坦牛白細(xì)胞粘附缺陷(bovineleukocyteadhesiondeficiency,BLAD)是荷斯坦牛的一種重要的單堿基突變隱性遺傳疾病。在相同的飼養(yǎng)條件下,荷斯坦牛BLAD純合子與正常荷斯坦牛相比,生長(zhǎng)明顯緩慢,皮毛無(wú)光澤,對(duì)于病原微生物尤其是細(xì)菌的易感性高,主要特征表現(xiàn)為嚴(yán)重的重復(fù)細(xì)菌感染、缺少化膿、損傷愈合延遲和白細(xì)胞增多??谇粌?nèi)、舌和牙眼出現(xiàn)潰瘍,嚴(yán)重時(shí)由于牙床及骨翻的炎癥而引起整個(gè)下領(lǐng)腫大。咽部出現(xiàn)明顯炎癥,呼吸道和肺部出現(xiàn)炎癥。在胃和腸道出現(xiàn)潰瘍,腎臟炎癥,大多數(shù)淋巴結(jié)腫大。骨髓內(nèi)的血細(xì)胞,主要是白細(xì)胞成熟中性顆粒細(xì)胞增多。在毒血癥時(shí),血管內(nèi)的中性顆粒細(xì)胞濃度非常高,但在炎癥部位反而很低,導(dǎo)致炎癥長(zhǎng)期不愈。
在荷斯坦牛育種中以剔除荷斯坦牛BLAD雜合子為主。BLAD遺傳缺陷病其分子遺傳學(xué)機(jī)制為牛1號(hào)染色體上CD18基因編碼區(qū)發(fā)生A383G突變,導(dǎo)致第128位氨基酸由天門冬氨酸變?yōu)楦拾彼?。本研究根?jù)BLAD患病牛CD18基因編碼區(qū)序列第383位點(diǎn)的A/G突變,從而使TaqI限制性酶切位點(diǎn)消失的原理,通過(guò)PCR-RFLP方法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行鑒定分析,針對(duì)A383G突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,特異性擴(kuò)增奶牛CD18基因含有上述點(diǎn)突變的片段,長(zhǎng)度為343bp。經(jīng)限制性內(nèi)切酶TaqI酶切后,正常個(gè)體產(chǎn)生191bp和152bp的DNA條帶,而攜帶者產(chǎn)生191、152343bp的DNA條帶,純合隱性個(gè)體仍為324bp。
1.3DUMPS疾病簡(jiǎn)述
尿苷酸合酶缺乏癥(deficiencyofuridinemonophophatesynthase,DUMPS)是荷斯坦牛胚胎早期死亡的一種常染色體單基因隱性遺傳缺陷病,最早于1987年在美國(guó)發(fā)現(xiàn)。臨床癥狀為血液中瓜氨酸含量升高,尿素循環(huán)受阻引起高氨血癥,從而導(dǎo)致?tīng)倥T诔錾?周內(nèi)死亡,或者母牛懷孕40d左右時(shí)流產(chǎn).DUMPS的遺傳學(xué)基礎(chǔ)是奶牛1號(hào)染色體(BTA1)上的UMPS基因C-末端密碼子405處存在著一個(gè)C-T點(diǎn)突變,可導(dǎo)致原來(lái)編碼精氨酸的CGA轉(zhuǎn)變?yōu)榫幋a終止密碼子的TGA,導(dǎo)致基因編碼產(chǎn)物催化亞基C-末端缺失76個(gè)氨基酸。由于這種蛋白質(zhì)的酶催化功能喪失,造成其作用底物乳清酸的大量積累。
本研究根據(jù)該病發(fā)生的分子機(jī)理通過(guò)PCR-RFLP的檢測(cè)方法對(duì)大量標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)分析,其原理是:針對(duì)C405T突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,特異性擴(kuò)增牛UMPS基因含有上述點(diǎn)突變的片段,長(zhǎng)度為108bp,因酶切片段較小且較接近,為觀察酶切反應(yīng)是否充分,引入第二Aval酶切位點(diǎn)。經(jīng)限制性內(nèi)切酶Aval酶切后,正常個(gè)體產(chǎn)生53、36、19bp的DNA條帶,而攜帶者產(chǎn)生89、53、36、19bp的DNA條帶,純合隱性個(gè)體產(chǎn)生89bp和19bp條帶。因19bp條帶太小,通常觀察不到。
1.4FDS疾病簡(jiǎn)述
牛面部畸形綜合癥(FDS)是2017年被文獻(xiàn)報(bào)道出來(lái)的新發(fā)現(xiàn)的遺傳性疾病,其發(fā)病機(jī)理是位于26號(hào)染色體上編碼FGFR2基因6號(hào)外顯子第927位的堿基由G變?yōu)門(G.927T),與之相應(yīng)的高度保守的氨基酸由色氨酸變?yōu)榘腚装彼幔═rp309Cys),致使成千維細(xì)胞受體因子發(fā)生改變而引起臨床發(fā)病。其臨床表現(xiàn)為病畜面部嚴(yán)重發(fā)育不良、完全眼下垂、嚴(yán)重影響生存率。目前,國(guó)內(nèi)和國(guó)外對(duì)此病研究均很少,本課題挑選該病提取標(biāo)本基因組,用包含突變位點(diǎn)的引物特異性擴(kuò)增牛FGFR2基因含有上述點(diǎn)突變的片段,長(zhǎng)度為202bp。用基因測(cè)序的方法對(duì)進(jìn)口及國(guó)內(nèi)牛標(biāo)本突變情況進(jìn)行檢測(cè),以初步了解該病的遺傳攜帶情況。
2牛遺傳疾病分子生物學(xué)檢測(cè)方法
2.1試驗(yàn)材料
2.1.1樣本來(lái)源。本文中標(biāo)本來(lái)自于進(jìn)口52份牛精液(美國(guó)、加拿大)、國(guó)產(chǎn)112份牛精液標(biāo)本650份進(jìn)口種牛血液樣品(澳大利亞新西蘭、烏拉圭、智利)。
2.1.2主要儀器設(shè)備。BeckmanCoulter離心機(jī)(型號(hào):Micro-fuge20R)、Eppendorf梯度PCR儀(型號(hào):5331)、Bio-Rad伯樂(lè)凝膠成像系統(tǒng)SYSTEMGelDocXR+(型號(hào):1708195)、Bio-Rad伯樂(lè)穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀及水平電泳槽、紫外分光光度計(jì)、水浴恒溫振蕩器、移液器(2、10、20、100、200、1000μL)、Millipore超純水器。
2.2試驗(yàn)試劑
血液組織DNA提取試劑盒(貨號(hào):69504,Qiagen)、膠回收試劑盒(貨號(hào):28706,Qiagen)、PCR試劑盒(貨號(hào):M7123Promega)限制性內(nèi)切酶TaqI(貨號(hào):1189A,Takara)、DL500Marker(貨號(hào):3590QTakara)、瓊脂糖(北京化學(xué)試劑公司)、無(wú)水乙醇(北京化學(xué)試劑公司)、異丙醇(北京化學(xué)試劑公司)。
2.3引物合成
弓物均由上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成,如表1所示。
2.4試驗(yàn)方法
2.4.1樣品制備。收集牛精液液氮保存;收集牛未抗凝血液的血細(xì)胞成份于-20C條件下保存。
牛精液及血液中DNA提?。喝?00μL牛精液(或100μL血液),1500r/min離心5min,棄上清,加20μL蛋白酶K,混勻。加200μLBufferAL充分混勻,56C孵育10min。加200μL乙醇充分混勻,移入洗脫柱,8000r/min離心1min。棄廢液,加入500μLAW1,8000r/min離心1min。棄廢液,加人500μLAW2,13000r/min離心3min,棄廢液及廢管。更換1.5mL離心管,加入50μL去離子水8000r/min離心1min,再加入50μL去離子水洗脫2次,共100μLDNA標(biāo)本。
2.4.2引物配置。按說(shuō)明書(shū)要求加入雙蒸水至100pmol/μL的儲(chǔ)存液,再兩次10倍稀釋至10pmol/μL的即用引物備用。2.4.3PCR反應(yīng)體系及條件。①BLAD、CVM、DUMPS、FDSPCR反應(yīng)體系:20μLMasterMix、2μLPrimerF(l0pmol/uL)、2μLPrimerR(10pmol/μL)、16μLDNA,總體積40μL。②BLAD、CVM、DUMPSPCR反應(yīng)條件為959C預(yù)變性2min,959C變性30s,59C退火30s,72C延伸1min,反應(yīng)30個(gè)循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后,95C延伸5min,4C保存。③FDSPCR反應(yīng)條件為95C預(yù)變性2min,959C變性30s,57C退火30s,72C延伸1min,反應(yīng)30個(gè)循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后,72C延伸5min,4C保存。
2.4.4瓊脂糖制作及制膠。①瓊脂糖凝膠制作。取1g瓊脂糖溶于100mLTAE中,在微波爐加熱至瓊脂糖全部熔化,使溶液冷卻至60C,加入10mg/mLEB2μL.②灌膠。用橡皮膏將電泳內(nèi)槽的兩端邊緣封好,不留縫隙。將內(nèi)槽放置于水平臺(tái)面,并插好梳子。待瓊脂糖凝膠液冷卻至60C左右,將其緩慢倒入內(nèi)槽至厚度0.5cm左右,不要形成氣泡,特別是梳子下,如有氣泡可用牙簽挑破。待膠凝固后,拔出梳子,撕去橡皮膏或透明膠帶,將帶凝膠的內(nèi)槽放人電泳槽中,靠近負(fù)極端點(diǎn)樣。加入1xTAE緩沖液至電泳槽,緩沖液剛沒(méi)過(guò)凝膠表面即可。
2.4.5加樣。直接取40μLPCR產(chǎn)物將其分別加入凝膠的點(diǎn)樣孔并記錄點(diǎn)樣順序。
2.4.6電泳。接通電源槽與電泳儀的電源,檢查正負(fù)極。DNA的遷移率與電壓成正比,電壓150V電壓,當(dāng)溴酚藍(lán)染料移動(dòng)至凝膠前沿1.5cm處,切斷電源,停止電泳。取出內(nèi)槽,推出凝膠,將其放人凝膠成像系統(tǒng)紫外燈下觀察結(jié)果,DNA存在處應(yīng)顯出明亮條帶,觀察分析、拍照、切膠保存。
2.5PCR產(chǎn)物膠純化
將300μLQG液體加入裝有膠的EP管中,放入50C水浴鍋中孵育10min,每3min上下混勻1次。加入350μL異丙醇,上下充分混勻。將約750μL混合液移人純化柱,13000r/min離心1min,棄廢液。加500μLQC至純化柱,13000r/min離心1min,棄廢液。加入750μLPE至純化柱,13000r/min離心1min,棄廢液。將純化柱放人新的回收座中,13000r/min離心1min,棄廢液及回收座。
將純化柱移人1.5mLEP上,加入15μL雙蒸水,孵育1min,13000r/min離心2min。棄純化柱,將EP管收集的產(chǎn)物放-20C保存供酶切及測(cè)序。
2.6BLAD膠純化產(chǎn)物酶切體
BLAD酶酶切體系及條件:0.5μLTaqI酶、1.0μL1%BSA、1.0μL10xTaqIbuffer、7.5μLDNA、10.0μL總體積,酶切溫度及時(shí)間:65C過(guò)夜.CVM酶切體系及條件:0.5μLAfaI酶、1.0μL1%BSA、1.0μL10xTaqIbuffer、7.5μLDNA、10.0μL總體積,酶切溫度及時(shí)間:37C過(guò)夜。DUMPS酶切體系及條件:0.5μLAval酶、1.0μL1%BSA、1.0μL10xTaqIbuffer、7.5μLDNA、10.0μL總體積,酶切溫度及時(shí)間:30C過(guò)夜。
3結(jié)果與分析
3.1牛精液及血液基因組DNA提取結(jié)果
取1μL基因組DNA放人紫外分光光度計(jì)中讀值,檢測(cè)牛精液及血液的濃度及純度。
3.1.1BLAD目的基因PCR結(jié)果。由圖1可知,試驗(yàn)樣本經(jīng)擴(kuò)增得到一條DNA片段,長(zhǎng)度為324bp,與試驗(yàn)預(yù)期結(jié)果吻合,可進(jìn)行RFLP分析。
3.1.2酶切結(jié)果,如圖2可知,試驗(yàn)樣本PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)TaqI酶切后產(chǎn)生AB基因型和AA基因型2種不同分型。其中,AB基因型(即隱形攜帶者):324、191、152bp,無(wú)純合隱性個(gè)體;AA基因型(即純合子):191bp和152bp2條帶,屬正常個(gè)體。
3.2CVM牛精液及血液基因組DNA提取結(jié)果
CVM牛精液及血液基因組DNA提取結(jié)果如圖3所示。1~4號(hào)為牛精液基因組DNA提取結(jié)果,5~9號(hào)為血液基因組DNA提取結(jié)果。
3.2.1目的基因PCR結(jié)果。由圖4可知,試驗(yàn)樣本經(jīng)擴(kuò)增得到一條DNA片段,長(zhǎng)度為225bp,與試驗(yàn)預(yù)期結(jié)果相吻合,可進(jìn)行RFLP分析。
3.2.2膠純化產(chǎn)物酶切結(jié)果。如圖5可知,試驗(yàn)樣本PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)TaqI酶切后產(chǎn)生AB基因型和AA基因型2種不同分型。其中,AB基因型(即隱形攜帶者):201、24、225bp,無(wú)純合隱性個(gè)體;AA基因型(即純合子):201bp和24bp2條帶,屬正常個(gè)體。
3.3DUMPS牛精液及血液基因組DNA提取結(jié)果
本試驗(yàn)所提取的牛精液基因組DNA條帶單一、清晰,但血液標(biāo)本提取DNA含量有差別,凍存時(shí)間長(zhǎng)的標(biāo)本,提取效率越低,提取DNA經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)基因組濃度后,于-20C凍存待用。選提取質(zhì)量高的標(biāo)本左基因組DNA的1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖6。
3.3.1目的基因PCR結(jié)果。由圖7可知,試驗(yàn)樣本經(jīng)擴(kuò)增得到一條長(zhǎng)度為108bp的DNA片段,與試驗(yàn)預(yù)期結(jié)果相吻合,可以進(jìn)行RFLP分析。
3.3.2酶切。如圖8可知,試驗(yàn)樣本PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)AvaI酶切后產(chǎn)生2種不同分型,AA基因型(即純合子):53bp和36bp2條帶,屬正常個(gè)體;AB基因型(即隱形攜帶者):89、53、36bp,無(wú)純合隱性個(gè)體。因19bp條帶太小,通常觀察不到。3.4FDS牛精液及血液基因組DNA提取結(jié)果
本試驗(yàn)所提取的牛精液基因組DNA條帶單一、清晰,但血液標(biāo)本提取DNA含量有差別,凍存時(shí)間長(zhǎng)的標(biāo)本,提取效率越低,提取DNA經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)基因組濃度后,于-20C凍存待用。選提取質(zhì)量高的標(biāo)本左基因組DNA的1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖9。
3.4.1目的基因PCR結(jié)果。由圖10可知,試驗(yàn)樣本經(jīng)擴(kuò)增得到一條長(zhǎng)度為202bp的DNA片段,與試驗(yàn)預(yù)期結(jié)果相吻合,可以進(jìn)行RFLP分析。
3.4.2測(cè)序結(jié)果。圖11為FGFR2目的基因測(cè)序結(jié)果,從結(jié)果上看927位的堿基由G未變?yōu)門,未發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)。圖12、13分別為FGFR2基因NCBI基因比對(duì)結(jié)果、FGFR2基因NCBI氨基酸序列比對(duì)。
4結(jié)論與討論
本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)進(jìn)口52份牛精液、國(guó)產(chǎn)112份牛精液標(biāo)本、進(jìn)口650份牛血液標(biāo)本共計(jì)814份綜合研究,結(jié)果如表4所示。本研究利用PCR-RFLP的方法對(duì)進(jìn)口及國(guó)產(chǎn)共814份標(biāo)本進(jìn)行BLAD遺傳缺陷病檢測(cè)分析,發(fā)現(xiàn)進(jìn)口種公牛及國(guó)內(nèi)種公牛無(wú)BLAD遺傳病基因,進(jìn)口650份奶牛中共發(fā)現(xiàn)6頭BLAD隱性基因攜帶者,攜帶率占總共標(biāo)本數(shù)的1.02%,低于部分文獻(xiàn)報(bào)道的地區(qū)攜帶率2%~20%。而且沒(méi)有發(fā)現(xiàn)BLAD純合個(gè)體,即BLAD感染者,因?yàn)檫@樣的個(gè)體在出生后不久便死亡。該研究的目的就是篩查BLAD攜帶者,即AB基因型個(gè)體,及時(shí)淘汰BLAD攜帶者,掌握BLAD遺傳缺陷在奶牛群中分布情況。
在對(duì)CVM的篩查中,進(jìn)口種公牛精液中CVM攜帶率為零,說(shuō)明目前國(guó)外已重視且做到了對(duì)種公牛的CVM遺傳病的有效篩選,這有助于減少CVM在我國(guó)荷斯坦牛群中的擴(kuò)散。國(guó)產(chǎn)牛精液檢測(cè)出4例陽(yáng)性,說(shuō)明但隨著CVM檢測(cè)方法的越來(lái)成熟和完善,依然有必要對(duì)國(guó)內(nèi)種公牛建立一種長(zhǎng)期有效的檢測(cè)機(jī)制,一旦發(fā)現(xiàn),立即處理,防止牛群生產(chǎn)性能及繁殖性能下降;同時(shí),國(guó)內(nèi)畜牧場(chǎng)也應(yīng)進(jìn)行CVM的基因檢測(cè),避免近交繁殖加大致死率。雖然進(jìn)口荷斯坦奶?;駽VM攜帶率低于報(bào)道水平(11例,1.9%),但伴隨著我國(guó)對(duì)進(jìn)口荷斯坦活牛需求的激增,有必要對(duì)進(jìn)口牛的譜系及遺傳病進(jìn)行篩查,并建立一定范圍的信息共享機(jī)制,選擇種群優(yōu)秀的個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)種繁育。
在對(duì)DUMPS遺傳缺陷病篩查中,共發(fā)現(xiàn)4頭DUMPS隱性基因攜帶者,發(fā)生率為0.5%,雖然發(fā)生率不高,但如果近交率較大時(shí),將嚴(yán)重影響牛群的繁殖性能。因此,還是有必要對(duì)進(jìn)口牛精液及種牛的譜系進(jìn)行篩查,防止牛群生產(chǎn)性能及繁殖性能下降;同時(shí),國(guó)內(nèi)畜牧場(chǎng)也應(yīng)進(jìn)行DUMPS的基因檢測(cè),避免近交繁殖加大致死率。在進(jìn)口及國(guó)產(chǎn)牛精液的譜系檢測(cè)中,可建立一定范圍的信息共享機(jī)制,選擇種群優(yōu)秀的個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)種繁育。
本次研究未發(fā)現(xiàn)有FDS隱形基因攜帶者,但FDS致死率較大,但如果近交率較大時(shí),將嚴(yán)重影響牛群的繁殖性能。因此,有必要對(duì)進(jìn)口牛精液及種牛的譜系進(jìn)行篩查,防止牛群生產(chǎn)性能及繁殖性能下降。
5展望
PCR-RFLP均可適合于以上3種疾病的常規(guī)檢測(cè)篩選,標(biāo)本可選擇精液或血液,該方法簡(jiǎn)單快捷、準(zhǔn)確性高、成本低廉,適合對(duì)牛進(jìn)行大規(guī)模檢測(cè)。對(duì)814份樣品的檢測(cè)結(jié)果為:6頭荷斯坦牛為BLAD攜帶者,攜帶率為0.8%;15頭荷斯坦牛為CVM攜帶者,攜帶率為2.0%:4頭牛為DUMPS攜帶者,攜帶率為0.5%,說(shuō)明進(jìn)口奶牛和國(guó)內(nèi)牛隱性遺傳疾病雖然攜帶率低于報(bào)道,但還有一定比例。對(duì)進(jìn)口32份牛精液的檢測(cè)結(jié)果為均無(wú)攜帶率,說(shuō)明國(guó)外畜牧業(yè)大國(guó)對(duì)種公牛遺傳疾病檢測(cè)還是做到了有意義的篩查。
本研究同時(shí)用測(cè)序的方法對(duì)2017年新報(bào)道的遺傳疾病牛面部綜合癥(FDS)進(jìn)行篩選,對(duì)以上標(biāo)本均為檢測(cè)出陽(yáng)性。說(shuō)明FDS的攜帶率比較低,可不必要對(duì)牛進(jìn)行大規(guī)模檢測(cè),但對(duì)種公牛的篩選還是有長(zhǎng)遠(yuǎn)意義。
優(yōu)秀種公牛在荷斯坦牛育種過(guò)程中被高強(qiáng)度使用,當(dāng)優(yōu)秀種公牛攜帶隱性遺傳疾病時(shí),隱性遺傳疾病很易被迅速傳播。目前,我國(guó)有種公牛超過(guò)2000頭,但對(duì)遺傳疾病的攜帶率情況不清楚。因此,應(yīng)對(duì)我國(guó)荷斯坦種公牛盡快進(jìn)行遺傳疾病的檢測(cè)。由于試驗(yàn)抽取樣本有限只能對(duì)我國(guó)荷斯坦牛隱性遺傳疾病攜帶情況進(jìn)行初步調(diào)查,還應(yīng)對(duì)我國(guó)荷斯坦牛隱性遺傳疾病攜帶情況進(jìn)行大規(guī)模的抽查。隱性遺傳疾病的剔除是一項(xiàng)長(zhǎng)期任務(wù),各職能部門應(yīng)共同努力,加強(qiáng)對(duì)進(jìn)口奶牛、精液及胚胎的檢驗(yàn),同時(shí)逐步淘汰現(xiàn)已檢測(cè)出的攜帶隱性遺傳疾病的荷斯坦奶牛。
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