纈沙坦片的溶出方法學(xué)研究

董偉昌，孫 進(jìn)

纈沙坦片的溶出方法學(xué)研究

董偉昌，孫 進(jìn)*

（沈陽(yáng)藥科大學(xué) 無(wú)涯學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

建立纈沙坦片溶出度的測(cè)定方法。以磷酸鹽緩沖液（pH值6.8）1 000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r?min-1，經(jīng)30 min時(shí)取樣，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法在250 nm處測(cè)定吸光度，按外標(biāo)法計(jì)算纈沙坦片的溶出度。通過(guò)耐用性、濾膜吸附實(shí)驗(yàn)、線(xiàn)性與范圍、溶液穩(wěn)定性、精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)等試驗(yàn)研究，對(duì)纈沙坦片的溶出方法進(jìn)行驗(yàn)證。該溶出方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果良好。纈沙坦溶液質(zhì)量濃度在1.61～17.71 mg?L-1內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，回歸方程為=3.17×10-2-0.6×10-3，=0.999 9；方法的回收率、精密度、重復(fù)性符合要求，供試溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。本方法能準(zhǔn)確測(cè)定纈沙坦片的溶出度，控制纈沙坦片的質(zhì)量。

藥劑學(xué)；溶出度；漿法；紫外-可見(jiàn)分光光度法；纈沙坦片；驗(yàn)證

纈沙坦是由瑞士諾華公司開(kāi)發(fā)的降壓藥，口服藥品包括40、80、160、320 mg 四種規(guī)格，纈沙坦是一種高選擇性Ⅰ型血管緊張素Ⅱ受體（AT1受體）拮抗劑，具有良好的抗高血壓作用，其通過(guò)對(duì)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAS）特異性阻斷達(dá)到控制血壓的效果，其降血壓療效和耐受性已在多個(gè)臨床試驗(yàn)中得到證明[1-2]。

口服固體制劑的溶出行為的考察是評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn)[3-4]。在仿制藥研發(fā)中，溶出度試驗(yàn)為處方及工藝的開(kāi)發(fā)提供方向，也是預(yù)測(cè)仿制藥生物等效性的有效手段，還是評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量穩(wěn)定性的重要手段之一[5]。由于纈沙坦在水中溶解度小，溶出是限制其體內(nèi)吸收的主要過(guò)程，所以建立溶出度的測(cè)定方法，使其準(zhǔn)確反映產(chǎn)品質(zhì)量，有利于控制和提高纈沙坦仿制藥質(zhì)量，提升其體內(nèi)生物等效性試驗(yàn)的成功率。作者主要對(duì)160 mg規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行溶出度的方法學(xué)研究，評(píng)價(jià)產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與材料

UV2300紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海天美科學(xué)儀器有限公司），RC8MD溶出儀（天大天發(fā)科技有限公司），XSE205電子天平、FE-20 pH計(jì)（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

纈沙坦片（規(guī)格160 mg，華北制藥股份有限公司，批號(hào)XS1405001、XS1405002、ZS1405003)，纈沙坦對(duì)照品,（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100651-201203)，纈沙坦參比制劑(規(guī)格160 mg，瑞士諾華制藥有限公司，批號(hào)B8292YX)。磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氫氧化鈉（分析純，北京化工廠），水為純化水（華北制藥股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出度方法的確定

纈沙坦片收載于《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版二部及《美國(guó)藥典》USP39版[6-9]中，兩者規(guī)定的溶出度檢測(cè)方法均為以磷酸鹽緩沖液（pH值6.8）1 000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r?min-1，經(jīng)30 min時(shí)取樣，照紫外分光光度法在250 nm處測(cè)定吸光度，按外標(biāo)法計(jì)算溶出度[8-9]。可見(jiàn)，該方法為大家所公認(rèn)，所以纈沙坦片的溶出度研究仍采用該方法。

2.1.1 溶出介質(zhì)的制備

pH值6.8磷酸鹽緩沖液：取磷酸二氫鉀3.60 g和磷酸氫二鉀三水合物5.37 g，加水適量振搖使溶解，加水稀釋至1 000 mL，搖勻，即得。

2.1.2 對(duì)照溶液的制備

取纈沙坦對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加溶出介質(zhì)溶解并制成每1 mL中約含16 μg的溶液。

2.1.3 供試溶液的制備

取溶出介質(zhì)1 000 mL，置于溶出杯中，共6杯。設(shè)定溫度為37 ℃，開(kāi)啟儀器。取供試品6片，分別投入6個(gè)溶出杯中，轉(zhuǎn)速為50 r?min-1，啟動(dòng)儀器，計(jì)時(shí)，經(jīng)30 min取樣，取樣體積為5 mL，立即過(guò)濾，精密量取澄清濾液適量，用溶出介質(zhì)稀釋制成每1 mL約含纈沙坦16 μg的溶液，即得。

2.1.4 測(cè)定方法

照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在250 nm處測(cè)定供試與對(duì)照溶液的吸光度，按照外標(biāo)法以吸光度計(jì)算溶出度。

2.1.5 結(jié)果判定

計(jì)算每片的溶出量，限度為標(biāo)示量的80%。

2.2 溶出度的檢測(cè)方法研究

2.2.1 線(xiàn)性關(guān)系考察

取纈沙坦對(duì)照品約8 mg，置于250 mL量瓶中，用pH值6.8磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照儲(chǔ)備液；精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、4、6、8、10和11 mL，分別置于20 mL量瓶中，加pH值6.8磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為線(xiàn)性溶液。纈沙坦溶液質(zhì)量濃度在1.61～17.71 mg?L-1內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，回歸方程為=3.17×10-2-0.6×10-3，=0.999 9，軸截距為100%響應(yīng)值的0.012%，不大于2.0%，響應(yīng)因子的RSD值為1.8%，不大于2.0%，結(jié)果見(jiàn)表1。

Table 1 The results of linearity and range

2.2.2 精密度試驗(yàn)

按“2.1.2”條配制1份纈沙坦對(duì)照溶液，連續(xù)測(cè)定6次，吸光度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.11%，說(shuō)明精密度良好，結(jié)果見(jiàn)表2。

Table 2 The results of precision

2.2.3 濾膜吸附試驗(yàn)

取溶出液適量，分別采用過(guò)濾和離心的方式進(jìn)行處理后測(cè)定吸光度，計(jì)算溶出度。取溶出液適量，采用轉(zhuǎn)速為4 000 r?min離心5 min，取上清液用溶出介質(zhì)稀釋成每1 mL約含纈沙坦16 μg的溶液，作為高速離心法制備溶液。另取溶出液適量，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)稀釋成每1 mL約含纈沙坦16 μg的溶液作為濾膜過(guò)濾液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在250 nm處測(cè)定供試溶液與對(duì)照溶液的吸光度。過(guò)濾法和高速離心法結(jié)果基本一致，說(shuō)明濾膜對(duì)本品無(wú)吸附，結(jié)果見(jiàn)表3。

Table 3 Test results of membrane adsorption

2.2.4 回收率試驗(yàn)

配制限度濃度（16 mg?L-1）的50%、80%和110%的供試溶液各3份，分別測(cè)定其含量，將實(shí)測(cè)值與理論值比較，計(jì)算回收率。稱(chēng)取混合空白輔料16 mg，共9份，分別置于1 000 mL量瓶中，分成3組，每組3份，稱(chēng)取纈沙坦對(duì)照品約8.0、12.8和17.6 mg各3份，精密稱(chēng)定，分別置上述1 000 mL量瓶中，加pH值6.8磷酸鹽緩沖液溶解，過(guò)濾。照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在250 nm處測(cè)定吸光度。本品平均回收率為99.6%，結(jié)果在98.0%～102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）為0.6，小于2.0%，說(shuō)明本法回收率良好，準(zhǔn)確度高，結(jié)果見(jiàn)表4。

Table 4 The recovery of dissolution test

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品適量，以pH值6.8磷酸鹽緩沖液1 000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r?min-1，依法操作，經(jīng)30 min時(shí)，取溶液適量，濾過(guò)，濾液于室溫條件下放置，于0、1、2、4、6、10和12 h精密量取濾液適量，用溶出介質(zhì)稀釋制成每1 mL含16 μg的溶液后取樣測(cè)定。照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在250 nm處測(cè)定吸光度。結(jié)果供試溶液室溫放置的吸光度的RSD值為0.22%，不大于2.0%。說(shuō)明此溶液在室溫條件下12 h內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見(jiàn)表5。

Table 5 The results of solution stability test

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品6片，按照“2.1”條中的溶出度方法測(cè)定，每杯樣品分別取樣6次，分別過(guò)濾測(cè)定，各片樣品溶出度6次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均不大于2.0%，說(shuō)明方法重復(fù)性良好，結(jié)果見(jiàn)表6。

Table 6 The results of repeatability

2.2.7 中間精密度試驗(yàn)

由不同分析人員，不同時(shí)間使用不同的儀器對(duì)同一批樣品進(jìn)行測(cè)試，樣品溶出度平均結(jié)果的偏差不大于5.0%，說(shuō)明方法中間精密度良好，結(jié)果見(jiàn)表7。

Table 7 Theresults of intermediate precision

2.2.8 耐用性試驗(yàn)

2.2.8.1 溶出條件的耐受性試驗(yàn)

考察溶出介質(zhì)體積的變化約±5%，溶出溫度變化±0.5 ℃、轉(zhuǎn)速相對(duì)值變化±5 r?min-1，進(jìn)行測(cè)定時(shí)溶出度的變化情況。耐用性各條件項(xiàng)下的溶出數(shù)據(jù)的RSD值為0.42%，小于2.0%，耐用性良好，結(jié)果見(jiàn)表8。

Table 8 Durability test results of dissolution condition

2.2.8.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的耐用性試驗(yàn)

改變本品的檢測(cè)波長(zhǎng)（250 ± 2）nm，照紫外-可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行測(cè)定，耐用性各條件項(xiàng)下的溶出數(shù)據(jù)的RSD值為0.185%，小于2.0%，耐用性良好，結(jié)果見(jiàn)表9。

Table 9 Durability test results of detection wavelength

2.2.9 溶出均一性試驗(yàn)

取自制樣品（批號(hào)XS1405001）6片，根據(jù)“2.1”條中的溶出度方法，分別在5、10、15、20、30和45 min取樣，測(cè)定各樣品的溶出曲線(xiàn)，確定其溶出均一性。樣品在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的溶出RSD分別為1.8%、1.1%、1.0%、0.94%、0.93%和0.81%，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表10。結(jié)果表明，在pH值6.8介質(zhì)中的本品溶出批內(nèi)均一性良好。

Table 10 The uniformity of dissolution test of self-product

2.2.10 溶出重現(xiàn)性試驗(yàn)

取中試樣品XS1405001、ZS1405002、ZS1405003三批次供試品及上市品B8292YX，每批取6片，于5、10、15、20、30和45 min時(shí)吸取溶出液適量，測(cè)定溶出量，結(jié)果表明產(chǎn)品溶出重現(xiàn)性良好，與上市品相似。

Table 11 The reproducibility of dissolution test of self-product and listed product

3 結(jié)論

在《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版二部及《美國(guó)藥典》USP39中，纈沙坦片均采用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定溶出度。作者根據(jù)兩藥典規(guī)定的溶出條件，采用紫外分光光度法建立了纈沙坦片溶出度的體外分析方法，并系統(tǒng)的進(jìn)行了方法學(xué)研究，驗(yàn)證結(jié)果表明，該方法專(zhuān)屬性、線(xiàn)性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度、耐用性均符合要求，為體外溶出度的檢測(cè)提供科學(xué)合理的試驗(yàn)方法。

[1] 林旭升, 蔣海松, 周建平. 沙坦人鼠在體腸吸收動(dòng)力學(xué)[J]. 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 43(2): 130-136.

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[9] The United States Pharmacopeial Convention. USP39-NF34[M]. USA: 2015: 6325-6326.

Dissolution curve methodology validation of valsartan tablets

DONG Weichang, SUN Jin*

(,,110016,)

To establish a measuring method of the dissolution curve of valsartan tablets.Dissolution conditions: in the pH 6.8 phosphate buffer solution, with the Slurry method of 50 r?min-1and the dissolution sampling time of 30 min. Through the experimental study of linear and scope, solution stability, precision test, repeatability, recovery test, etc., the dissolution method of valsartan tablets was validated.The results of the dissolution verification methodology were good. There was a good linear relationship when the concentration of valsartan tablets were in the range from 1.61 to 17.71 mg?L-1. Linear equation was:=3.17×10-2–0.6×10-3. The test solution was basically stable in 12 hours.The method can accurately determine the dissolution of valsartan tablets.

pharmaceutics; dissolution; slurry method; ultraviolet-visible spectrophotometry; valsartan tablets; validation

2019-03-25

董偉昌(1984-), 男(漢族), 河北石家莊人, 高級(jí)工程師, 主要從事化學(xué)仿制藥研究, Tel. 18531115802, E-mail dongwc2007@163.com;

孫進(jìn)(1975-), 男(漢族), 安徽金寨人, 教授, 博士, 博士生導(dǎo)師, 主要從事藥物新劑型和新技術(shù)研究, Tel. 024-23986325, E-mail sunjin0529@aliyun.com。

R94

A

（2019）05–0178–08

10.14146/j.cnki.cjp.2019.05.004

(本篇責(zé)任編輯：趙桂芝)