蒙藥飲片煨訶子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

敖格日樂圖，孫麗君，肖志彬，王玉華，那生桑

作者單位：1內(nèi)蒙古自治區(qū)國際蒙醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，內(nèi)蒙古自治區(qū) 呼和浩特 010065；2內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古自治區(qū) 呼和浩特 010110

訶子為使君子科植物訶子（Terminalia chebula Retz.）或絨毛訶子（Terminalia chebula Retz.var.tomentella Kurt.）的干燥成熟果實，分布在我國云南、廣西等地［1］，主要含三萜類、鞣質(zhì)類、番瀉苷A、訶子素等化學(xué)成分，具有澀腸止瀉、斂肺止咳、降火利咽的功效。據(jù)《中國藥典》（2015版）及各地方炮制規(guī)范（內(nèi)蒙古、四川、廣西、甘肅等）［2-5］，訶子主要的炮制方法有凈制、切制、煨制、炒制、蒸制、砂燙制、炒炭等。其中，煨制后鞣質(zhì)含量顯著增高，收澀作用增強［6］。前期實驗中，在傳統(tǒng)工藝的基礎(chǔ)上，通過正交試驗已優(yōu)選出訶子面煨制的工藝條件［7-8］，得到不同批次的煨訶子。因此，本實驗自2017年5月至2018年5月對煨訶子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行系統(tǒng)研究，為蒙藥材訶子煨制工藝的規(guī)范化提供了理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器硅膠G薄層板（青島海洋化工有限公司），DV215CD型十萬分之一電子分析天平（奧豪斯儀器上海有限公司），Dionex Ultimate3000型高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技有限公司），KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），AR224CZ電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）。

1.2 試藥訶子藥材按《中國藥典》進(jìn)行檢驗符合訶子項下的有關(guān)規(guī)定；沒食子酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110831-201605）、訶子對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121206-201508）；甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制法在傳統(tǒng)工藝的基礎(chǔ)上［5］，通過正交試驗已優(yōu)選出訶子面煨制的工藝條件，得煨訶子制法。即取訶子，照煨法（本附錄Ⅱ［4］），用面皮包裹約2～3 mm厚，晾至半干，在燙砂中埋煨（410±10）℃，7 min，面皮呈焦黃色時取出（每100 kg訶子，用面粉300 kg）。

2.2 性狀本品形狀如訶子，質(zhì)地較酥脆。具焦香氣，味酸、極澀。

2.3 顯微鑒別本品粉末黃褐色，顯微特征同訶子。粉末中以纖維束、石細(xì)胞、木化厚壁細(xì)胞、靴狀厚壁細(xì)胞以及草酸鈣簇晶為主要顯微特征。見圖1。

圖1 煨訶子粉末顯微特征（×400）：A為纖維束；B為厚壁細(xì)胞；C為石細(xì)胞；D為為簇晶

2.4 薄層色譜鑒別

2.4.1對照藥材的薄層色譜鑒別 取煨訶子粉末，照《中國藥典》（2015年版）訶子項下進(jìn)行薄層色譜鑒別。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。見圖2。

2.4.2沒食子酸的薄層色譜鑒別 取煨訶子（去核）粉末0.5 g，加50%無水乙醇30 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液，蒸干，殘渣用甲醇3 mL溶解，作為供試品溶液。另取沒食子酸對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-冰醋酸-水（12∶10∶0.4）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。結(jié)果見圖3。

圖2 煨訶子薄層鑒別圖：1為煨訶子1（批號：150801；產(chǎn)地：廣西）；2為煨訶子2：（批號：151002313；產(chǎn)地：云南）；3為煨訶子3（批號：1508001；產(chǎn)地：廣東）；4為沒食子酸對照品；5為訶子對照藥材

圖3 煨訶子薄層鑒別圖：1為煨訶子1（批號：150801；產(chǎn)地：廣西）；2為煨訶子2（批號：151002313；產(chǎn)地：云南）；3為煨訶子3（批號：1508001；產(chǎn)地：廣東）；4為沒食子酸對照品

2.5 檢查［3］

2.5.1水分 分別稱取3批次煨訶子粉末約2.0 g，每批2份，照水分測定法（通則0832第二法）進(jìn)行測定。結(jié)果見表1。

表1 煨訶子的水分測定結(jié)果

結(jié)果表明，3批次供試品的水分為7.03%～7.40%，結(jié)合訶子該項下的規(guī)定，故擬定水分為13.0%。

2.5.2總灰分 分別稱取3批次煨訶子粉末約2.0g，每批2份，照灰分測定法（通則2302）進(jìn)行測定。結(jié)果見表2。

表2 煨訶子的灰分測定結(jié)果

結(jié)果表明，3批次供試品的灰分為1.94%～2.88%，結(jié)合訶子該項下的規(guī)定，故擬定灰分為5.0%。

2.5.3浸出物 分別稱取3批次煨訶子（批號見表1）粉末約2.0 g，每批2份，照水溶性浸出物測定法（通則2201）項下的冷浸法測定。結(jié)果見表3。

表3 煨訶子浸出物測定結(jié)果

結(jié)果表明，3批次供試品的水溶性浸出物為42.21%～61.34%，結(jié)合訶子該項下的規(guī)定，故規(guī)定水溶性浸出物不得少于30.0%。

2.6 含量測定

2.6.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱為Apollo C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以甲醇-0.2%磷酸水溶液（8∶92）為流動相；檢測波長為270 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫25℃。理論塔板數(shù)按沒食子酸峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.6.2對照品儲備溶液的制備 取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為0.40 mg/mL的溶液，即得。

2.6.3供試品溶液的制備 稱取本品粉末（過四號篩）約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液25 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.6.4線性關(guān)系考察 精密吸取對照品儲備液4mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度。精密吸取2、5、10、12、15、17、20 –L，分別注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定，記錄各圖譜的沒食子酸峰面積積分值（Y）。以進(jìn)樣量（X：μg）對峰面積積分值（Y）進(jìn)行回歸分析，回歸方程為Y＝35.107X–0.015 7，r＝1。結(jié)果見表4和圖4。

結(jié)果顯示，沒食子酸在0.32～3.2 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

表4 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定數(shù)據(jù)（n＝7）

圖4 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.6.5精密度試驗 取供試品約0.5 g，精密稱定，按“2.6.3”項下方法操作，制備供試品溶液，進(jìn)樣5 μL，按上述色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6針。結(jié)果見表5。

表5 精密度試驗結(jié)果（n＝6）

結(jié)果顯示，RSD＝0.28%（n＝6），表明該方法精密度良好。

2.6.6重復(fù)性試驗 取同一批次的供試品粉末約0.5 g，精密稱定，共6份。分別按“2.6.3”項下方法操作，制備供試品溶液，進(jìn)樣5 μL，按上述色譜條件測定。結(jié)果見表6。

表6 重復(fù)性試驗結(jié)果（n＝6）

結(jié)果顯示，RSD＝1.59%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.6.7穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、12 h測定。結(jié)果見表7。

表7 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

結(jié)果顯示，RSD＝0.31%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.8加樣回收率試驗 取已知含量供試品（批號：1508001）約0.25 g，精密稱定，共6份。精密加入沒食子酸對照品約3.496 mg，照“2.6.3”項下方法操作，測定沒食子酸含量，并計算加樣回收率。結(jié)果見表8。

表8 加樣回收試驗結(jié)果（n＝6）

結(jié)果顯示，該方法平均回收試驗為99.44%，RSD＝1.03%（n＝6），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.6.9樣品含量測定 分別稱取上述3批次煨訶子粉末約0.5 g，精密稱定，按“供試品溶液的制備”方法操作，制備供試品溶液，進(jìn)樣5 μL，按上述色譜條件測定。結(jié)果見表9。

3 討論

3.1 薄層色譜鑒別煨訶子炮制后藥性緩和，澀斂之性增強，主要源于鞣質(zhì)類成分、番瀉苷A等化學(xué)成分的變化，對三萜酸類成分影響較小，故本文以生品訶子對照藥材為對照對其進(jìn)行TLC鑒別，此為方法一。但該法沒有檢出沒食子酸，而沒食子酸為煨訶子主要有效成分，故本文又以沒食子酸對照品為對照對其進(jìn)行TLC鑒別，即方法二。

表9 不同批次煨訶子中沒食子酸含量測定結(jié)果

結(jié)果顯示，3批次供試品中沒食子酸平均含量為0.74%～1.39%，均比訶子原藥材的沒食子酸含量有所提高，考慮到藥材的采收時間、地點不同等因素，擬定為本品按干燥品計算，含沒食子酸（C7H6O5）不得少于0.74%。

3.2 含量測定本研究對煨訶子的提取方法（超聲提取、加熱回流提?。?、提取時間（20 min、30 min、40min）及提取溶劑（甲醇、70%甲醇、50%甲醇）進(jìn)行了選擇。結(jié)果顯示，以甲醇為提取溶劑，超聲提取30 min時效果最佳。

本研究對煨訶子的水分、總灰分、浸出物、顯微鑒別、薄層鑒別、及含量測定等項目進(jìn)行較為系統(tǒng)和全面地研究。其測定方法簡便準(zhǔn)確，方法學(xué)考察表明精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率的范圍均符合要求，故為蒙藥飲片煨訶子的質(zhì)量控制提供了有力的實驗依據(jù)。