初探魚蝦育苗中豐年蟲孵化的標(biāo)準(zhǔn)化操作章程

◆作者：彭張明 陳妃業(yè) 黃明＊ 蒲桂川

◆單位：海南海壹水產(chǎn)種苗有限公司，海南海口571126

豐年蟲的研究自1775年開始，至今已有200多年的歷史。但作為水產(chǎn)動(dòng)物餌料應(yīng)用，是從上世紀(jì)30年代開始的，1933年Seale和Rollefsen先后把豐年蟲初孵的無(wú)節(jié)幼體作為鰈類仔魚和魚苗的活餌料獲得成功。目前商品化的豐年蟲卵已經(jīng)成為海水魚蝦育苗場(chǎng)必備的幼體活餌來(lái)源。一般而言，對(duì)于魚苗早期投喂要選擇個(gè)體小、營(yíng)養(yǎng)含量高的、食性轉(zhuǎn)換階段要使用能夠適合營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的豐年蟲卵，對(duì)蝦苗主要考慮選擇孵化同步性好的豐年蟲卵。豐年蟲卵的孵化率，是豐年蟲整體質(zhì)量好壞的一個(gè)重要指標(biāo)，在魚蝦育苗場(chǎng)中，蟲卵的費(fèi)用占到了育苗餌料成本的50%～70%，因此提高豐年蟲卵的孵化率，穩(wěn)定豐年蟲的產(chǎn)量和質(zhì)量對(duì)企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益意義重大。

影響企業(yè)豐年蟲孵化率的因素眾多，包括采購(gòu)蟲卵自身質(zhì)量、貯藏保存、孵化環(huán)境因子（鹽度、溫度、pH值和光照強(qiáng)度等關(guān)鍵因子）及操作方法（孵化與收集等）等方面，我們通常采購(gòu)的豐年蟲卵俗稱“冬卵”，即其休眠卵，在孵化前需要經(jīng)過外界刺激后才能孵化成無(wú)節(jié)幼體。豐年蟲的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值直接影響苗種生產(chǎn)的成敗與苗種質(zhì)量的優(yōu)劣，穩(wěn)定豐年蟲孵化過程中的蟲體產(chǎn)量和質(zhì)量可以有效保障魚蝦幼體生長(zhǎng)過程中對(duì)優(yōu)質(zhì)活餌的需求，因此豐年蟲的孵化是魚蝦育苗過程中至關(guān)重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。國(guó)內(nèi)外關(guān)于豐年蟲孵化的學(xué)術(shù)研究已有大量報(bào)道，主要集中探究了孵化過程中的生態(tài)因子（包括溫度、鹽度、光照、密度、溶氧量和pH等）、不同品系和產(chǎn)地的豐年蟲卵孵化、豐年蟲去殼和蟲體分離方法以及營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化等方面，使人們?nèi)轿徽J(rèn)識(shí)了豐年蟲孵化的系統(tǒng)知識(shí)，但在實(shí)際操作方面仍缺乏適合魚蝦育苗生產(chǎn)過程中所需的系統(tǒng)化、流程化的標(biāo)準(zhǔn)化章程。該研究通過豐年蟲孵化生產(chǎn)實(shí)踐中的不斷探究，利用現(xiàn)有的豐年蟲孵化研究成果及眾多技術(shù)人員的試驗(yàn)總結(jié)，對(duì)孵化過程中的關(guān)鍵性指標(biāo)及核心操作進(jìn)行提煉和總結(jié)，形成了一套適合魚蝦育苗生產(chǎn)過程的豐年蟲孵化標(biāo)準(zhǔn)化操作章程，以期為豐年蟲的孵化生產(chǎn)提供潛在參考資料，尤其在促進(jìn)從業(yè)人員提高對(duì)豐年蟲孵化的重視程度、推動(dòng)豐年蟲孵化的技術(shù)升級(jí)等方面提供一些可操作的參考意見。

1 豐年蟲卵選擇

1.1 不同豐年蟲卵特性

不同產(chǎn)地、不同加工批次、不同品系及不同時(shí)間的豐年蟲卵，在含水量、含卵率、大小、孵化適宜條件、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、生長(zhǎng)狀況等許多方面都存在差異，使用之前有必要對(duì)其進(jìn)行前期研究和了解，故需要向豐年蟲卵生產(chǎn)廠家及供應(yīng)商充分了解蟲卵的詳細(xì)信息，掌握其孵化的特點(diǎn)。

1.2 不同豐年蟲卵試孵化生產(chǎn)

試孵化生產(chǎn)可采用供應(yīng)商提供蟲卵樣品到場(chǎng)或?qū)σ巡少?gòu)的蟲卵抽樣的方式進(jìn)行，按廠家指導(dǎo)條件進(jìn)行孵化，測(cè)定孵化率及產(chǎn)量，與廠家的指導(dǎo)孵化率和產(chǎn)量進(jìn)行對(duì)比，如果二者數(shù)值很接近則繼續(xù)抽樣試驗(yàn)兩次，待孵化率和產(chǎn)量穩(wěn)定后進(jìn)行下一步采購(gòu)或正式生產(chǎn)使用。

1.3 豐年蟲卵采購(gòu)及貯藏保存

如果試驗(yàn)孵化率與廠家的指導(dǎo)孵化率相差5%以上，則通過與廠家的技術(shù)人員進(jìn)行信息溝通，在廠家的指導(dǎo)孵化條件基礎(chǔ)上進(jìn)行小范圍的改動(dòng)，或者要求廠家派遣技術(shù)人員進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)指導(dǎo)，直到產(chǎn)量和孵化率都很接近指導(dǎo)數(shù)值且穩(wěn)定后再進(jìn)行集中采購(gòu)。所采購(gòu)回的豐年蟲卵要第一時(shí)間放到低溫冷藏庫(kù)或冰柜內(nèi)進(jìn)行密封貯藏保存，保存溫度最好可以在-5℃以下，可有效保持蟲卵穩(wěn)定的孵化速率、孵化率和孵化產(chǎn)量，一般可保存2～3年以上?？照{(diào)房間溫度16℃保存的蟲卵則要在15天內(nèi)用完，溫度超過28℃保存的卵則應(yīng)當(dāng)在3天內(nèi)使用完畢。

2 豐年蟲孵化前準(zhǔn)備工作

2.1 每日孵化計(jì)劃

根據(jù)育苗生產(chǎn)過程中的豐年蟲需求量，依據(jù)每個(gè)批次豐年蟲卵的孵化周期制定每日的孵化計(jì)劃，合理利用孵化場(chǎng)地，最大程度保障育苗生產(chǎn)所需的活餌供應(yīng)。如果計(jì)劃過剩，推薦使用冰格對(duì)豐年蟲無(wú)節(jié)幼體進(jìn)行冰凍保存，或進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化培養(yǎng)，以適用育苗不同階段對(duì)生物餌料形式的需求。

2.2 孵化車間與孵化桶（池）清洗消毒

孵化車地面、排水道用有效濃度為0.3mL·L-1的漂白水溶液全面潑灑消毒，再用淡水沖洗干凈；用高壓水槍全面沖洗干凈孵化桶（池），然后用10L淡水+有效濃度10%的碘液50mL+洗潔精2～5mL制成的混合溶液徹底刷洗消毒孵化桶（池），用淡水沖洗干凈。環(huán)形納米管或納米盤浸泡4g·L-1草酸溶液中1h以上，然后用淡水沖洗干凈。

2.3 充氣裝置設(shè)計(jì)

環(huán)形納米管或納米盤充氣裝置包括PVC管、異徑三通、納米管、圓柱沙頭、軟管，其中異徑三通上口連接在PVC管上，異徑三通左口與右口與納米管連接，圓柱沙頭的進(jìn)氣口與軟管連接，環(huán)形納米管或納米盤距離孵化桶底部約15cm，圓柱沙頭置于桶底中心；若是孵化池，則可以在池底每0.5m間隔距離布一根納米管，或者每一平方均勻放置1個(gè)納米盤。利用環(huán)形納米管或納米盤可有效形成水流的旋轉(zhuǎn)和上下流動(dòng)，水體溶氧量充分且均勻，可保持 5mg·L-1，同時(shí)使豐年蟲卵能隨著水流運(yùn)動(dòng)到水面接受光照，提高孵化率。

2.4 孵化用水準(zhǔn)備

2.4.1 水質(zhì)指標(biāo)調(diào)節(jié)

孵化用水需經(jīng)氯處理消毒、沉淀凈化流程，最好與育苗生產(chǎn)用水處理方法一致，鹽度保持25‰～35‰，一般根據(jù)廠家指導(dǎo)鹽度來(lái)確定海水的具體鹽度，總堿 度 保 持 120～180，pH 保 持8.3～8.8，檢測(cè)水中余氯含量為0，若存在余氯用硫代硫酸鈉進(jìn)行中和。水質(zhì)指標(biāo)調(diào)節(jié)時(shí)首先確定鹽度，若pH偏低，則加生石灰提高pH，加入生石灰需用250目網(wǎng)過濾溶解，最后加小蘇打（碳酸氫鈉）調(diào)節(jié)總堿，充氣充分混合均勻后，停氣沉淀備用。

2.4.2 進(jìn)水調(diào)溫

孵化用水需要提前加入孵化桶準(zhǔn)備，加水時(shí)所有桶都保持相同的水位，并將溫度調(diào)節(jié)至孵化適合范圍，如低溫卵孵化溫度為27～28.5℃，則將溫度加溫到28.5℃，高溫季節(jié)孵化水溫度會(huì)自然上升的話，則將溫度加到下限27.5℃；如高溫卵孵化溫度28～30℃，則將溫度加到 28℃。在整個(gè)孵化過程中，要保持對(duì)溫度的觀察與控制，期間加溫則使用鍋爐加溫或自動(dòng)控溫儀，降溫則有恒溫機(jī)的使用，從而保證孵化過程的溫度范圍。

3 豐年蟲卵孵化前預(yù)處理

3.1 蟲卵常溫解凍

在孵化前至少4～24h就應(yīng)將低溫貯藏保存的豐年蟲卵移置通風(fēng)、避光及室溫保持在25℃以內(nèi)的地方解凍，使蟲卵溫度緩慢升高，可以獲得理想的孵化效果。

3.2 蟲卵淡水浸泡

將豐年蟲卵放入26～28℃淡水中浸泡1.5～2h，浸泡過程保持充氣攪動(dòng)。淡水與蟲卵質(zhì)量的比例約為 4～5L·kg-1，使蟲卵充分吸水，刺激休眠卵的胚胎萌發(fā)，縮短孵化時(shí)間，加快孵化速度。

3.3 蟲卵消毒殺菌

將浸泡淡水后的蟲卵加入有效濃度0.3g·L-1漂粉精藥液中浸洗蟲卵10～15min，保持充氣攪動(dòng)，殺滅病原，消毒殺菌。用150目撈網(wǎng)收集蟲卵，收集好用淡水沖洗后，再放入100L濃度20g·L-1的硫代硫酸鈉溶液中，充氣或輕微攪拌中和1min，然后沖水3～5min，將殘留的硫代硫酸鈉沖洗干凈。

4 孵化及孵化管理

4.1 匹配孵化劑

開啟充氣開關(guān)，首先將PVC管插住孵化桶收集管（防止卵沉積在底部死亡），通常遵循先放孵化劑，后放蟲卵的順序，根據(jù)廠家提供孵化劑的指導(dǎo)用量，先計(jì)算該批次孵化用水的總量，再計(jì)算并準(zhǔn)確稱取孵化劑的用量，過250目網(wǎng)袋溶解過濾，然后均分到每個(gè)孵化桶內(nèi)。推薦通過孵化試驗(yàn)，得出最適的孵化劑添加濃度，以達(dá)成最優(yōu)孵化效果。

4.2 放卵

打開孵化桶上方的燈光，放卵時(shí)將豐年蟲卵的孵化密度控制在 1.0～1.6g·L-1，根據(jù)孵化桶的水體，將處理好的豐年蟲卵通過56目網(wǎng)過濾后放入孵化桶內(nèi)（防止蟲卵結(jié)塊造成死卵）。

4.3 光照與溫度管理

光照強(qiáng)度 1500～2000lux，光照周期為豐年蟲在桶內(nèi)的孵化時(shí)間，光照有利于豐年蟲的胚胎發(fā)育和破膜孵出，光照時(shí)間越長(zhǎng)，孵化率越高。孵化期間保持孵化水溫在適宜范圍內(nèi)，最好使用自動(dòng)控溫儀控制桶內(nèi)溫度，高溫天氣使用恒溫機(jī)降溫。

4.4 孵化時(shí)間

豐年蟲卵孵化時(shí)間一般控制在24h，其中包含淡水浸泡時(shí)間，例如對(duì)蝦育苗場(chǎng)孵化時(shí)間：小蟲卵孵化24h，大蟲卵孵化22h，對(duì)蝦標(biāo)粗場(chǎng)孵化時(shí)間：小蟲卵孵化26h，大蟲卵孵化24h，不同的蟲卵可以根據(jù)測(cè)定實(shí)際掛傘率來(lái)做孵化時(shí)間的調(diào)整。

4.5 孵化率與產(chǎn)量跟蹤

孵化率測(cè)定是在豐年蟲卵孵化結(jié)束后在孵化桶中抽樣鏡檢，用虹吸管在每個(gè)桶內(nèi)吸取3個(gè)樣品，每個(gè)樣品中大約為100個(gè)無(wú)節(jié)幼體、掛傘個(gè)體和未孵化的蟲卵，將樣品過濾移置濾紙上，在體式顯微鏡下分別計(jì)數(shù)無(wú)節(jié)幼體數(shù)，計(jì)算出平均值N，掛傘個(gè)體和未孵化蟲卵總數(shù)，計(jì)算平均值C。計(jì)算公式如下：

產(chǎn)量測(cè)定是在豐年蟲收集消毒后，置于200目撈網(wǎng)中，濾干多余的水后靜置到底部流出的水滴水不成線，然后準(zhǔn)確稱量蟲體，根據(jù)孵化的蟲卵重量，計(jì)算平均產(chǎn)量。記錄每一批次生產(chǎn)的出蟲量，并及時(shí)匯總。

5 豐年蟲收集及營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化

5.1 收集步驟

5.1.1 封蓋遮光

孵化結(jié)束后，將孵化桶內(nèi)的納米管或納米盤、自動(dòng)控溫儀或加溫管沖洗后取出，關(guān)閉上方的燈光，然后遮光封蓋，再開啟車間四周的燈光。

5.1.2 第一次收蟲

遮光30min后進(jìn)行第一次收蟲，收蟲時(shí)用80目網(wǎng)收集豐年蟲殼，200目網(wǎng)收集豐年蟲無(wú)節(jié)幼體，雙網(wǎng)重疊放置，200目網(wǎng)在80目網(wǎng)外部，收蟲時(shí)孵化桶的排水開關(guān)開20～30°角，防止水流太大，當(dāng)水流清澈的時(shí)候停止收蟲，將兩個(gè)撈網(wǎng)和蟲一起使用淡水沖洗干凈，并確認(rèn)80目網(wǎng)中的蟲殼中沒有無(wú)節(jié)幼體，將無(wú)節(jié)幼體統(tǒng)一集中在一個(gè)桶內(nèi)。

5.1.3 重復(fù)收蟲

每間隔20min后分別進(jìn)行第二次和第三次收蟲，操作重復(fù)如第一次。

5.2 蟲殼、死卵分離

收好蟲之后倒入分離桶中，加淡水，控制蟲與水的比例約1∶4，使用每升淡水加入18mL30%濃度雙氧水，并攪拌均勻，遮光靜置5min后，將浮在水面上層的蟲殼、死卵去除，一般重復(fù)分離2～3次可分離干凈，之后用淡水沖洗完雙氧水。

5.3 消毒投喂及保存

進(jìn)行活蟲投喂魚蝦幼體時(shí)，推薦使用有效濃度為0.05g/·L-1聚維酮碘溶液進(jìn)行消毒，消毒時(shí)間10min，然后用淡水沖洗干凈即可進(jìn)行投喂，若有投喂剩余的活蟲，或需要對(duì)蟲體保存?zhèn)溆?，推薦使用冰格進(jìn)行速凍，然后貯藏在-5～0℃環(huán)境中。

5.4 營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化方法

由于豐年蟲的營(yíng)養(yǎng)組成存在地域性差異，尤其在脂肪酸組成上存在較大差異，豐年蟲是優(yōu)質(zhì)的蛋白源，但作為魚蝦等水產(chǎn)動(dòng)物的餌料，其營(yíng)養(yǎng)還不夠全面，因此可以通過營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的手段，讓餌料中的脂肪酸來(lái)影響豐年蟲體內(nèi)的脂肪酸含量及組成。目前較為常用的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化方法包括：其一，利用富含多不飽和脂肪酸（PUFAs）（如 EPA、DHA）的海洋微藻投喂豐年蟲，豐年蟲無(wú)節(jié)幼體開口后強(qiáng)化12h，其中金藻、裂壺藻]強(qiáng)化效果顯著；其二，利用商用強(qiáng)化劑，如富含高度不飽和脂肪酸（HUFA）的魚油和乳化油、DC DHA SELCO豐年蟲強(qiáng)化劑以及微藻干粉等，在豐年蟲孵化24h，無(wú)節(jié)幼體開口后強(qiáng)化12h。

6 總結(jié)與展望

豐年蟲作為魚蝦育苗必不可少的生物餌料，具有舉足輕重的作用，本文從對(duì)蝦育苗企業(yè)孵化豐年蟲的基本操作方法出發(fā)，以實(shí)際生產(chǎn)為根本，初步探究了豐年蟲孵化的標(biāo)準(zhǔn)化操作章程，以期為魚蝦育苗企業(yè)豐年蟲的孵化生產(chǎn)提供參考資料。豐年蟲的人工孵化，是一個(gè)相對(duì)復(fù)雜的環(huán)境體系，受到多種因素的影響，文中的操作章程仍存在一定的缺陷和不足，例如章程中的許多數(shù)據(jù)都是以生產(chǎn)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)、保證安全生產(chǎn)為基準(zhǔn)，或許稍欠學(xué)術(shù)嚴(yán)謹(jǐn)性，另外本章程針對(duì)的豐年蟲卵是沒有經(jīng)過脫殼的，收集分離的操作相對(duì)偏繁瑣，但操作流程簡(jiǎn)單、安全，相比豐年蟲卵脫殼，則要在操作技巧上、脫殼成本等方面進(jìn)行綜合考量。豐年蟲卵脫殼、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化及消毒投喂已然被行業(yè)廣為熟知，但仍有待進(jìn)一步探究和優(yōu)化的方面，如豐年蟲的病原攜帶及傳播，尤其是對(duì)蝦育苗企業(yè)關(guān)注的肝腸孢蟲（EHP），近來(lái)一些以豐年蟲為原料的部分蝦苗餌料可以檢測(cè)出EHP陽(yáng)性，對(duì)培育無(wú)攜帶特定病原（SPF）蝦苗造成了極大的威脅，對(duì)此需要引起行業(yè)高度重視。

參考文獻(xiàn)：（略）