轉(zhuǎn)染bFGF基因的BMSCs移植對(duì)急性心肌梗死大鼠再灌注損傷的影響及機(jī)制探討

王倩，任琳，張鵬宇，李芳，楊桂鳳

急性心肌梗死（AMI）是造成心力衰竭的重要病因，AMI可導(dǎo)致心肌細(xì)胞產(chǎn)生不可逆損傷，且心肌細(xì)胞較難有效自我增殖和修復(fù)[1]。目前，AMI主要治療手段包括藥物干預(yù)、冠狀動(dòng)脈（冠脈）旁路移植術(shù)、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（PCI）均可恢復(fù)缺血后再灌注，但仍不能有效修復(fù)已受損心肌細(xì)胞，正常心功能較難恢復(fù)[2]。因此，亟需尋找有效治療方法，以減輕AMI再灌注損傷、改善心功能。近年來(lái)，隨著生物工程技術(shù)的不斷發(fā)展，干細(xì)胞移植技術(shù)逐漸得到關(guān)注和重視。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）具有多向分化潛能，通過(guò)應(yīng)用誘導(dǎo)劑使其分化為心肌細(xì)胞，治療AMI再灌注后所致心功能不全，但其效果仍存在爭(zhēng)議[3]。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）在多種細(xì)胞增殖、分化中起重要作用，且與心肌細(xì)胞受損后修復(fù)關(guān)系緊密[4]。因此，本研究將PBR322-bFGF質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至BMSCs中，觀察轉(zhuǎn)染bFGF基因的BMSCs移植對(duì)AMI再灌注后心功能、炎癥反應(yīng)及心肌細(xì)胞凋亡的影響，為臨床中利用干細(xì)胞移植治療AMI再灌注損傷奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)雄性SD大鼠，48只，4周齡，體質(zhì)量90～110 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)SCXK（京）2016-0001，小鼠均自由攝食（普通飼料）、飲水，飼養(yǎng)于（24±1）℃，60%恒濕、12 h/12 h明暗循環(huán)條件下。

1.1.2 主要試劑和儀器質(zhì)粒PBR322-bFGF（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院）、低糖DMEM培養(yǎng)基（GIBCO公司）、胎牛血清（Hyclone公司），大鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-10（IL-10）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒（R&D公司），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Takara公司），BCA蛋白定量分析試劑盒（Thermo公司），小鼠抗大鼠CD90、CD105、CD34、CD45單抗（Biolegend公司），兔抗大鼠bFGF多抗，MM-9單抗、TIMP-1多抗（Santa Cruz），HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG抗體（Sigma）；DH-150動(dòng)物呼吸機(jī)（浙大醫(yī)學(xué)儀器廠），ECG-6511型心電圖儀（上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司），DSX100光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯公司），RM2245徠卡切片機(jī)（Leica公司），3550UV酶標(biāo)儀、7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、PE2400電泳儀、CheniDoc XRS化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)（Bio-rad公司）。

1.2 方法

1.2.1 BMSCs體外分離及培養(yǎng)大鼠引頸處死后，無(wú)菌條件取股骨及脛骨，去除兩端干骺端，用低糖DMEM培養(yǎng)基反復(fù)沖洗骨髓腔，1000 rpm離心5 min后棄去上清，DMEM重懸后加入淋巴細(xì)胞分離液，采用密度梯度離心法獲取純化細(xì)胞，接種至DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）、37℃、5%CO2、飽和濕度下培養(yǎng)，取第3代BMSCs細(xì)胞，消化后調(diào)整細(xì)胞密度至1×106個(gè)/ml，接種于含有蓋玻片的細(xì)胞培養(yǎng)板中，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞成單層生長(zhǎng)時(shí)取出蓋玻片，洗滌3次后與95%酒精中固定15 min，洗滌后3%過(guò)氧化氫服用10 min，加入蛋白阻斷劑室溫封閉10 min，甩掉阻斷劑后滴加鼠抗CD90、CD105、CD34、CD45抗體4℃搖床孵育過(guò)夜，加入FITC標(biāo)記羊抗兔二抗避光孵育30 min，洗滌后晾干，甘油封片后置于纖維鏡下觀察，選擇CD90+、CD105+，CD34-、CD45-即為骨髓BMSCs細(xì)胞。

1.2.2 質(zhì)粒bFGF轉(zhuǎn)染BMSCs采用lipofectamine 2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，將純化的bFGF質(zhì)粒、脂質(zhì)體及BMSCs細(xì)胞混勻后，置于37℃、5%CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)6 h，換液后繼續(xù)培養(yǎng)36 h，將培養(yǎng)液換為含5 mg/L的Blasticidin培養(yǎng)基孵育過(guò)夜，之后每3～4 d換液1次（含5 mg/L的Blasticidin），經(jīng)10～12 d篩選后，獲得轉(zhuǎn)染bFGF基因的BMSCs細(xì)胞（經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)法鑒定BMSCs轉(zhuǎn)染bFGF成功）。進(jìn)行移植前，加入50 mg/L的BrdU同條件培養(yǎng)48 h進(jìn)行標(biāo)記。

1.2.3 急性心肌梗死（AMI）再灌注模型建立及分組干預(yù)取40只大鼠，其中30只用2.5%戊巴比妥鈉麻醉后，四肢連接心電圖檢測(cè)儀，氣管插管連接實(shí)驗(yàn)動(dòng)物呼吸機(jī)給予正壓通氣，于左胸第4肋間開(kāi)胸，乳突牽開(kāi)器牽開(kāi)肋骨，暴露心臟，6-0無(wú)創(chuàng)帶針縫合針從左冠狀動(dòng)脈前降支穿過(guò)，進(jìn)針深度約1.5 mm，在縫合線下放置直徑為2.0 mm的聚乙烯管進(jìn)行結(jié)扎，當(dāng)心電圖出現(xiàn)ST弓背向上型抬高提示AMI成功，100 min后剪短結(jié)扎線恢復(fù)血供，出現(xiàn)再灌注性心律失常，且結(jié)扎線以下動(dòng)脈充盈并由搏動(dòng)提示AMI再灌注造模成功[5]，將造模成功大鼠按照隨機(jī)數(shù)表法分為模型組、BMSCs組、BMSCs+bFGF組，模型組在梗死周邊心外膜區(qū)用微量注射器分4點(diǎn)注射DMEM培養(yǎng)基，每點(diǎn)200 μl，BMSCs組同部位注射等量未轉(zhuǎn)染BMSCs，BMSCs+bFGF組同部位注射等量轉(zhuǎn)染bFGF的BMSCs。其余10只大鼠同前手術(shù)操作步驟，僅穿線不結(jié)扎持續(xù)100 min，設(shè)為假手術(shù)組，在心臟同位置分點(diǎn)注射培養(yǎng)基。術(shù)后逐層縫合切口，呼吸平穩(wěn)后拔出氣管插管，常規(guī)給予抗生素預(yù)防感染。操作過(guò)程中死亡大鼠采用同期飼養(yǎng)大鼠補(bǔ)入。

1.2.4 心功能檢測(cè)術(shù)后4周，異氟烷麻醉大鼠，采用多普勒超聲儀進(jìn)行心臟超聲檢查，記錄各組大鼠左心室舒張末期內(nèi)徑（LVIDd）、收縮末期內(nèi)徑（LVIDs）、縮短分?jǐn)?shù)（FS）、射血分?jǐn)?shù)（EF）。所有檢測(cè)值均取4個(gè)心動(dòng)周期的平均值。

1.2.5 血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平檢測(cè)術(shù)后4周，大鼠眼眶采血5 ml，3000 rpm離心10 min，取上層血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)各組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-10含量，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟操作，酶標(biāo)儀檢測(cè)450、460、462 nm處吸光度值，設(shè)570 nm為校正波長(zhǎng)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清TNF-α、IL-1β、IL-10含量。

1.2.6 心肌組織病理學(xué)觀察術(shù)后4周后，處死大鼠后立即開(kāi)腹暴露心臟，取緊靠左心室前側(cè)壁心肌組織，放入4%多聚甲醛固定24，常規(guī)酒精梯度脫水、石蠟包埋后，制作4 mm連續(xù)切片。切片經(jīng)二甲苯脫蠟后、酒精梯度水化，采用常規(guī)蘇木精-伊紅染色法（HE）進(jìn)行染色，中性樹(shù)膠封片后觀察心肌組織病理學(xué)變化。

1.2.7 心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）檢測(cè)術(shù)后4周處死大鼠，取心臟制作常規(guī)石蠟切片，切片常規(guī)脫蠟、水化后，滴加3%的過(guò)氧化氫孵育5 min，然后加入蛋白酶K于37℃孵育30 min，滴加pH6.0枸櫞酸鹽緩沖液進(jìn)行高壓修復(fù)1.5 min。嚴(yán)格按照TUNEL檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作：每張切片滴加TUNEL反應(yīng)液混合液25 μl，37℃避光孵育1 h，洗滌后，滴加DAB顯色液100 μl室溫孵育3 min，蘇木精核染1 min、鹽酸乙醇分化1～3 s、碳酸鋰返藍(lán)20 s，晾干后中性樹(shù)脂封片，光鏡下觀察，每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野拍照，用應(yīng)用Image Pro Puls 6.0軟件分析，計(jì)算AI=陽(yáng)性細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.2.8 bFGF、MMP-9、TIMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)處死小鼠取心臟組織，加入液氮并研磨后，Trizol法提取組織中總RNA。用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將mRNA逆轉(zhuǎn)錄cDNA。產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳法鑒定后，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)設(shè)定反應(yīng)體系：SYBR Premix Ex Taq 12.5 μl，10 μmol/L上下游引物各0.5 μl，cDNA 2 μl，ddH2O 9.5 μl；反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性2 min；94 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)。以β-actin為管家基因，2-△△CT為目的基因的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度，所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取Ct平均值。采用凝膠成像系統(tǒng)測(cè)定bFGF、MMP-9、TIMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量。bFGF：上游引物：5'-GCTAGCTGATCGTAGTC GTACGT-3'；下游引物：5'-CTATCGTACGTA GCTAGCTAGTCG-3'；MMP-9：上游引物：5'-ATCGATCGATCTCGTATCTGTATC-3'；下游引物：5'-CGTAGCTAGCTAGCTGTACGTAT-3'；TIMP-1：上游引物：5'-CGTAGCTAGCTAGCTA TCGTACA-3'；下游引物：5'-GTCAGTCGATG CTAGCTAGCTAG-3'；β-actin：上游引物：5'-CTGACTAGTCGTACGTAGCTACA-3'；下游引物：5'-CGTAGCTGATCGTATCGTAGCTC-3'。

1.2.9 bFGF、MMP-9、TIMP-1蛋白相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)取75 mg左右心肌組織，液氮中研磨后轉(zhuǎn)至離心管，加入0.5 ml細(xì)胞裂解液，置于100℃水浴中10 min，離心后取上清液，二喹啉甲酸（BCA）法進(jìn)行蛋白定量。取60 μg樣品加入等體積上樣緩沖液混勻后，100 ℃水浴加入3 min，12 000 rpm離心10 min取上清液，進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳（SDS-PAGE）電泳分離，電轉(zhuǎn)儀電轉(zhuǎn)40 min，加入封閉液室溫?fù)u床2 h，加入封閉液稀釋一抗（1:500），4 ℃搖床孵育過(guò)夜，加入封閉液稀釋二抗（1:10000），常溫孵育0.5 h，暗室中曝光、顯影及定影。應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)掃描并進(jìn)行灰度值分析，以bFGF、MMP-9、TIMP-1蛋白灰度值與內(nèi)參β-actin灰度值比值表示蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3 觀察指標(biāo)①BMSCs細(xì)胞分離及鑒定結(jié)果；②心功能指標(biāo)對(duì)比；③血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平對(duì)比；④心肌組織病理學(xué)觀察及AI對(duì)比；⑤ bFGF、MMP-9、TIMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量、MMP-9/TIMP-1值對(duì)比；⑥bFGF、MMP-9、TIMP-1蛋白相對(duì)表達(dá)量、MMP-9/TIMP-1值對(duì)比。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)分析處理，計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，心功能、血清炎性因子、AI、基因及蛋白的相對(duì)表達(dá)量多樣本計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，兩兩樣本比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BMSCs細(xì)胞分離及鑒定結(jié)果原代BMSCs培養(yǎng)第3 d開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，呈多邊形或紡錘形，傳代培養(yǎng)至第3代時(shí)體積增大，呈長(zhǎng)梭行，大小均一。免疫細(xì)胞熒光法鑒定BMSCs特征表型，CD90、CD105陽(yáng)性表達(dá)率分別為96.03%、95.44%，CD34、CD45均呈陰性表達(dá)，符合BMSCs的典型特征表型（圖1～2）。

圖1 BMSCs分離培養(yǎng)形態(tài)學(xué)觀察

圖2 BMSCs表面特征抗原鑒定（×200）（圖A：CD90；圖B：CD105；圖C：CD34；圖D：CD45）

2.2 心功能指標(biāo)對(duì)比LVIDd、LVIDs組間比較，假手術(shù)組最低、BMSCs+bFGF組其次、BMSCs組稍高、模型組最高，每?jī)山M間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），EF、FS組間比較，假手術(shù)組最高、BMSCs+bFGF組其次、BMSCs組稍低、模型組最低，每?jī)山M間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

2.3 血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平對(duì)比血清TNF-α、IL-1β水平組間比較，假手術(shù)組最低、BMSCs+bFGF組其次、BMSCs組稍高、模型組最高，每?jī)山M間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），IL-10組間比較，BMSCs+bFGF組最高、BMSCs組其次、模型組稍低、假手術(shù)組最低，每?jī)山M間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。

2.4 心肌組織病理學(xué)觀察及AI對(duì)比AI組間比較，假手術(shù)組最低、BMSCs+bFGF組其次、BMSCs組稍高、模型組最高，每?jī)山M間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表3、圖3～4）。

2.5 bFGF、MMP-9、TIMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量、MMP-9/TIMP-1值對(duì)比bFGF、TIMP-1

表1 心功能指標(biāo)對(duì)比（x±s）

表2 血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平對(duì)比（x ±s，pg/ml）

表3 AI對(duì)比（x±s）

圖3 心肌組織HE染色（×400）（a～d分別為假手術(shù)組、模型組、BMSCs組、BMSCs+bFGF組）

圖4 心肌組織TUNEL染色（×400）（A～D分別為假手術(shù)組、模型組、BMSCs組、BMSCs+bFGF組）

mRNA相對(duì)表達(dá)量組間比較，BMSCs+bFGF組最高、BMSCs組其次、模型組稍低、假手術(shù)組最低，每?jī)山M間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MMP-9 mRNA相對(duì)表達(dá)量、MMP-9/TIMP-1值組間比較，假手術(shù)組最低、BMSCs+bFGF組其次、BMSCs組稍高、模型組最高，每2組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表4）。

2.6 bFGF、MMP-9、TIMP-1蛋白相對(duì)表達(dá)量、MMP-9/TIMP-1值對(duì)比bFGF、TIMP-1蛋白相對(duì)表達(dá)量組間比較，BMSCs+bFGF組最高、BMSCs組其次、模型組稍低、假手術(shù)組最低，每2組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MMP-9蛋白相對(duì)表達(dá)量、MMP-9/TIMP-1值組間比較，假手術(shù)組最低、BMSCs+bFGF組其次、BMSCs組稍高、模型組最高，每2組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖5～6。

表4 bFGF、MMP-9、TIMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量、MMP-9/TIMP-1值對(duì)比（x±s）

3 討論

圖5 蛋白免疫印跡圖

圖6 bFGF、MMP-9、TIMP-1蛋白相對(duì)表達(dá)量、MMP-9/TIMP-1值對(duì)比

心肌細(xì)胞對(duì)缺血、缺氧及氧化應(yīng)激等多種應(yīng)激十分敏感，且心肌細(xì)胞的再生和自我修復(fù)能力差，AMI后再灌注時(shí)由于心肌細(xì)胞受到再灌注血流的應(yīng)激，可再次誘發(fā)多種病理反應(yīng)，最終可導(dǎo)致AMI后存活的部分細(xì)胞再次死亡[6,7]。因此，在對(duì)AMI后患者進(jìn)行再灌注治療時(shí)，應(yīng)選用有效的預(yù)防性手段，減少心肌細(xì)胞凋亡，保護(hù)患者正常心功能，對(duì)患者預(yù)后意義重大。BMSCs來(lái)源于中胚層，具有遺傳穩(wěn)定、多向分化、免疫耐受及旁分泌等多種生物學(xué)活性，且BMSCs可自體取材，排異風(fēng)險(xiǎn)低，臨床應(yīng)用較易實(shí)現(xiàn)，在細(xì)胞移植治療方面具有較大優(yōu)勢(shì)[8]。

本研究發(fā)現(xiàn)，免疫細(xì)胞熒光法鑒定BMSCs出現(xiàn)CD90、CD105陽(yáng)性表達(dá)，CD34、CD45陰性表達(dá)的典型特征表型，提示成功分離獲得BMSCs。LVIDd、LVIDs、TNF-α、IL-1β、AI比較，假手術(shù)組最低、BMSCs+bFGF組其次、BMSCs組稍高、模型組最高（P＜0.05），F(xiàn)S、EF比較與上述結(jié)果相反（P＜0.05）；IL-10比較，BMSCs+bFGF組最高、BMSCs組其次、模型組稍低、假手術(shù)組最低（P＜0.05），提示轉(zhuǎn)染-bFGF質(zhì)粒的BMSCs可顯著改善AMI后再灌注大鼠的心功能、緩解炎癥反應(yīng)，并且可減少心肌細(xì)胞凋亡。研究證實(shí)[9]，在心肌局部注射BMSCs后，處于局部心臟微環(huán)境的BMSCs可被誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞，其功能與機(jī)體原有心肌細(xì)胞相似，進(jìn)而改善心功能。bFGF是一種有絲分裂原，可促進(jìn)血管生成及創(chuàng)傷修復(fù)，應(yīng)用轉(zhuǎn)染bFGF基因的BMSCs，使心肌組織中分泌更多bFGF，有效改善心臟微環(huán)境，更利于干細(xì)胞定向分化，改善心功能[10]。bFGF可通過(guò)促進(jìn)各種炎性細(xì)胞的粘附和趨化，調(diào)節(jié)炎癥因子浸潤(rùn)部位，有效抑制AMI再灌注損傷產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)，降低炎癥因子TNF-α、IL-1β合成，增加IL-10的合成和分泌，緩解炎癥反應(yīng)[11]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明[12]，在大鼠AMI后給予bFGF，可顯著減輕缺血再灌注損傷，可能是bFGF促進(jìn)血管生成，血管密度增加可對(duì)抗氧化應(yīng)激的緣由，進(jìn)而減少心肌細(xì)胞凋亡和壞死。轉(zhuǎn)染bFGF基因的BMSCs移植后，BMSCs與bFGF共同促進(jìn)AMI再灌注后心功能恢復(fù)，并且可緩解缺血再灌注損傷。

M M P-9 m R N A和蛋白相對(duì)表達(dá)量、MMP-9/TIMP-1值組間比較，假手術(shù)組最低、BMSCs+bFGF組其次、BMSCs組稍高、模型組最高（P＜0.05）；bFGF、TIMP-1 mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量組間比較，BMSCs+bFGF組最高、BMSCs組其次、模型組稍低、假手術(shù)組最低（P＜0.05），提示轉(zhuǎn)染-bFGF質(zhì)粒的BMSCs對(duì)大鼠AMI再灌注損傷的保護(hù)作用可能與心肌組織bFGF水平上調(diào)、MMP-9/TIMP-1旁分泌機(jī)制有關(guān)。MMP-9屬于鋅離子依賴(lài)的內(nèi)切蛋白水解酶家族重要成員之一，在心室重構(gòu)中起關(guān)鍵作用[13]。TIMP-1是一種低分子量蛋白，含有N端和C端功能區(qū)，兩端分別與MMP-9鋅離子活性中心區(qū)及其他部位結(jié)合，形成非共價(jià)鍵復(fù)合物，阻斷MMP-9與其相應(yīng)底物結(jié)合，抑制細(xì)胞外基質(zhì)降解[14]。生理狀況下，MMP-9與TIMP-1間處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，共同維持細(xì)胞外基質(zhì)平衡，AMI再灌注時(shí)產(chǎn)生缺血再灌注損傷，MMP-9大量表達(dá)，心肌細(xì)胞外基質(zhì)過(guò)度降解，大量炎性細(xì)胞在細(xì)胞間隙游走，TNF-α、IL-1β等炎癥因子分泌增加[15]。移植轉(zhuǎn)染bFGF基因的BMSCs后，一方面直接上調(diào)bFGF表達(dá)，另外BMSCs可通過(guò)旁分泌作用促進(jìn)bFGF分泌，bFGF水平升高，促進(jìn)心肌細(xì)胞外基質(zhì)平衡，進(jìn)而調(diào)節(jié)MMP-9與TIMP-1恢復(fù)平衡狀態(tài)，細(xì)胞外基質(zhì)代謝恢復(fù)正常，心肌組織炎癥反應(yīng)得以緩解，心肌組織微環(huán)境改善，減少心肌細(xì)胞凋亡，也利于干細(xì)胞定植和分化為類(lèi)心肌細(xì)胞[16]。因而，轉(zhuǎn)染-bFGF質(zhì)粒的BMSCs對(duì)大鼠AMI再灌注損傷的保護(hù)作用可能與旁分泌機(jī)制有關(guān)。

綜上所述，轉(zhuǎn)染-bFGF質(zhì)粒的BMSCs可顯著改善AMI后再灌注大鼠的心功能、緩解炎癥反應(yīng)，并且可顯著減少心肌細(xì)胞凋亡，可能與bFGF水平上調(diào)、調(diào)控MMP-9/TIMP-1旁分泌機(jī)制有關(guān)，為臨床中利用干細(xì)胞移植治療AMI再灌注損傷奠定理論基礎(chǔ)。