黃牛茶根醇提物的抗炎作用研究

唐周一豆，覃驪蘭

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530200）

黃牛茶為藤黃科黃牛木屬植物黃牛木Cratoxylon ligustrinum（Spach）Blume.的嫩葉、根或樹皮，別名為黃芽木，主產(chǎn)于廣西金秀、平南、桂平、北流、龍州、武鳴、隆安、靖西等地，來源廣泛［1-2］。據(jù)記載，黃牛茶葉含黃酮苷、酚類、糖類，根含黃酮苷、酚類、氨基酸［3］。筆者在前期預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃牛茶根部的抗炎活性較好，故通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討其抗炎作用，為黃牛茶的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器及試劑 Secura225D-1CN型萬分之一電子天平（德國賽多利斯）；N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（德國Heidolph）；1～100μl型移液槍（德國Eppendorf公司）；小鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：H052）。

1.2 藥物 黃牛茶，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定為藤黃科黃牛木屬植物黃牛木Cratoxylon ligustrinum（Spach）Blume.的根；醋酸地塞米松（浙江仙琚制藥股份有限公司，生產(chǎn)批號：161259）；角叉菜膠（德國Sigma公司，批號：C1013-100G）。

1.3 動物 清潔級昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g，購自湖南省斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2016-0002。

2 方 法

2.1 黃牛茶根醇提物的制備參考文獻(xiàn)［4］方法，將黃牛茶根粉碎，過50目篩，加10倍（m/V）量的60%乙醇，浸泡30 min后回流提取1 h，過濾；再次加入8倍量的60%乙醇回流提取1 h，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，配制成每毫升含0.65 g和1.3 g生藥的溶液，置4℃冰箱中備用。

2.2 二甲苯致小鼠耳廓腫脹法［5］取40只小鼠隨機(jī)分成4組，每組10只，分別為：模型組（予蒸餾水）、醋酸地塞米松組（予醋酸地塞米松0.005 g/kg）、黃牛茶根醇提物低劑量組（13 g/kg）、黃牛茶根醇提物高劑量組（26 g/kg）。小鼠均以20 ml/kg的給藥體積灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后1 h，每組小鼠右耳用精密移液槍均勻涂布二甲苯30 μl，雙面致炎，以左耳作為對照。20 min后將小鼠脫頸椎處死，剪下兩耳疊加整齊，用8 mm打孔器打下耳片，精確稱重，由右耳重量減去左耳重量得腫脹度，并按以下公式計算腫脹抑制率。

2.3 棉球致小鼠肉芽腫脹法［6］動物分組和用藥同2.2。各組小鼠分別按20 ml/kg腹腔注射4%水合氯醛麻醉，于小鼠左右兩側(cè)腋窩下分別植入已高溫滅菌的棉球（在烘箱中100℃下干燥12 h至恒重5.0±0.1 mg），縫合，第二天開始連續(xù)以20 ml/kg的給藥體積灌胃給藥7 d，末次給藥后24 h脫頸椎處死小鼠，將左右兩側(cè)腋下的棉球取出，剔除脂肪組織，將棉球放入60℃烘箱干燥12 h至恒重，精密稱量，以左右棉球的平均值與棉球的初始重量相減得肉芽腫質(zhì)量。并按以下公式計算腫脹抑制率。

2.4 角叉菜膠致小鼠足趾腫脹法［7］取50只小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為：空白組（予蒸餾水）、模型組（予蒸餾水）、醋酸地塞米松組（予醋酸地塞米松0.005 g/kg）、黃牛茶根醇提物低劑量組（13 g/kg）、黃牛茶根醇提物高劑量組（26 g/kg）。各組小鼠均以給藥體積為20 ml/kg的劑量灌胃給藥，連續(xù)7 d，每天1次。末次給藥后30 min，除空白組外，余組每只小鼠右后肢足跖皮下注射50 μl 1%角叉菜膠，4 h后脫頸椎處死小鼠，眼球取血1 ml，于踝關(guān)節(jié)處剪下左右后足，稱重，每組小鼠左右足趾質(zhì)量相減得腫脹度。并按以下公式計算足趾腫脹抑制率。

血樣本于室溫下自然凝血2 h，3 500 r/min離心10 min，吸取血清，參照試劑盒說明書步驟測定血清中TNF-α的含量。

2.5 統(tǒng)計分析方法 采用SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），P＜0.05時為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 黃牛茶根醇提物對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用 見表1。與模型組比較，陽性藥醋酸地塞米松組及黃牛茶根醇提物高劑量組均可以顯著抑制二甲苯所引起的小鼠耳腫脹炎癥的發(fā)生（P＜0.05）。

表1 黃牛茶根醇提物對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用

表1 黃牛茶根醇提物對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用

注：與模型組比較，①P＜0.05

組 別模型組醋酸地塞米松組黃牛茶根醇提物低劑量組黃牛茶根醇提物高劑量組n 10 10 10 10劑量（g/kg）—0.005 13 26耳廓腫脹度（mg）6.48±3.88 2.80±1.38①3.85±2.11 2.55±1.89①抑制率（%）—56.79 40.59 60.65

3.2 黃牛茶根醇提物對棉球致小鼠肉芽腫的抑制作用 見表2。與模型組比較，醋酸地塞米松組及黃牛茶根醇提物高、低劑量組均對棉球致小鼠肉芽腫有極顯著的抑制作用（P＜0.01）。

表2 黃牛茶根醇提物對棉球致小鼠肉芽腫的抑制作用

表2 黃牛茶根醇提物對棉球致小鼠肉芽腫的抑制作用

注：與模型組比較，①P＜0.01

組 別模型組醋酸地塞米松組黃牛茶根醇提物低劑量組黃牛茶根醇提物高劑量組n 10 10 10 10劑量（g/kg）—0.005 13 26干肉芽腫質(zhì)量（mg）9.95±1.95 5.66±0.47①7.60±0.70①6.72±0.65①抑制率（%）—43.14 23.58 32.43

3.3 黃牛茶根醇提物對角叉菜膠致小鼠足腫脹的抑制作用

3.3.1 小鼠足趾腫脹的測定 見表3。與空白組比較，模型組小鼠足趾腫脹顯著（P＜0.01）；與模型組比較，醋酸地塞米松組及黃牛茶根醇提物高、低劑量組對小鼠足趾腫脹均有顯著的抑制作用（P＜0.01或P＜0.05）。

表3 黃牛茶根醇提物對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響

表3 黃牛茶根醇提物對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響

注：與空白組比較，①P＜0.01；與模型組比較，②P＜0.05，③P＜0.01

組 別空白組模型組醋酸地塞米松組黃牛茶根醇提物低劑量組黃牛茶根醇提物高劑量組n 劑量（g/kg） 抑制率（%）10 10 10 10 10— —— —0.005 13 26足趾腫脹度（mg）2.98±1.88 61.81±13.88①11.89±4.55③42.64±18.35②40.90±13.01③80.76 31.01 33.83

3.3.2 小鼠血清中的TNF-α含量測定 見表4。與空白組比較，模型組小鼠TNF-α含量顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，醋酸地塞米松組及黃牛茶根醇提物高、低劑量組中的TNF-α含量無顯著改善（P＞0.05）。

表4 黃牛茶根醇提物對足趾腫脹小鼠血清中TNF-α的影響

表4 黃牛茶根醇提物對足趾腫脹小鼠血清中TNF-α的影響

注：與空白組比較，①P＜0.05

組 別空白組模型組醋酸地塞米松組黃牛茶根醇提物低劑量組黃牛茶根醇提物高劑量組n 劑量（g/kg）10 10 10 10 10— —0.005 13 26 TNF-α（ng/L）294.52±61.70 362.65±58.23①311.67±73.74 364.65±41.56 300.08±66.66

4 討 論

炎癥（inflammation）是機(jī)體在遇到各種刺激時所做的防御反應(yīng)，通常表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙。在大多數(shù)情況下，炎癥對于機(jī)體是有益的，這是機(jī)體面對刺激時的一種防御能力，機(jī)體通過炎癥反應(yīng)控制損傷的進(jìn)一步發(fā)生，然后在某些失控的情況下也可能會對機(jī)體有一定的損害。在炎癥發(fā)展過程中，一方面，損傷因子可直接或間接損傷組織和細(xì)胞，另一方面，機(jī)體通過一系列血管反應(yīng)、液體滲出、白細(xì)胞滲出及活化，稀釋、中和、殺傷和包圍損傷因子；同時，通過實(shí)質(zhì)和間質(zhì)細(xì)胞的再生使受損傷的組織得以修復(fù)和愈合。因此可以說炎癥是損傷、抗損傷和修復(fù)的統(tǒng)一過程［8］。

黃牛茶主產(chǎn)于廣西，其藥理活性及作用機(jī)制尚不明確。現(xiàn)采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹、小鼠棉球肉芽腫法以及小鼠足腫脹法觀察黃牛茶根醇提物對小鼠急慢性炎癥的影響，以期為黃牛茶的臨床應(yīng)用及產(chǎn)品開發(fā)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

本試驗(yàn)研究表明，黃牛茶根醇提取物對小鼠耳廓腫脹、棉球肉芽腫以及足腫脹均具有較強(qiáng)的抑制作用，但是對足趾腫脹小鼠血清中的TNF-α炎癥因子含量無顯著影響。在實(shí)驗(yàn)過程中，我們還觀察到陽性藥醋酸地塞米松組小鼠體重減輕，而黃牛茶根醇提取物高、低劑量組小鼠的體重均處于正常狀態(tài)，由此推測黃牛茶副作用少，今后可進(jìn)一步研究其藥理作用，以期擴(kuò)大其臨床應(yīng)用。