燈盞細辛藥材中總黃酮含量測定方法及質(zhì)量標準建立的研究

尹力 高志毅 陳紹明

摘 要：目的：對燈盞細辛藥材中總黃酮含量測定方法進行研究，建立相應的內(nèi)部質(zhì)量標準，對燈盞細辛藥材中總黃酮含量進行控制。方法：用65%的乙醇溶液超聲60分鐘對燈盞細辛藥材進行提取，用紫外分光光度法在510nm處測定吸收度，用蘆丁配制對照品溶液，繪制標準曲線計算燈盞細辛藥材中總黃酮的含量，建立相應內(nèi)部質(zhì)量標準。結(jié)論：用65%乙醇作為提取溶劑超聲處理，方法簡便，精密度，重復性，穩(wěn)定性良好。結(jié)論：本方法簡便，準確，重現(xiàn)性良好，可用于燈盞細辛藥材總黃酮含量檢測，此方法可作為燈盞細辛藥材總黃酮含量控制的質(zhì)量標準。

關(guān)鍵詞：燈盞細辛藥材;總黃酮;含量測定;質(zhì)量標準

燈盞細辛為菊科植物短葶飛蓬的干燥全草，夏、秋二季采挖，除去雜質(zhì)，曬干。味辛、微苦，性溫，歸心，肝經(jīng)。具有活血通絡(luò)止痛，祛風散寒之功效。常用于中風偏癱，胸痹心痛，風濕痹痛，頭痛牙痛等[1]。燈盞細辛中黃酮類化合物為主要有效成分，具有較廣泛的藥理活性，中國藥典將高效液相法檢測野黃芩苷作為質(zhì)量控制依據(jù)。紫外分光光度法檢測總黃酮含量，顯色穩(wěn)定，提取方法簡便。燈盞細辛臨床上主要制劑有燈盞細辛注射液，燈盞花素片，燈盞細辛膠囊等。采用紫外分光光度法[2]檢測燈盞細辛藥材中的總黃酮含量，可以對藥材的質(zhì)量優(yōu)劣提供有效依據(jù)，為后期產(chǎn)品提供質(zhì)量保證。本研究通過實驗，探索燈盞細辛藥材總黃酮的提取，檢測方法等，為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量建立質(zhì)量標準。

一、概述

對燈盞細辛藥材總黃酮含量的測定方法進行系統(tǒng)適用性試驗、精密度試驗、線性關(guān)系與線性范圍考察、準確度試驗（加樣回收試驗）的驗證，確保檢驗方法對被檢物質(zhì)有足夠的專屬性和靈敏度，通過回收率試驗驗證檢驗過程的回收率，用以確定HPLC法在本實驗室的適用性及可控性。

二、驗證內(nèi)容

1.儀器與試藥

北京普析生產(chǎn)紫外分光光度計，型號為：TU-1810

上?？茖a(chǎn)的超聲波清洗器（型號為：SK7210LHC）

梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司生產(chǎn)的電子天平（型號：ME204E/02）

蘆丁對照品主要是經(jīng)過中國食品藥品檢定研究院提供，批號100080-201408

燈盞細辛藥材（云南白藥有限公司購進檢測合格藥材留樣，批號YC2421301）

2.方法

2.1溶液的制備

2.1.1對照品溶液

精密稱取無水蘆丁21.51mg，置于100mL容量瓶中，加60%乙醇適量，微熱使其溶解，放冷，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取25mL，置50mL容量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻，即得（濃度0.099591mg/ml）

2.1.2供試品溶液

取燈盞細辛藥材1g，精密稱定，置錐形瓶中，加入65%的乙醇200ml超聲60分鐘，過濾，濾液蒸干，用60%乙醇溶解殘渣，置100mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，搖勻，過濾。

2.1.3測定法

精密吸取續(xù)濾液0.4mL，置10mL容量瓶中，加30%乙醇使成5.0mL，精密各加（1→20）亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻后放置6分鐘，加（1→10）硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，再放6分鐘，加氫氧化鈉試液4.0mL，分別加水稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法用對照品溶液0.0mL樣品做空白，在510nm處測定吸收度。

3.驗證項目

3.1線性關(guān)系與線性范圍考察

精密量取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于10mL容量瓶中，各加30%乙醇使成5.0mL，精密各加（1→20）亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻后放置6分鐘，加（1→10）硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，再放6分鐘，加氫氧化鈉試液4.0mL，分別加水稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法用對照品溶液0.0mL樣品做空白，在510nm處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。Y=12.5226x+0.0010，R2=0.9996，線性關(guān)系良好。

3.2精密度試驗

取同一批供試品溶液，連續(xù)取6份，進行顯色反應，測定吸光度，帶入標準曲線計算總黃酮含量分別為（5.85%，5.83%，5.85%，5.81%，5.83%，5.84%），RSD為0.26%，≤2%，結(jié)果表明方法精密度良好。

3.3重復性試驗

取同一批供試品，分別制備供試品溶液6份，進行顯色反應，測定吸光度，帶入標準曲線計算總黃酮含量（5.81%，5.86%，5.88%，5.79%，5.82%，5.87%），RSD為0.63%，≤2%，結(jié)果表明方法重現(xiàn)性良好。

3.4 穩(wěn)定性試驗

取同一批供試品溶液，室溫放置0，2，4，8，12，24h進行顯色反應，測定吸光度，帶入標準曲線計算總黃酮含量（5.805%，5.810%，5.822%，5.808%，5.813%，5.826%），RSD為0.14%，結(jié)果表明方法穩(wěn)定性良好。

3.5回收率試驗

采取全程加樣法。取6份已知含量的供試品，取1g，精密稱定，置錐形瓶中，加入65%的乙醇200ml，按0.8：1比例加入蘆丁對照品，超聲60分鐘，過濾，濾液蒸干，用60%乙醇溶解殘渣，置100mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，搖勻，過濾，精密吸取續(xù)濾液0.4mL，依法測定。平均回收率為99.16%（RSD=0.57%）。結(jié)果較滿意，表明本法適用于本實驗室。

4.討論

試驗初期，對提取試劑濃度的選擇，分別加入40%、50%、60%、65%、70%、80%乙醇溶液進行提取，最后試驗結(jié)果顯示濃度40%、50%、60%的乙醇溶液之中，總黃酮含量一直處在上升的趨勢。當?shù)竭_65%濃度乙醇溶液之中時，總黃酮含量達到最大值，與70%乙醇含量基本無差別，比80%乙醇提取含量高。超聲處理和索氏提取器相比較結(jié)果差異小，索氏提取耗時過長，所以最終標準采用65%的乙醇超聲提取作為燈盞細辛藥材總黃酮的提取方法。采用本方法檢測燈盞細辛藥材中的總黃酮檢測成本低，便于操作，能很好的為藥材質(zhì)量把關(guān)。本方法精密度，重復性，穩(wěn)定性良好。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典 2015 年版[S]一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：147

[2]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典 2015 年版[M]四部.北京：化學工業(yè)出版社，2015