氣相色譜法測定紫雪散中麝香酮的含量

歐妮 陳少萍 梁慧敏

【摘 要】目的：建立氣相色譜法測定紫雪散中麝香酮的含量。方法：采用（ZB-Wax）聚乙二醇毛細(xì)管柱（30m×0.25mm×0.25μm）;進(jìn)樣口的溫度為220℃，色譜柱的溫度為180℃，檢測器的溫度為250℃;載氣：氮?dú)?分流比為10∶1;進(jìn)樣量1μL。結(jié)果：麝香酮在濃度為3.767～94.180ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9993）。本方法平均回收率為101.11%（n=6），RSD為2.11%。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確、簡單、便捷，可以用于控制紫雪散中麝香酮的含量。

【關(guān)鍵詞】紫雪散;麝香酮;氣相色譜法;測定

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號】1007-8517（2019）5-0031-04

紫雪散收載于2015年版中國藥典一部，是由石膏、北寒水石、滑石、磁石、玄叁、木香、沉香、升麻、甘草、丁香、芒硝（制）、硝石（精制）、水牛角濃縮粉、羚羊角、人工麝香、朱砂等藥材組成的復(fù)方制劑，具有清熱開竅、止痙安神的功能。由于麝資源的不足，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足許多名貴中成藥（包括急救藥）的生產(chǎn)及臨床用藥，現(xiàn)國家規(guī)定處方中麝香以人工麝香等量替代使用[1]，本處方中的人工麝香芳香以開心竅，三藥配伍，清熱開竅熄風(fēng)，為佐使藥[2]。人工麝香具有降壓、抗缺氧、抗缺血、抗炎等藥理作用，臨床用于高血壓、急性腦缺血損傷及中風(fēng)急性期的治療[3]，常用于配制化妝品，亦在香精料、醫(yī)藥工業(yè)上使用[4]。麝香酮在紫雪散中的含量緊緊關(guān)聯(lián)著藥物的質(zhì)量和藥物的有效性，目前對中成藥中的麝香酮含量測定已有相關(guān)報道[5-7]，但尚未見有對紫雪散中麝香酮的含量測定方法進(jìn)行報道，而在中國藥典中有用氣相色譜法對紫雪散中麝香酮成分進(jìn)行鑒別，供試品提取方法為索氏提取，以供試品色譜峰應(yīng)呈現(xiàn)出與對照品色譜峰保留時間相同的色譜峰而鑒別出紫雪散中含有麝香酮[8]，但并沒有對其含量進(jìn)行明確的規(guī)定，因此建立紫雪散中麝香酮的含量測定方法對控制該藥的質(zhì)量和保證其臨床用藥的有效性、安全性有著重要的意義。麝香酮的含量測定方法有高效液相色譜法、氣相色譜法、薄層掃描法和比色法[9-11]，已有文獻(xiàn)使用GC-MS法測定麝香酮含量[12-14]，因麝香酮在大多數(shù)的中成藥中的含量極低，干擾成分多，氣相色譜法靈敏度和分離效率高，適用于含量低的樣品測定[9]。本文采用氣相色譜法，以麝香酮為對照品對紫雪散中麝香酮含量進(jìn)行測定，該方法準(zhǔn)確、簡單、便捷，可以用于控制紫雪散中人工麝香的麝香酮含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 氣相色譜儀GC-2010（配備火焰離子化檢測器FID，日本島津公司）;GR-202電子分析天平（梅特勒-托利多公司）;KM-1990QFY智能型液晶數(shù)控型超聲波清洗機(jī)（威固特新型設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥 麝香酮對照品（批號：110719-20121，中國藥品生物制品檢定所），紫雪散樣品（批號：150803、141202、140903，分別由3個不同制藥公司提供，方法學(xué)采用批號為150803）;乙酸乙酯（分析純）。

2方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：聚乙二醇（ZB-Wax）毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm，涂層厚0.25μm）;進(jìn)樣口溫度：250℃;色譜柱溫度180℃;FLD檢測器;檢測器溫度250℃;分流比10∶1;進(jìn)樣量1μL。

2.2 樣品的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取麝香酮對照品適量，加入乙酸乙酯配制成0.02g·L-1的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取供試品約1g，精密稱定，置具塞錐形杯中，精密加入乙酸乙酯10mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取人工麝香外根據(jù)處方量及其工藝制得的樣品約5g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法，制備陰性樣品溶液，即得。

取對照品溶液，陰性樣品溶液和樣品溶液分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1～3。結(jié)果表明，樣品中缺麝香酮以外的成分對含量測定無干擾，保留時間8.694min，理論塔板數(shù)均不低于5000。

2.3 線性關(guān)系考察 取麝香酮對照品0.4709g/L，然后分別精密吸取該溶液0.2、0.5、1、2、5mL置25mL容量瓶中，加入乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，并依照上述方法測定，結(jié)果詳見圖4。以濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)（X），以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸處理，求得回歸方程：Y= 1639.2X-69.329，r = 0.9993。麝香酮在3.767～94.180ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 供試品（批號：150803），按2.2.2項(xiàng)下的供試品制備方法制備供試品溶液。以1μL為進(jìn)樣量，測定樣品中麝香酮的峰面積。然后放置0、2、4、6、10h后按上述色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果RSD為0.42%。試驗(yàn)表明，在24h內(nèi)被測物穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取相同批號的樣品（批號：150803），共6份，按2.2.2項(xiàng)下的提取方法提取供試品溶液，進(jìn)樣量為1μL，按樣品含量測定方法測定，結(jié)果測得樣品中麝香酮的含量為0.1082mg/g，RSD為2.77%。試驗(yàn)表明本方法重復(fù)性良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 以2.3項(xiàng)下對照品溶液，按上述相同色譜條件連續(xù)測定6次，所得平均峰面積為28800.23，RSD=0.46%，試驗(yàn)表明本方法的精密度較好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量樣品（批號：150803，麝香酮含量為0.1082mg/g）0.5g，共取6份，置具塞錐形瓶中，精密加入麝香酮對照品溶液適量，按樣品含量測定方法測定，計算回收率.結(jié)果麝香酮的的平均回收率（n=6）為101.11%;RSD為2.11%，詳見表1。

2.8 樣品測定 取3個不同廠家的紫雪散共3批，按正文含量測定項(xiàng)下的方法制得供試品溶液，測定麝香酮的含量，結(jié)果3批含量分別為（0.118±0.002）mg/g、（0.066±0.001）mg/g、（0.075±0.001 ）mg/g。詳見表2。

3 討論

根據(jù)麝香酮的極性，參考相關(guān)的文獻(xiàn)[15-22]，本文提取溶劑分別考察了無水乙醇、乙酸乙酯、環(huán)己烷、甲醇等有機(jī)溶劑對樣品進(jìn)行提取，結(jié)果分析表明，用乙酸乙酯作為提取溶劑，雜質(zhì)干擾較小，而其余均存在不同程度的干擾，容易影響測定結(jié)果，所以選用乙酸乙酯作為提取溶劑。對常用的3種提取方法浸漬、超聲、回流進(jìn)行考察，3種方法分別為：超聲30min、浸漬4h、回流1h，超聲30min與浸漬4h提取效果基本相同，而回流提取樣品麝香酮的含量降低，分析原因在于麝香酮有揮發(fā)性，回流過程中較高溫度使麝香酮的含量在提取過程中有所減失，故排除回流作為提取方法。所以，在提取時間和提取方法的簡便性上綜合比較，選用超聲30min作為提取方法。對提取方法為超聲時長進(jìn)行了考察，結(jié)果超聲30min能夠達(dá)到滿意的效果。

目前人工麝香的質(zhì)量控制指標(biāo)尚未得到全面的控制以及采用，所以在制備紫雪散時選用與購買的人工麝香的質(zhì)量會有所差別，而這個差別也是影響麝香酮在該藥中含量的原因之一，但人工麝香配方工藝嚴(yán)格保密[23]，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也未見有相關(guān)的報道，所以在原料藥人工麝香的選取上也會對紫雪散中麝香酮的含量造成影響。本文通過對麝香酮的含量測定研究結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，目前市面上的紫雪散，相同廠家，不同批號測定出的麝香酮的含量也有所不同，分析其原因可能為本文中檢測的紫雪散生產(chǎn)年份不同，即生產(chǎn)的時間上有所區(qū)別，而麝香酮在放置環(huán)境與儲存時間的長短也會影響麝香酮在紫雪散中的含量[24-25]; 人工麝香的質(zhì)量控制指標(biāo)尚未得到全面的控制以及采用，所以在制備紫雪散時選用與購買的人工麝香的質(zhì)量會有所差別，而這個差別也是影響麝香酮在該藥中含量的原因之一。因此本文建立紫雪散中麝香酮的含量測定方法有著重要的作用，本文采用氣相色譜法進(jìn)行測定，該方法具有操作簡便、迅速、準(zhǔn)確、干擾少、精密度與重復(fù)性較好等優(yōu)點(diǎn)，可用來測定紫雪散中麝香酮的含量。

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（收稿日期：2019-01-03 編輯：陶希睿）